脂肪干细胞移植对Duchenne型肌营养不良症鼠神经肌肉再生单位的影响

背景:目前,Duchenne型肌营养不良症尚无有效治疗方法,之前的研究表明基因治疗和干细胞移植治疗是可能的"治愈"方法。实验拟将两者结合起来,在动物模型上观察其疗效,并验证之前提出的神经肌肉再生单位的假说。目的:探讨脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症的有效性和可行性,观察细胞移植对肌纤维、新生血管及神经末梢的影响。方法:体外分离培养mdx鼠脂肪干细胞,经杆状病毒基因载体进行基因修饰,用于移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型鼠。移植后检测实验动物的血清肌酸激酶水平、肌肉病理改变及肌肉内dystrophin表达;免疫荧光检测细胞移植后血管、肌肉和神经再生情况。结果与结论:细胞移植后,能够重建模型鼠的dystrophin表达,一定程度上减轻并逆转肌肉的病理损害,进而降低血清激酸激酶水平;此外,细胞移植后能够形成干细胞来源的肌纤维、血管内皮细胞和神经末梢。这些证据表明,脂肪干细胞移植是有希望治疗Duchenne型肌营养不良症的方法之一。

脂肪干细胞移植修复急性挤压伤性肾损伤

背景:脂肪干细胞具有易获取、易分离、创伤小、增殖速度快等优点。目前肾损伤的治疗手段较局限,脂肪干细胞可能会为其提供一个新的治疗途径。目的:探讨脂肪干细胞移植对挤压伤性急性肾损伤大鼠肾功能的影响及其机制。方法:体外复苏冻存的鼠脂肪干细胞并制备脂肪干细胞悬液,使用PKH-26对脂肪干细胞进行荧光标记。从66只SD大鼠(北京维通利华动物实验技术有限公司提供)中随机选取20只大鼠作为正常对照组;余46只大鼠钳夹双后肢近端建立挤压伤所致急性肾损伤病理模型,最终40只大鼠建模成功,随机分为模型组和脂肪干细胞组,每组20只。造模成功后6 h,模型组大鼠尾静脉注射20μL生理盐水,脂肪干细胞组大鼠尾静脉注射20μL PKH-26标记的脂肪干细胞(细胞浓度为3×106 L-1),1次/d,连续3 d。移植后第1,3,14,21天检测各组大鼠血清肌酐和尿素氮水平。移植后第3,21天,取各组大鼠左肾组织进行苏木精-伊红染色、TUNEL染色、RT-PCR及Western blot检测。结果与结论:(1)细胞移植后第1,3,14,21天,模型组大鼠血清肌酐和尿素氮水平均显著高于正常对照组(P <0.05),脂肪干细胞移植组大鼠血清肌酐和尿素氮水平显著低于模型组(P <0.05);(2)细胞移植后第3,21天,脂肪干细胞组和模型组大鼠肾脏损伤评分、肾脏细胞凋亡率显著高于正常对照组(P <0.05),脂肪干细胞组肾脏损伤评分、肾脏细胞凋亡率显著低于模型组(P <0.05);(3)细胞移植后第3,21天,模型组及脂肪干细胞组肾组织中bax及Caspase-3基因和蛋白相对表达水平均高于正常对照组(P<0.01);脂肪干细胞组肾组织中bax及Caspase-3基因和蛋白相对表达水平显著低于模型组(P<0.05);(4)结果表明,脂肪干细胞移植对挤压伤所致急性肾损伤具有明显的修复作用,其机制可能与脂肪干细胞参与调节bax和Caspase-3表达有关。

脂肪干细胞移植隆胸术影响因素分析

目的:研究纤维生长因子2(FGF2)等因素在脂肪干细胞移植隆胸术中的临床意义。方法:.2008年12月—2012年11月韩国首尔SC301整形外科医院行自体脂肪干细胞(ADSC)移植隆乳术的200例患者,研究年龄和FGF2浓度对术后疗效的影响。结果:200例患者均成功进行了ADSC移植隆胸术。术后胸围增加值和胸部隆起值的增加值在术后2周、1月、6月较术前均有明显增加(P<0.0001)。年龄对术后2周和术后6月的隆胸效果均无显著影响,而ADSC悬液中FGF2浓度与术后6月隆胸效果有显著关系。ADSC悬液中FGF2浓度越高,术后6月胸围增加值越大(P<0.0001)。结论:ADSC移植隆胸术具有确切和肯定的临床效果,术后患者胸围和胸部隆起值均有显著增加。ADSC悬液中FGF2浓度与术后6月胸围增加值密切相关,FGF2浓度越高,术后6月胸围增加值越大。

自体脂肪干细胞移植技术在面部年轻化的应用研究

目的探讨自体脂肪干细胞移植技术在面部年轻化的应用。方法选取我院收治的42例求面部年轻化者，根据是否采用自体脂肪于细胞分为实验组与对照组。比较两组患者的面部填充情况、外形满意情况及并发症。结果治疗后3个月实验组外观饱满、自然度、皱纹改善人数比例明显高于对照组（P〈0．05）；经3个月随访，实验组出现皮肤不对称例数明显少于对照组。结论自体脂肪干细胞移植技术能够更好地实现面部年轻化，达到求美者满意并且术后并发症较少的效果，值得临床推广使用。

脂肪间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导的大鼠卵巢功能损伤的影响

目的:探讨脂肪间充质干细胞对化学药物治疗(以下简称化疗)药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导的卵巢功能损伤的影响及其作用机制。方法:从雌性SD大鼠脂肪组织中分离脂肪间充质干细胞并进行体外培养,将其分为空白对照组和CTX组,每组15只;再选取45只正常动情周期的SD大鼠,用CTX75mg/kg腹腔注射给药1次的方式建立模型,再随机分为对照组(不再予其他处理,A组)、尾静脉注射组[尾静脉注射脂肪间充质干细胞0.6 mL(6×10^5个细胞),B组]和卵巢原位注射组[经卵巢原位注射脂肪间充质干细胞40μL(每侧20μL,2×10^4个细胞),C组],每组15只。比较A,B,C 3组大鼠用药前后生存质量、体重变化;ELISA法测定血清卵泡刺激素、雌二醇水平;HE染色观察卵巢组织及卵泡计数;免疫组织化学法、real-time PCR法及蛋白质印迹法测定骨形态发生蛋白-15(bone morphogeneticprotein 15,BMP-15),Bcl-2和Bax的表达;TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测A,B,C3组大鼠卵泡细胞凋亡率。结果:尾静脉注射或卵巢原位注射脂肪间充质干细胞后,与A组比较,B组和C组大鼠生存质量提高,移植前后的体重增长值明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.01);与A组比较,B组大鼠血清雌二醇水平明显升高,卵泡刺激素水平明显下降(均P<0.01),C组大鼠血清雌二醇水平升高,卵泡刺激素水平明显下降(分别P<0.05,P<0.01);B组和C组大鼠卵巢组织切片HE染色见颗粒细胞层明显增多,黄体数量增多,各级卵泡计数均增加,可见多个新生卵泡及成熟的卵母细胞;与A组比较,B组大鼠的原始卵泡数、窦状和排卵前卵泡数以及总卵泡数均明显增加,窦前卵泡数也增加(分别P<0.01,P<0.05),C组大鼠的原始卵泡数、窦前卵泡数、窦状和排卵前卵泡数以及总卵泡数均明显增加(均P<0.01);与A组比较,B组和C组大鼠卵巢组织BMP-15和Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少(均P<0.01),大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率明显降低(P<0.01);B组与C组之间比较,大鼠体重增长值,血清雌二醇及卵泡刺激素水平,各级卵泡计数,BMP-15,Bcl-2及Bax的表达水平,卵巢颗粒细胞凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:脂肪间充质干细胞移植能够有效地修复CTX化疗所致的卵巢功能损伤,该作用可能是通过抑制颗粒细胞的线粒体凋亡途径实现的。

人脂肪间充质干细胞尾静脉移植治疗大鼠急性肝衰竭

背景:间充质干细胞对肝衰竭大鼠的肝脏具有保护及修复作用,但具体机制尚未完全明确。目的:观察人脂肪间充质干细胞尾静脉注射对急性肝衰竭大鼠肝脏损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法:将36只SD大鼠(购自青岛市大任富成畜牧有限公司)随机等分为对照组、模型组和移植组。模型组和移植组大鼠通过腹腔注射D-氨基半乳糖建立急性肝衰竭模型。造模1 d后,移植组注射人脂肪间充质干细胞悬液,模型组注射等量生理盐水。细胞移植1 d和3 d,检测血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素水平。细胞移植3 d,检测血清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10水平;苏木精-伊红染色观察肝脏病理形态学变化;Western blot检测肝组织中糖原合成酶激酶3β蛋白的表达。结果与结论:(1)与模型组相比,移植组血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素10水平降低(P<0.05);(2)移植组肝脏组织炎症反应和变性坏死程度较模型组减轻;(3)移植组肝组织中糖原合成酶激酶3β活性较模型组减弱(P <0.05);(4)结果表明,人脂肪间充质干细胞可以减轻急性肝衰竭大鼠肝脏炎症反应和病理损伤,改善肝脏功能,其机制可能与抑制糖原合成酶激酶3β活性有关。

湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植术临床观察

目的:探讨湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪注射移植术的有效性,旨在探索一种更方便、更安全、更高效干细胞辅助颗粒脂肪注射填充移植方法。方法:20ml一次性螺口注射器吸脂,自然静置悬浮后只排除注射器下层水分(若水份很少,亦可不排除),不漂洗和不排除静置后注射器内颗粒脂肪上层脂质(油脂)部分及颗粒脂肪微粒间液体部分,不离心分离浓缩纯化颗粒脂肪,直接注射移植;注射前受区先局部肿胀浸润麻醉使各层次组织蔬松分离,分层次注射移植,呈单点微量(0.5～1 ml)、多点、多平面、多隧道、无创钝针线状在形成隧道同时边退针边注射,将颗粒脂肪和干细胞"微粒"定位于受植床内,局部肌肉内可分多层注射以保证良好血运,尽量减少损伤和缩短操作时间。结果:术后随访1～3年,与笔者二年前在同等条件下所完成传统单纯颗粒脂肪湿性注射隆乳术和隆臀术及隆乳假体取出后即刻注射隆乳术等多量自体颗粒脂肪注射移植术后相比,临床效果均获明显提高。结论:湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪注射移植技术,可一次手术完成,操作简易、快速、安全、经济、并发症少,宜临床推广普及应用,可做为现今多量自体颗粒脂肪注射填充移植美容和治疗方面首选技术。

湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植五年临床回顾总结

目的:回顾总结2008～2013年笔者行湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪注射填充移植术五年的临床经验。方法:549例均采用湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植术,单次注射填充移植完成532例(96.91%),17例(3.09%)脂肪存活率较低(30%～40%)需二次注射填充移植完成。结果:本组仅2例(0.36%)出现轻微并发症,成活率和远期效果明显提高,取得预期临床效果。结论:随访1～5,采用规范的湿性肿胀技术和注射器吸脂法抽吸颗粒脂肪及湿性新鲜原代血管基质细胞和脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植注射填充移植技术效果明显持久,遵循其正确的临床操作原则和技术指南及标准操作流程,能明显提高移植脂肪成活率和良好远期效果,是一种切实、可行、有效的临床方法。

富含血管基质层细胞自体脂肪颗粒移植纠正颜面萎缩的临床观察

目的:探讨富含血管基质层细胞(stromal vascular fraction,SVF)的自体脂肪颗粒注射移植在面部萎缩中的应用,达到提高脂肪存活率效果。方法:从2011年8月到2013年2月,我们选择6例半侧颜面萎缩的患者,于下腹部采用肿胀吸脂术获得自体颗粒脂肪,通过静置,纯化后采用多层次、多隧道、多点的注射方法,充填修复颜面部凹陷畸形。术后3个月随访,效果欠佳者即进行第二次手术脂肪颗粒移植,直至效果满意为止。结果:本组6例半侧颜面萎缩患者,随访3～12个月(平均6.5个月),充填后脂肪吸收率低,面部两侧基本达到对称,效果满意。结论:应用自体颗粒脂肪移植修复半侧颜面萎缩操作简单,创伤性小,效果理想,对于轻度中度的颜面萎缩患者而言,是一种较为理想的简单有效的治疗方法,值得推广。

脂肪干细胞复合PLGA对骨质疏松骨折愈合后生物力学的影响

目的探讨骨质疏松骨折后脂肪干细胞(ADSCs)复合聚乳酸共聚物(PLGA)对骨折愈合后生物力学的影响。方法建立大鼠骨质疏松骨折模型,将成功建立模型的27只大鼠分为治疗组(n=18)和空白对照组(n=9),治疗组大鼠的右侧股骨骨折肢为脂肪干细胞复合PLGA治疗组(ADSCs/PLGA组),左侧为单纯脂肪干细胞组(ADSCs组),于治疗后2、4、8周分别处死大鼠,取股骨测量新生骨痂的横截面积及相关生物力学指标。结果骨折后2周,与空白对照组和ADSCs组比较,ADSCs/PLGA组骨痂横截面积最大,空白组最小,各组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),骨折后4周各组间骨痂横截面积比较差异无统计学意义。各组剪切强度、弹性模量随着时间的推移,逐渐升高,各时间点均以ADSCs/PLGA组测定值最高,空白组最低,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);剪切应变随着时间推移,逐渐降低,各时间点均是ADSCs/PLGA组测定值最低,空白组最高,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。最大载荷测定值在各时间点各组间比较为ADSCs/PLGA组最高,空白组最低,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。骨折后4、8周,最大应力测定值ADSCs/PLGA组最高,空白组最低,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论脂肪干细胞复合PLGA可以提高骨质疏松骨折后骨质愈合的质量,为临床骨质疏松骨折的治疗提供实验依据。

脂肪间充质干细胞外泌体miR-212-3p对成纤维样滑膜细胞的影响

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)外泌体miR-212-3p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞RA-FLS增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法收集海南医学院第一附属医院类风湿性关节炎(RA)患者和健康者血清各20例,采用RT-qPCR检测血清中miR-212-3p的表达情况。体外细胞可分为4组:RA-FLS细胞单独培养(NC组)、RA-FLS细胞+Exo-ADSCs共培养(Exo组)、RA-FLS细胞+沉默外泌体miR-212-3p共培养(Exo-antagomiR-212-3p组)、敲降RA-FLS细胞SMAD1+沉默外泌体miR-212-3p共培养(si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组)。外源性调节ADSCs细胞中miR-212-3p和RA-FLS细胞中SMAD1的表达水平后,将ADSCs外泌体与RA-FLS细胞共培养,CCK-8和Transwell分别检测RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因验证miR-212-3p与SMAD1之间的靶向关系。结果与健康者相比,miR-212-3p在RA患者血清中低表达,差异有统计学意义(P<0.05);与NC组相比,Exo组中miR-212-3p表达显著上调,增殖活力、迁移和侵袭显著降低,差异无统计学意义(均P>0.05);miR-212-3p能够靶向结合SMAD1的3′UTR;同时与NC组相比,Exo组及si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数显著降低,差异无统计学意义(均P<0.05),而Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数与NC组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论ADSCs外泌体miR-212-3p在RA患者和RA-FLS细胞中低表达,其通过靶向下调SMAD1抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭。

脂肪干细胞胶(SVF-gel)填充矫治面部凹陷的疗效探讨

目的:探讨脂肪干细胞胶(SVF-gel)填充矫治面部凹陷的临床疗效。方法:选取医院拟实施自体脂肪移植治疗的面部凹陷患者50例,采用完全随机方法分为观察组和对照组,每组25例。分别注射SVF-gel和Coleman脂肪治疗面部凹陷,术后随访,对比两组术后肿胀时间、二次填充率及患者满意度情况。结果:术后观察组面部肿胀时间(8.64±1.18)d明显短于对照组(10.26±1.12)d,且术后二次填充率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者满意度(96.0%)高于对照组(88.0%),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与Coleman脂肪移植比较,SVF-gel填充治疗面部凹陷,术后肿胀时间短、满意度高、治疗效果较好。

不同浓度人脂肪干细胞与脂肪颗粒混合种植对裸鼠脂肪细胞增长的影响

目的探讨不同浓度脂肪干细胞对自体脂肪移植的作用,为临床提供理论依据。方法 BALB/c裸鼠随机分为4组(n=2),裸鼠背部两侧筋膜下分别注入0.5 mL待移植脂肪颗粒与不同浓度脂肪干细胞的混合物,脂肪干细胞浓度如下:200μL脂肪颗粒.A组1×10~6、B组1×10~5、C组1×10~4脂肪干细胞,D组(对照组)注入单纯脂肪颗粒。每2周测量脂肪团块长短径观察裸鼠背部脂肪团块生长情况。6周后处死裸鼠,取出脂肪组织,称质量,H-E染色及CD31血管免疫组化染色对脂肪组织存活、脂肪细胞形态及组织血管化状态进行评价。结果脂肪团块长短径测量显示,脂肪团块均有缩小且各组间差异无统计学意义。6周后,A、B、C、D各组之间脂肪组织质量差异均有统计学意义(P<0.01)。H-E染色提示B、C、D组脂肪细胞生长良好。CD31血管免疫组化检测显示B组微血管形成情况良好。结论脂肪干细胞浓度过高时,与脂肪组织的生长竞争导致脂肪细胞的存活率降低。受区空间容量也对脂肪干细胞混合脂肪颗粒的生长产生了影响。

脂肪来源干细胞辅助脂肪移植的现状、不足与展望

脂肪移植在面部年轻化、软组织重建、乳腺再造、创伤修复等整形外科领域有着广泛的应用前景.但由于脂肪组织不耐缺氧、易发生液化及＂瘤＂变等自身特性,目前还不能进行广泛的临床应用[1],而脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells, ADSC）为这一领域带来新的希望.近年来,针对其特性开展的一系列基础研究及临床应用研究,虽已取得了很大进展,但也暴露出许多问题.干细胞辅助脂肪移植（cell-assisted lipotransfer, CAL）是组织工程学的概念,即在脂肪移植过程中加入ADSC,用来促进移植部位的血管再生及提高移植脂肪的成活率.Matsumoto等[2]研究表明,在ADSC辅助下,可以增加35%的移植脂肪成活率,特别是与透明质酸支架作为载体或与前脂肪细胞混合等新技术的结合[3],使CAL成为新的研究热点,并已取得许多重大的突破.笔者将从ADSC提取、鉴别、临床应用、远期疗效评价等方面具体分析其现状与不足,旨在综合分析CAL从基础研究到临床应用所亟待解决的问题,希望能对本领域的进一步发展有所助益.

干细胞辅助脂肪移植的临床试验进展分析

20世纪,自体脂肪组织移植已经应用于人体软组织缺损的重建.在传统的脂肪组织移植中,平均吸收率为25％～80％.影响移植脂肪组织吸收率的因素包括：移植脂肪细胞的活性及纯度、受区的血供情况、移植脂肪组织的数量和体积等.因为脂肪细胞耐受缺氧能力差,所以在移植的初始阶段,受区血液供应（毛细血管系统）没有建立,多数脂肪细胞在最初的48 h内发生变性和坏死.近年的研究发现,脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）能够耐受缺氧,在缺氧条件刺激下,可分泌多种细胞因子,发挥促血管生成作用和趋化作用,从而提高脂肪细胞的成活率;同时,ADSCs还可以向脂肪细胞分化.因此,应用干细胞辅助脂肪移植（cell-assisted lipotransfer,CAL）可以提高移植脂肪的成活率.