罗哌卡因对大鼠脂肪干细胞增殖、凋亡及成骨分化的影响观察

目的观察罗哌卡因对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法分离并提取大鼠ADSCs,传代培养后,取对数生长期ADSCs分别加入含0 mg/mL、200 mg/mL、500 mg/mL罗哌卡因的培养基100µL,分别记为对照组、200 mg/mL组、500 mg/mL组。取各组细胞,继续培养24、48、72 h时,采用CCK-8实验观察细胞增殖能力。取各组细胞,继续培养24 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。取各组细胞,加入成骨诱导培养基,观察各组细胞成骨分化能力,包括成骨潜能(以ALP活性表示)、矿化能力(以OD值表示)和成骨相关蛋白骨钙素(OCN)表达水平。结果与对照组相比,200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞培养24、48、72 h时的增殖能力均显著下降,且500 mg/mL组低于200 mg/mL组。对照组、200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞凋亡率分别为2.78%±0.23%、4.15%±0.62%、5.88%±0.78%,组间相比,P均<0.05。与对照组相比,200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞ALP活性、矿化能力、OCN蛋白表达水平均显著下降,且500 mg/mL组低于200 mg/mL组。结论200 mg/mL、500 mg/mL的罗哌卡因均可抑制大鼠ADSCs增殖能力,降低其成骨能力,促进其凋亡,且500 mg/mL罗哌卡因的抑制效果高于200 mg/mL。

8周运动预适应增强脂肪干细胞治疗心肌梗死大鼠的效果

背景:干细胞移植是心肌梗死的崭新疗法,然而梗死区域极其恶劣的微环境造成干细胞存活率低下并导致远期疗效甚微。运动预适应是一种通过运动诱导机体产生内源性保护效应的方式,可作为心脏康复预防与治疗的新策略。目的:评估运动预适应是否能够增强大鼠心肌梗死后脂肪干细胞移植的心脏保护效应,探讨血管生成在其中的作用机制。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为对照组、造模组、干细胞组以及干细胞运动组。利用冠状动脉闭塞术制作急性心肌梗死模型,对照组同期行假手术;干细胞运动组于造模前进行8周有氧运动,造模后30 min进行脂肪干细胞移植;干细胞组仅进行脂肪干细胞移植。干细胞移植后1 d和7 d,利用免疫印迹法测定心肌总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)、总内皮型一氧化氮合酶(t-eNOS)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白表达量,计算p-Akt/t-Akt和p-eNOS/t-eNOS比值;4周后利用彩色多普勒超声诊断系统检测心脏结构与功能以及心肌血流量,TTC染色法检测心肌梗死面积,Masson染色法检测心肌间质胶原沉积,免疫荧光染色法测定心肌毛细血管密度,TUNEL染色法评估心肌细胞凋亡。结果与结论:(1)干细胞移植后4周:与对照组比较,造模组左心室缩短分数、左心室射血分数、心肌毛细血管密度和心肌血流量下降(P<0.05),心肌梗死面积、胶原容积分数和细胞凋亡增加(P<0.05);与造模组比较,干细胞组上述指标(除左心室缩短分数和左心室射血分数外)得到改善(P<0.05);与干细胞组比较,干细胞运动组以上各参数进一步改善(P<0.05)。(2)干细胞移植后1 d:与对照组比较,造模组t-Akt、p-Akt、VEGF、t-eNOS、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值均无显著性变化(P>0.05);与造模组比较,干细胞组上述指标均无显著性变化(P>0.05),干细胞运动组磷酸化p-Akt蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt比值上调(P<0.05)。(3)干细胞移植后7 d:与对照组比较,造模组p-Akt、VEGF、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值下降(P<0.05);与造模组比较,干细胞组各参数均无显著性变化(P>0.05),干细胞运动组p-Akt、VEGF、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值升高(P<0.05)。结果表明:运动预适应可增强脂肪干细胞对心肌梗死大鼠心脏重塑的治疗效果,其机制与促进心肌血管生成并增加血流灌注有关。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

电针促进脂肪干细胞在体成骨分化改善骨质疏松的机制

目的 探讨电针(electroacupuncture, EA)联合自体脂肪干细胞(adipose derived stem cells, ADSCs)移植对去卵巢大鼠骨质疏松的作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、EA组、ADSCs组和EA+ADSCs组,每组10只。采用大鼠卵巢切除建立模型,在造模手术后2个月开始干预,EA组予双侧“脾俞”“肾俞”电针治疗,频率2 Hz,连续波,强度1 mA。每次10 min,每周3次,连续8周。ADSCs组将绿色荧光蛋白标记的ADSCs经尾静脉移植体内。每次1×10~6个,每周1次,连续8周。EA+ADSCs组予电针治疗,联合自体ADSCs移植,干预连续8周。检测大鼠股骨骨微结构及骨组织病理变化、血清骨代谢指标,股骨Wnt3a、β-catenin和Runx2基因及蛋白表达,及Runx2/β-catenin蛋白的共表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨密度显著降低(P<0.01),骨小梁间距变大;与模型组比较,EA组大鼠骨密度显著增高(P<0.01),骨小梁数量和厚度增加,Wnt3a、β-catenin、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Runx2/β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.01);ADSCs组Runx2的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。EA+ADSCs组骨小梁结构均优于ADSCs组和EA组,并且Runx2/β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论 ADSCs移植联合电针可以有效改善卵巢摘除大鼠模型骨质疏松状况,这种作用可能和激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

脂肪干细胞胶填充颞部凹陷的临床应用

目的 探讨脂肪干细胞胶填充颞部凹陷的临床应用效果。方法 回顾性分析2021年3月至2023年3月广东省妇幼保健院医学美容科收治的因颞部凹陷要求手术修复患者24例(48侧)临床资料。采用肿胀吸脂术抽取皮下脂肪,制备脂肪干细胞胶。采用深注浅铺法(选取颞部凹陷最深处2~4个点进针,分别于颞肌-骨膜间隙锐针注射、颞浅筋膜浅层钝针平铺)进行脂肪干细胞胶移植。术后定期随访,调查凹陷严重程度评价量表,医师、患者及第三方满意度。结果 所有患者均顺利完成手术,单侧移植剂量6.0~12.0 mL,平均8.9 mL。术后有2例皮肤出现局部淤青,1周左右逐步消退,未出现严重并发症。术后随访 6~12个月,颞部轮廓及饱满度、皮肤质地均得到改善,无局部结节、无凹凸不平。32侧(66.7%)颞部凹陷术后改善≥2级,医师、患者双方及第三方满意率均大于 87.5%。结论 应用深注浅铺法行脂肪干细胞胶填充颞部的临床效果好,简单易行,值得推广。

脂肪干细胞对心肌梗死大鼠心肌组织中miR-423-5p及PI3K/AKT通路的影响

目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)对心肌梗死模型大鼠心肌组织中miR-423-5p、PI3K、AKT的影响。方法将实验大鼠随机分为对照组、心梗模型组(模型组)、心梗模型+rADSCs组(干预组),每组6只。对照组大鼠麻醉后仅开胸后缝合,模型组、干预组大鼠麻醉后结扎前降支,干预组在缝合前心脏原位注射大鼠脂肪干细胞(10^(6)个细胞/只)。观测并称量各组大鼠心脏质量,用HE染色及Masson染色观察心肌组织病理变化,实时荧光定量PCR检测miR-423-5p、PI3K、AKT的mRNA表达情况,Western blot方法检测AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。结果与对照组相比,模型组、干预组大鼠的心脏组织质量显著升高,其中模型组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05);病理结果显示模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞变性坏死严重,胶原纤维沉淀,可见明显的炎性浸润,干预组的大鼠心肌细胞的坏死情况、炎性浸润、胶原纤维沉淀较模型组明显降低;与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中PI3K、AKT、miR-423-5p的mRNA表达水平和p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平显著升高(P<0.05);干预组中以上指标的表达水平较模型组显著降低(P<0.05)。结论大鼠脂肪干细胞可以降低心梗模型大鼠心肌组织损伤和纤维化,改善梗死后的心功能。其内在调控机制可能为分泌miR-423-5p,抑制PI3K、AKT的转录水平和蛋白磷酸化水平,发挥保护和治疗心肌梗死的作用。

基于线粒体自噬探讨黄芪甲苷孵育的脂肪干细胞对糖尿病肾脏疾病大鼠的保护作用

目的观察尾静脉移植黄芪甲苷(astragaloside,Ast)孵育的人脂肪干细胞(human adipose derived stem cell,h ADSC)对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾损伤的修复作用,探讨其可能机制。方法将21只SD大鼠按随机数字表法分为正常组(5只)、模型组(6只)、hADSC组(5只)及Ast-hADSC组(5只),后3组大鼠建立DKD模型,hADSC组及AsthADSC组尾静脉注射hADSC或Ast-hADSC悬液,每2周1次,共6次,模型组予等量生理盐水。检测肾功能、血脂、尿微量白蛋白/尿肌酐及尿蛋白定量,HE及Masson染色观察肾脏病理,激光共聚焦观察hADSC在肾脏定植情况,免疫组化及免疫蛋白印迹观察肾组织电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated-protein-lightchain-3,LC3)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、自噬底物P62蛋白、磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,Pink1)及E3泛素连接酶(E3 ubiquitin,Parkin)蛋白的表达,透射电镜观察线粒体及自噬小体情况。结果(1)与模型组比较,hADSC组及Ast-hADSC组血清总胆固醇[(2.65±0.04)mmol/L、(2.30±0.29)mmol/L比(3.31±0.91)mmol/L]、尿微量白蛋白/尿肌酐[(58.91±11.86)mg/g、(44±23.82)mg/g比(101.03±46.88)mg/g]及24 h尿蛋白定量[(321.18±88.71)mg、(136.35±66.01)mg比(408.67±113.95)mg]均下降(P<0.05),体重[(240.20±26.43)g、(274.00±17.89)g比(193.60±18.57)g]增加(P<0.05);Ast-hADSC组体重,24 h尿蛋白定量较hADSC组疗效更显著(P<0.05)。(2)与模型组比较,hADSC组及Ast-hADSC组三酰甘油、低密度脂蛋白、尿素氮、高密度脂蛋白差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)肾脏病理:hADSC组及AsthADSC组大鼠肾损伤减轻,肾脏指数及肾小球截面积增大减轻(P<0.05);Ast-hADSC组改善更显著。(4)激光共聚焦:hADSC组及Ast-hADSC组可见少量红色荧光表达。(5)免疫组化及免疫蛋白印迹:hADSC组及Ast-hADSC组LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Pink1、Parkin蛋白的表达增加(P<0.05),P62蛋白表达减少(P<0.05);Ast-hADSCs组疗效更显著。(6)透射电镜:模型组线粒体肿胀变形、碎片较多,自噬小体的数量较少;hADSC组及Ast-hADSC组可见较多的自噬小体,肿胀变形的线粒体及线粒体碎片较少;Ast-hADSC组疗效更显著。结论尾静脉移植hADSC可恢复DKD大鼠肾组织中线粒体自噬,减轻肾损伤,经Ast孵育后疗效更显著。

过表达或沉默lncRNA SNHG8的脂肪干细胞对血管内皮细胞功能障碍的影响

目的:研究过表达或沉默长链非编码RNA(lncRNA)SNHG8的脂肪干细胞(ADSCs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活力、迁移、成管及表达血管活性因子的影响。方法:(1)流式细胞术及成脂、成骨诱导实验鉴定病态肥胖患者来源的脂肪干细胞(O-ADSCs);RT-qPCR检测健康人群来源的脂肪干细胞(H-ADSCs)及O-ADSCs内lncRNA SNHG8的表达。(2)Transwell建立ADSCs与HUVECs间接共培养48 h体系,设置O-ADSCs+HUVECs组、HADSCs+HUVECs组和HUVECs组,通过RT-qPCR和Western blot检测HUVECs内血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素1(ET-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA及蛋白表达水平。(3)进一步构建lncRNA SNHG8过表达或沉默慢病毒并感染O-ADSCs,设置O-ADSCs-OE-SNHG8+HUVECs组、O-ADSCs-OE-NC+HUVECs组、O-ADSCs-sh-SNHG8+HUVECs组和O-ADSCs-sh-NC+HUVECs组,共培养48 h后,通过CCK-8实验、划痕实验和小管形成实验分别检测HUVECs活力、迁移能力和成管能力;RT-qPCR和Western blot检测HUVECs内AngⅡ、ET-1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平;硝酸还原酶法检测HUVECs内NO含量。结果:(1)所培养细胞经鉴定符合ADSCs特征;(2)与H-ADSCs比较,lncRNA SNHG8在O-ADSCs中显著高表达(P<0.01);(3)与H-ADSCs+HUVECs和HUVECs组相比,O-ADSCs+HUVECs组中HUVECs内AngⅡ和ET-1的mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01);(4)过表达lncRNA SNHG8的OADSCs可增强HUVECs的活力、迁移能力及成管能力,上调HUVECs中AngⅡ和ET-1的mRNA及蛋白表达水平,下调eNOS的mRNA及蛋白表达水平,减少HUVECs内NO含量(P<0.05);而沉默O-ADSCs中lncRNA SNHG8的表达则呈现相反的结果(P<0.05)。结论:(1)O-ADSCs可通过旁分泌作用增强内皮细胞活力、迁移能力及成管能力;(2)过表达lncRNA SNHG8的O-ADSCs促使内皮细胞分泌舒张-收缩因子失衡,导致血管内皮细胞功能障碍。

深度烧伤痂脂肪干细胞源性外泌体蛋白组学差异的初步研究

目的:分析不同脂肪组织来源干细胞源性外泌体(ADSC-Exos)蛋白质组学差异,为深度创面修复提供理论依据。方法:取烧伤痂组织与正常皮下脂肪组织,分离脂肪干细胞(ADSC),通过光镜观察、Western blot(WB)、成骨分化、成脂分化鉴定ADSC。差速离心方法收集脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos),通过电镜观察、WB法、Nanosight分析仪鉴定ADSC-Exos;通过非标记定量蛋白质谱(LFQ)技术分析两组患者ADSC-Exos蛋白质表达水平差异。结果:成功分离ADSC,光镜下呈纤维状,WB显示细胞稳定表达CD29及CD105,成骨诱导分化细胞内见红色密集钙结节、成脂诱导分化细胞内存在折光性好的透亮脂滴。成功分离ADSC-Exos,电镜下呈双膜性结构,WB显示外泌体可稳定表达表面标志物CD63及CD81,Nanosight显示外泌体均匀对称分布,直径30~150 nm。两组表达水平差异蛋白质184种,差异倍数显著上调前10种蛋白:丝裂原活化蛋白激酶3、丝裂原活化蛋白激酶1、转化生长因子β-1前蛋白、细胞凋亡调节因子BAX、热休克蛋白HSP 90α、微管蛋白α-1B链、腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白2、钙调素-3、热休克蛋白HSP 90β、蛋白激酶Cβ型;差异倍数显著下调前10种蛋白:激肽源B1、激肽源1、补体家族(C3、C1q C链、C1q B链、C5、C1q A、C4B、C4A、C9)。结论:烧伤痂下组织来源ADSC-Exos蛋白与正常组织的表达存在明显差异,可能与烧伤创面修复、抑制瘢痕过度增生及抗炎与机体免疫等密切相关。

关节腔内注射脂肪干细胞对颞下颌关节骨关节炎模型兔关节软骨破坏的修复作用及其机制

目的:探讨关节腔内注射脂肪干细胞(ADSCs)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)模型兔关节软骨破坏的修复作用,并阐明其可能的作用机制。方法:27只兔随机分为对照组、模型组和ADSCs组。提取兔ADSCs进行培养,采用碘乙酸钠(MIA)注射法制备兔TMJOA模型。ADSCs组TMJOA模型兔颞下颌关节腔内连续2次注射1.0×10^(6)mL^(-1)ADSCs,对照组和模型组兔颞下颌关节腔内注射等量生理盐水,8周后取各组兔颞下颌关节行显微CT(Micro-CT)扫描,分析各组兔髁突组织的骨体积分数(BV/TV)、骨表面积/骨体积比(BS/BV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间距(Tb.Sp)和骨小梁数(Tb.N),HE染色观察各组兔髁突组织病理形态表现,免疫组织化学染色法检测各组兔髁突组织中SRY相关高迁移率族盒基因9(SOX9)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和血管内皮生长因子(VEGF)的定位情况和蛋白表达水平,Western blotting法检测各组兔髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平。结果:Micro-CT扫描,与对照组比较,模型组兔髁突组织的BV/TV、Tb.Th和Tb.N明显降低(P<0.05),BS/BV和Tb.Sp明显升高(P<0.05);与模型组比较,ADSCs组兔髁突组织的BV/TV、Tb.Th和Tb.N明显升高(P<0.05),BS/BV和Tb.Sp明显降低(P<0.05)。HE染色,对照组兔髁突软骨表面光滑,层次清晰,结构完整;与对照组比较,模型组兔髁突表面不规则,肥大层增厚,出现细胞缺失区和细胞簇状区;与模型组比较,ADSCs组兔髁突组织病理损伤明显减轻。免疫组织化学染色,与对照组和ADSCs组比较,模型组兔髁突组织中棕褐色颗粒增多,主要集中在肥大层,特别是骨软骨结合部位,髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,ADSCs组兔髁突组织肥大层和骨软骨结合部位棕褐色颗粒明显减少,髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与对照组比较,模型组兔髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,ADSCs组兔髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:关节腔内注射ADSCs可有效修复TMJOA的软骨破坏,减轻软骨损伤,减缓骨关节炎进展。

不同转染方式用于modRNA转染人脂肪干细胞的初步研究

目的筛选更优的转染方式,探讨其用于modRNA转染人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cell,hADSC)并表达特定蛋白的可行性。方法分别采用2种电转染方式Optimization4及Optimization6和脂质体转染试剂RNAiMAX,将modGFP转染到hADSC中去。应用流式细胞分析仪和荧光显微镜分析,比较不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况;通过细胞死活染色,评估转染后24 h细胞的存活情况;将更优的电转方式与RNAiMAX用于modVEGFA转染hADSC,收集其培养24 h的上清用于人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,hUVECs)成管和transwell迁移实验,并与基质胶混合后注射于裸鼠皮下,通过大体观、HE染色及免疫荧光染色,分析其在体内促进血管再生的情况。结果Optimization6电转转染hADSC的效率为87.75%±1.52%,高于Optimization4转染组(80.85%±1.48%)和RNAiMAX转染组(81.80%±1.08%),且荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。3种转染方式对细胞的毒性均较小,无统计学差异。与RNAiMAX相比,Optimization6电转能更高效地介导modVEGFA转染hADSC,能更好地促进体外hUVECs成管和迁移,皮下血管再生的效果也更佳。结论相比于RNAiMAX和Optimization4电转染,Optimization6电转方式转染hADSC的效率更高,蛋白表达高效,且能在体内外快速高效促进血管再生。

脂肪干细胞基质胶在糖尿病创面治疗中的研究进展

随着糖尿病发病率的增加,由慢性持续性高血糖所引起的难愈性创面长期困扰着糖尿病患者。脂肪细胞外基质/基质血管组分凝胶(SVF-gel)中因含有高度浓缩的细胞外基质和基质血管组分(SVF),在为细胞及细胞因子功能的发挥提供最适微环境的同时,具有促进创面血管新生、抑制炎症反应和刺激上皮细胞增殖分化等功能,最终达到修复难愈性创面的目的。文章主要就SVF胶的制备、成分以及在糖尿病创面治疗中的机制和应用进行综述。

基因工程促进脂肪干细胞成骨分化的研究进展

大节段骨缺损是骨科、整形外科的常见疾病,严重影响患者的外形和功能。目前临床上常用自体骨移植修复,但这种方法存在着供区骨组织有限、易坏死等缺点。在过去的几十年中,骨组织再生、干细胞移植等方法为修复大量骨组织缺失提供了新的策略。脂肪干细胞(ASCs)是来自脂肪的多能干细胞,可以通过处理诱导分化为成骨细胞,实现骨再生,具有巨大的临床应用潜力。多年来,随着基因工程技术的不断发展,出现了许多对ASCs进行基因修饰以促进其成骨的方法.

脂肪干细胞外泌体提高脂肪移植存活率的研究进展

脂肪移植是外科治疗组织缺损、凹陷的重要治疗手段,脂肪细胞具有来源丰富、良好的组织相容性等优点,成为了整形外科治疗的一个重要手段。但是,传统的脂肪移植存在移植物存活率低、术后效果不稳定等局限,随着细胞辅助脂肪移植的发展,脂肪移植的存活率有了一定的提高,却没有根本解决高吸收率的问题,且可能存在致瘤等潜在风险。脂肪干细胞外泌体的发现有望改变这一现状。

诱导人脂肪干细胞分化为胰岛素分泌细胞:三种不同诱导分化方案的比较

目的将脂肪干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞是糖尿病治疗的新策略。目前已报道的诱导分化方案效率差异较大。本研究拟对三种诱导分化方案的分化效率进行比较。方法将第三代脂肪干细胞自聚集成微球,使用三种诱导分化方案(一步诱导法、两步诱导法、三步诱导法)。采用PCR和免疫荧光检测三种方案中关键基因和蛋白的表达水平,通过葡萄糖刺激胰岛素分泌实验检测终产物的功能。结果对比三种方案,三步诱导法诱导出的胰岛素分泌细胞其关键转录因子INS、NKX6.1、PDX1的基因表达量明显增加。关键蛋白C肽和NKX6.1/PDX1在胰岛素分泌细胞中共表达。三步诱导法能显著提高产物的胰岛素分泌量。结论在相同条件下,三步诱导法的分化效率优于其他两种方案。本研究为建立高效、安全的胰岛素分泌细胞诱导分化方案提供了依据。

富血小板血浆联合脂肪干细胞移植加速伤口愈合的临床前研究:系统评价和Meta分析

目的:研究表明,富血小板血浆和脂肪来源干细胞的组合可加速皮肤损伤的愈合,但仍缺乏二者联合治疗的系统证据。该文评价两种干预措施在临床啮齿动物皮肤创伤模型中的联合疗效。方法:检索PubMed、Embase和Cochrane及CNKI数据库,选择各数据库建库至2023年7月发表的富血小板血浆与脂肪干细胞移植联合使用以及单独使用于实验动物皮肤伤口的研究,以伤口愈合及伤口中转化生长因子β、CD31、Ⅰ型胶原蛋白和血管内皮生长因子为观察指标,使用RevMan 5.3和Stata 15.0软件对数据进行Meta分析。结果:共纳入12项研究,其中8项研究使用大鼠作为实验对象,4项研究使用小鼠作为实验对象,实验组采用富血小板血浆联合脂肪干细胞移植治疗,对照组采用单独的富血小板血浆治疗。Meta分析结果显示,实验组治疗后第3,7,10天的伤口愈合率均大于对照组[SMD=2.65,95%CI(1.29,4.01),Z=3.81,P=0.0001;SMD=3.38,95%CI(2.47,4.30),Z=7.24,P<0.00001;SMD=2.62,95%CI(1.50,3.73),Z=4.61,P<0.00001],实验组伤口愈合时间短于对照组[SMD=-2.12,95%CI(-3.5,-0.74),P=0.003],实验组伤口中的转化生长因子β表达、CD31阳性率、Ⅰ型胶原蛋白及血管内皮生长因子表达均高于对照组[SMD=5.65,95%CI(1.22,10.08),Z=2.50,P=0.01;SMD=2.49,95%CI(1.96,3.02),Z=9.28,P<0.00001;SMD=3.44,95%CI(0.72,6.17),Z=2.48,P=0.01;SMD=2.38,95%CI(0.97,3.79),Z=3.30,P=0.0010]。结论:研究结果表明,富血小板血浆与脂肪干细胞联合治疗可提高伤口愈合率、缩短伤口愈合时间,同时增加转化生长因子β、CD31、Ⅰ型胶原蛋白和血管内皮生长因子的表达,加速伤口愈合。由于模型的局限性,需要进行更多的动物实验和临床试验进行进一步证实。

泛素特异性蛋白酶42调节人脂肪干细胞成骨向分化

目的:探索泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)体内外成骨向分化中的作用。方法:用慢病毒转染hASCs,构建敲低和过表达USP42的稳定转染细胞系,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性定量、茜素红S矿化结节染色及定量,检测实验组(敲低组和过表达组)及对照组在成骨诱导下hASCs成骨向分化能力的差异,通过定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测实验组及对照组成骨相关基因的表达水平,通过蛋白免疫印迹实验检测实验组及对照组成骨相关蛋白的表达水平,通过裸鼠异位成骨实验评价USP42在hASCs体内成骨向分化中的作用。结果:敲低组USP42的mRNA和蛋白表达显著低于对照组,过表达组显著高于对照组。成骨诱导7 d后,敲低组的ALP活性显著高于对照组,过表达组显著低于对照组;成骨诱导14 d后,敲低组茜素红S染色显著深于对照组,过表达组显著浅于对照组。qRT-PCR结果显示,成骨诱导14 d时,敲低组ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COLⅠ)的mRNA表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。蛋白免疫印迹实验结果显示,成骨诱导14 d时敲低组runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、OSX和COLⅠ蛋白表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。裸鼠皮下移植物苏木精-伊红染色结果显示,敲低组类骨组织百分比较对照组显著增高。结论:敲低USP42显著促进hASCs的体内外成骨向分化,过表达USP42显著抑制hASCs的体内成骨向分化,USP42可作为骨组织工程学潜在治疗靶点。

脂肪干细胞的分离培养、生物学特性及其应用研究

对人体脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)进行原代分离、培养和鉴定,期望建立一套以自体移植治疗为目标的脂肪干细胞原代分离与培养扩增的标准方法,为研究类风湿性关节炎的移植治疗提供基础。使用K-SFM、M-199和DMEM-低糖3种培养基,分别培养分离的脂肪干细胞,比较细胞形态与传代、复苏活力;通过流式细胞仪检测细胞表面标志物CD34、CD45、CD73、CD105和HL-ABC,判断分离培养细胞的特异性与纯度,比较不同培养状态下细胞特征是否有差异;对几种培养条件下的细胞分别进行成软骨和成脂肪诱导,判断和比较不同处理之间干细胞特性是否有改变。经此方法得到的细胞通过流式细胞仪检测细胞表面标志物,符合脂肪干细胞的表面抗原特征,且干细胞纯度较高;而不同的培养体系下,细胞都有较好的适应性,传代或者冻存复苏后仍有较高的细胞活力;在成软骨和成脂肪的诱导实验中,细胞显示出较好的干细胞分化潜能。根据此优化方法,得到的干细胞通过质量检测,无异源物污染、无交叉污染、无遗传变异危险,并保持高活力与明显干细胞特性,可用于进行自体干细胞移植治疗类风湿性关节炎的基础研究。

脂肪干细胞及其衍生物促慢性创面愈合的研究进展

慢性创面一直是临床治疗中十分棘手的难题。脂肪干细胞(Adipose-derivedstemcells,ADSCs)因来源丰富,分离简单且容易扩增,多次传代后仍能保持其生物学特性等优点,已成为近年组织修复与再生研究的热点,利用ADSCs促进创面愈合也已被证明是一项十分具有前景的治疗策略。本文对ADSCs及其无脂肪细胞衍生物促慢性创面愈合的研究现状进行综述,以期为今后深入研究和临床应用提供参考。

脂肪干细胞对糖尿病大鼠勃起功能障碍的机制研究

目的探讨脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)对糖尿病(Diabetes mellitus,DM)大鼠勃起功能障碍(Erectile dysfunction,ED)的作用机制,评价ADSCs对DMED的疗效。方法选取12周龄性成熟的30只雄性SD大鼠,按照随机数字表法选择10只大鼠仅给予标准饲料喂养作为正常对照组,剩余的20只大鼠则接受高脂饲料喂养结合腹部注射链脲佐菌素(STZ)以构建糖尿病模型。对成模的DM大鼠行阿扑吗啡(APO)实验筛选出符合DMED大鼠(APO实验中无勃起者),将存活的DMED大鼠随机分成模型组(n=8)和ADSCs治疗组(n=7),前者阴茎海绵体内注射PBS缓冲液,后者则注射ADSCs悬液。12周后,通过海绵体内压(ICP)与平均动脉压(MAP)的比值测评阴茎勃起功能,以及Masson染色、免疫荧光染色对ADSCs进行疗效评价。结果与正常组比较,模型组大鼠ICP/MAP、海绵体平滑肌/胶原纤维降低(P<0.05);与模型组比较,ADSCs治疗组ICP/MAP、海绵体平滑肌/胶原纤维升高(P<0.05);模型组大鼠阴茎海绵体组织中CD31表达水平显著比正常组低(P<0.01),但与ADSCs治疗组无明显差异(P>0.05)。结论ADSCs移植疗法可以改善DMED大鼠阴茎勃起功能和延缓阴茎海绵体纤维化的进展,而CD31可能在ADSCs影响内皮细胞含量过程中占非主导地位,难以独立其他因素发挥突出作用。