脂肪间充质干细胞脑内定向移植治疗大鼠脑出血的机制研究

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)脑内定向移植治疗大鼠脑出血的机制。方法对从大鼠腹股沟处吸脂来源的脂肪组织进行ADSC的分离、传代培养、鉴定、冻存和复苏、体外诱导分化及储存。建立大鼠脑出血微创抽吸术模型30只,采用抽签法将其分为三组,A组:磷酸盐缓冲液3 ml;B组:ADSC 1×10^(8)悬浮于3 ml磷酸盐缓冲液;C组:ADSC诱导分化的神经干细胞1×10^(8)悬浮于3 ml磷酸盐缓冲液。采用ADSC脑内定向治疗脑出血,通过Rogers Scale积分进行神经行为功能评价,在第1、3、5、7周进行,进行统计分析。通过超速离心法从血清中提取外泌体,分析其在三组大鼠中的差异。结果三组大鼠均出现不同程度的神经功能障碍,在第1、3、5、7周C组大鼠Rogers Scale评分均低于同时间的A、B组,差异有统计学意义(P<0.05);C组大鼠同组比较第5、7周Rogers Scale评分低于第1周,差异有统计学意义(P<0.05);在第1、3、5、7周A、B两组大鼠血清外泌体浓度均低于同时间的C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ADSC通过脑内定向移植能够减轻脑出血大鼠模型症状,可能与其分泌外泌体有关。

脂肪间充质干细胞对巴马小型猪自体皮肤移植愈合过程的影响

拟应用脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)干预小型猪自体皮肤移植实验动物模型,观察其对自体皮肤移植愈合过程中的作用效果。对9头小型猪建立自体皮肤移植动物模型,将小型猪随机分为3组:模型组(Model)、磷酸盐缓冲液组(PBS)、脂肪间充质干细胞组(ADSCs)。各组分别于术前,术后7、14、21和28 d,采集血液和皮肤组织样本,并观察、拍照、记录移植皮片和周围组织临床变化情况。通过对移植皮片表观检查、病理组织学检测,血常规以及血清生化检测,移植皮片组织氧化应激、炎症、再生相关指标检测及血流恢复情况,综合评价ADSCs对小型猪自体皮肤移植创口愈合的影响。临床观察发现,术后ADSCs组皮片恢复速度优于其他两组,在术后28 d,ADSCs组基本恢复正常皮肤状态。在氧化应激方面,ADSCs组SOD、GSH含量显著升高(0.01<P<0.05),MDA显著下降(0.01<P<0.05)。在炎症方面,ADSCs组显著降低TNF-α、IL-1β含量,IL-10在术后7、14 d极显著升高(P<0.01)。在皮肤组织再生方面,ADSCs组VEGF、bFGF、TGFβ3和CD31的表达量显著上升(0.01<P<0.05)。在血流恢复方面,ADSCs在愈合过程中血流灌注百分比显著高于其他两组(0.01<P<0.05)。综上表明,在小型猪自体皮肤移植动物模型中,ADSCs能够加速皮肤组织病理损伤的恢复,降低氧化应激反应及炎症反应,促进皮肤组织再生,血管新生。表明ADSCs具有抗氧化、抗炎和促进组织再生的功能对小型猪自体皮肤移植具有良好的治疗效果,本试验为干细胞在自体皮肤移植和异体皮肤移植的临床应用提供了实验支撑和科学依据。

脂肪干细胞外泌体提高脂肪移植存活率的研究进展

脂肪移植是外科治疗组织缺损、凹陷的重要治疗手段,脂肪细胞具有来源丰富、良好的组织相容性等优点,成为了整形外科治疗的一个重要手段。但是,传统的脂肪移植存在移植物存活率低、术后效果不稳定等局限,随着细胞辅助脂肪移植的发展,脂肪移植的存活率有了一定的提高,却没有根本解决高吸收率的问题,且可能存在致瘤等潜在风险。脂肪干细胞外泌体的发现有望改变这一现状。

脂肪间充质干细胞治疗急性肝损伤的分子机制

背景:急性肝损伤是由多种病因诱发的肝脏损害,如未及时治疗则会发展成急性肝衰竭,严重影响患者的生命安全。由于肝脏是人体最大的免疫器官和代谢器官,目前治疗急性肝损伤尚无最优方案。脂肪间充质干细胞因具有多向分化潜能和免疫调节活性已逐渐成为治疗急性肝损伤的有效工具。目的:综述目前脂肪间充质干细胞及其经不同方式修饰后治疗急性肝损伤的进展和分子机制。方法:从PubMed、Web of Science与中国知网数据库中检索2000-2023年发表的相关文献,以“Acute liver injury,liver injury,Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell,liver Injury Repair,stem cell transplantation,stem cell repair,Cell surface engineering,stem cell modification”为英文检索词,以“急性肝损伤,肝损伤,脂肪间充质干细胞,肝损伤修复,干细胞移植,干细胞修复,干细胞修饰”为中文检索词,最终检索筛选出该领域最新研究进展的62篇文献进行归纳分析。结果与结论:(1)脂肪间充质干细胞作为一种具有多向分化潜能的干细胞治疗急性肝损伤具有生物学优势,较其他两种主要间充质干细胞类型——骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞具有来源丰富、获取便捷、医学伦理问题少的特点,且较骨髓间充质干细胞的自我更新能力强。(2)脂肪间充质干细胞可以通过降低免疫反应、分化为肝细胞、分泌生长因子和外泌体等多种途径,降低血清炎症因子表达,减少肝脏组织炎性细胞浸润,抑制细胞焦亡和自噬,发挥抗凋亡作用,促进肝窦内皮细胞和肝细胞再生等分子机制改善肝损伤;目前尚无研究表明何种机制为脂肪间充质干细胞治疗急性肝损伤的最佳机制,多数观点认为这些分子机制之间相互影响相互作用协同发挥治疗作用。(3)生物材料修饰和药物预处理等方式可以提升脂肪间充质干细胞治疗急性肝损伤的疗效:一方面,生物材料和药物修饰可以提升脂肪间充质干细胞自身的功能,如提高增殖迁移能力,上调其分泌的生长因子水平,增强抗炎能力等,从而促进脂肪间充质干细胞在损伤部位存活;另一方面,生物材料和药物修饰可以抑制损伤部位炎性细胞活化,促进血管生长,改善损伤部位环境从而提高移植成功率。(4)总之,脂肪间充质干细胞可以通过分泌生长因子和外泌体、发挥免疫调节作用及促进肝脏再生等途径在治疗急性肝损伤中发挥重要作用。随着科学技术的发展,生物材料与药物修饰可以提升脂肪间充质干细胞的自我更新能力,改善急性肝损伤的局部微环境,为进一步促进脂肪间充质干细胞治疗急性肝损伤的临床应用提供新的思路。

脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响

旨在探究脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)与甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)联合用药对小型猪异体皮肤移植(allogeneic skin graft,ASG)所产生的免疫排斥反应与创口愈合的影响。对12头小型猪建立同种异体皮肤移植模型,根据术后对异体皮肤移植皮片不同的干预方式,将小型猪随机分为4组:异体皮肤移植组(ASG)、甲泼尼龙组(MP)、脂肪间充质干细胞组(ADSCs)、脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药组(ADSCs+MP)。术前与术后7、14 d采集血液和组织样本,术后即刻及术后7、14、21 d拍照记录移植表皮临床变化情况。通过对移植皮片表观检查、病理组织学检测,血常规以及血清生化,移植皮片组织氧化应激、炎症、再生的指标检测,综合评价4组不同干预方式对小型猪异体皮肤移植所产生的免疫排斥反应与创口愈合方面的影响。从皮片表观与病理学分析可知,ASG组移植皮片存活时间在7 d左右、MP组移植皮片存活时间在7~14 d、ADSCs组与ADSCs+MP组存活时间为14~21 d。并且在7、14 d时ADSCs+MP组的GSH、SOD的表达量显著升高,在免疫排斥方面,ADSCs+MP组的CD4^(+)T细胞的数量,NF-κB的蛋白与基因表达量,IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6促炎因子的表达量相对于ASG组显著降低。在创口愈合方面,ADSCs+MP组相对于ASG组VEGF、TGF-β的蛋白表达,SDF-1、CXCR4的表达显著上升。并且ADSCs+MP组相对于ASG组,PI3K、AKT、11β-HSD1的蛋白与基因的表达量显著降低。综上所述:ADSCs+MP组相对于ASG组与MP组,可以延长移植皮片存活时间。并且ADSCs+MP可以有效通过促进GSH、SOD的表达抑制氧化应激。在排异方面,ADSCs+MP可以通过抑制NF-κB的表达抑制IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α等炎性因子的表达,从而抑制移植过后的免疫排斥反应。并且ADSCs+MP可以通过促进VEGF、TGF-β等愈合因子的表达促进创口愈合。进一步研究发现ADSCs可能通过PI3K/AKT来影响11β-HSD1的表达,进而抑制皮肤皮质醇含量,并促进TGF-β、VEGF等生长因子的表达来促进创口肉芽组织再生与血管迁移。

含脂肪干细胞的自体脂肪移植联合个性化假体置入治疗面部局限性硬皮病

目的:探讨含脂肪干细胞的自体脂肪移植联合个性化假体置入治疗面部局限性硬皮病的临床效果。方法:2017年6月-2019年8月收治5例面部局限性硬皮病引起的面部萎缩性缺损,对其先进行含脂肪干细胞的自体脂肪移植,然后再通过3D打印技术制作置入假体模型,依据模型制作填充假体,尽量恢复面部组织正常解剖外观。结果:本组5例患者,术后均无感染、血肿等并发症。术后随访6~24个月,平均12个月,患者皮肤的颜色质地均接近周围正常皮肤,其组织的缺损得以纠正,基本恢复面部的正常外观形态,患者满意。结论:含脂肪干细胞的自体脂肪移植联合个性化假体置入治疗面部局限性硬皮病是一种理想可靠的方法。

脂肪干细胞胶辅助自体脂肪移植隆胸术的效果观察

目的评估自体脂肪移植隆胸术中应用脂肪干细胞胶的可行性。方法数据(190例样本)取自河南整形美容医院2020年1月至2022年9月收治的隆胸手术患者,通过随机分组得到对照组(包含95例样本,接受单纯脂肪移植隆手术)、观察组(包含95例样本,接受肪干细胞胶自体脂肪移植手术)。在术后,通过观察指标的数据评估不同手术方案对临床结局的影响。结果对比对照组、观察组胸围、胸部隆起值数据:在术前,对照组、观察组差异无显著性,P>0.05;术后相较于术前,对照组、观察组的数据趋势均升高,而术后2周~6个月,对照组、观察组的数据趋势均为逐渐降低,且后者明显高于前者,P<0.05(组间比较差异显著);术后1~6个月胸围、胸部隆起值数据稳定保留率,对照组、观察组的数据趋势均为逐渐降低,且后者明显高于前者,P<0.05。术后,对比对照、观察组满意度,后者明显高于前者(96.84%vs 88.42%),均P<0.05。结论脂肪干细胞胶辅助自体脂肪移植隆胸术具有理想的临床效果,患者乳房胸围维持度较好,增加了患者满意度。

犬脂肪间充质干细胞静脉移植临床安全性研究

为了验证犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)临床应用的安全性,本试验取第4代犬ASCs,显微镜下观察细胞形态,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化和细胞表面标志蛋白分析。结果显示ASCs呈纺锤体状贴壁生长,形态均匀一致,体外ASCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞。犬ASCs表达标记蛋白CD29、CD44、CD105和CD166,不表达CD34和CD45,符合典型的脂肪间充质干细胞特征。犬ASCs以1×10^(6)/kg进行静脉移植,速度10 mL/(kg·h),注射过程中未见任何不良反应。长期观察3个月,未见明显相关并发症。与移植前相比,血液检查发现白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数、嗜酸性粒细胞数、红细胞数、血红蛋白和血小板数等均无显著差异(P>0.05);血清生化检查发现白蛋白、ALT、AKP等肝指标差异不显著(P>0.05),肾指标肌酐、血清尿素、血磷和血钙差异不显著(P>0.05),胰腺相关指标血糖和血清淀粉酶均无显著差异(P>0.05),心肌损伤指标肌酸激酶和血脂指标胆固醇,在细胞移植前后也无显著差异(P>0.05)。本试验结果表明了犬ASCs应用的临床安全性,为细胞移植治疗奠定了基础。

异体脂肪源干细胞移植对大鼠的抗衰老作用

目的从筋膜学的角度设计观察脂肪源干细胞(ADSCs)异体移植对衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响,探索一种新的抗衰老方法。方法30只SD大鼠随机分成空白对照组(A组)、模型组(B组)和治疗组(C组)。B、C组大鼠注射D-半乳糖(D-gal)复制亚急性衰老模型。C组大鼠在造模8周后,经尾静脉输入体外扩增培养的脂肪源干细胞3×106个。治疗2周后,检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、血清白细胞介素-2(IL-2)水平和脾脏指数。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均显著性降低,血清MDA水平显著升高;移植ADSCs后,治疗组大鼠较模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均有所提高,而MDA含量显著降低。结论异体移植ADSCs可有效增强大鼠机体清除自由基和抗氧化能力,提高机体免疫功能,从而延缓D-gal诱发的大鼠衰老。

缺氧诱导因子1α基因转染脂肪干细胞与自体脂肪移植

背景:自体颗粒脂肪组织作为理想的填充材料用于美容与重建修复领域,但因其移植后组织大量被吸收,严重影响了远期效果。目的:观察缺氧诱导因子1α基因转染脂肪干细胞对自体移植脂肪组织存活率的影响。方法:取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离脂肪干细胞并行原代及传代培养,传至第3代,调整细胞浓度为1×109L-1,经缺氧诱导因子1α基因转染后调整细胞浓度为1×1011L-1备移植时使用;同时选用同一抽脂术后的脂肪组织颗粒并进行纯化,利用纤维蛋白胶的物理特性制备不同成分脂肪组织复合移植物,在20只裸鼠背部皮下随机分离3个腔隙,实验分为3组:基因修饰组移植经缺氧诱导因子1α基因修饰的脂肪干细胞+脂肪组织+纤维蛋白胶;基因未修饰组移植单纯脂肪干细胞+脂肪组织+纤维蛋白;生理盐水组移植生理盐水+脂肪组织+纤维蛋白。结果与结论:移植后3个月和6个月,各组移植物血管密度比较,基因修饰组>基因未修饰组>生理盐水组,组间比较差异有显著性意义(P<0.05);各组移植物脂肪细胞纤维坏死率比较,基因修饰组<基因未修饰组<生理盐水组,组间比较差异有显著性意义(P<0.05);各组移植物脂肪质量保持率比较,基因修饰组>基因未修饰组>生理盐水组,组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。结果证实,缺氧诱导因子1α基因转染脂肪干细胞可促进移植脂肪组织局部的血管再生,促进脂肪细胞的成活,增加脂肪组织的质量保持率,减少脂肪移植术后的纤维坏死程度。

小鼠脂肪干细胞的免疫原性及移植安全性

背景:多组实验证实脂肪干细胞体外能够大量扩增,经一定诱导条件作用后能够向3个胚层分化,并且能够加以一定的基因修饰。目的:观察小鼠脂肪干细胞的免疫原性和经静脉移植后的安全性。方法:体外分离培养小鼠脂肪干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面的免疫标记物;体外淋巴细胞增殖试验检测脂肪干细胞对淋巴细胞的活化能力;经小鼠尾静脉移植脂肪干细胞,观察细胞在体内对小鼠T、B淋巴细胞的刺激作用;仔细解剖移植后小鼠,观察细胞移植后的成瘤性。结果与结论:脂肪干细胞在体外容易扩增培养,表达间质干细胞表面标记物;体外与淋巴细胞共培养时,不能有效刺激淋巴细胞增殖;经静脉移植后,不能激活机体细胞免疫反应,但是能够活化B淋巴细胞,激活机体体液免疫反应;细胞移植后未观察到肿瘤形成和组织畸变。提示脂肪干细胞总体免疫原性较低,移植后不会激活宿主细胞免疫系统;脂肪干细胞移植后无肿瘤样生长,安全性较好。

兔脂肪干细胞(ADSCs)与聚羟基乙酸/壳聚糖(PLGA/CS)支架材料生物相容性研究

目的探讨兔脂肪来源于细胞（adipose-derived stemcells，ADSCs）作为种子细胞复合新型聚羟基乙酸（polylaetic-co—glycolicacid，PLGA）／壳聚糖（chitosan，CS）支架材料的生物相容性，为进一步构建组织工程化脂肪组织提供实验依据。方法取雄性新西兰大白兔腹股沟脂肪组织，I型胶原酶消化分离出ADSCs进行培养，贴壁细胞至3～5代，评价其多向分化能力。将干细胞收集重悬后，以l×10^7／mL的密度接种于多孔PLGA／CS支架，形成细胞一支架材料复合物。培养7天后，扫描电子显微镜观察细胞在支架材料上的黏附生长和基质分泌情况，评价细胞与支架材料的生物相容性；Dil荧光标记检测细胞在支架材料上的分布；Hochest33258检测细胞在支架上的生长情况。接种1和7天后，分别对细胞一材料复合物行AnnexinV／PI双染色法检测材料对细胞的毒性作用。用成脂诱导条件培养基诱导分化ADSCs及ADSCs支架材料复合物，7天后，尼罗红荧光染色液检测ADSCs在不同环境下的成脂分化能力。结果原代培养的ADSCs呈成纤维细胞样外观，在相应诱导条件下能够分化为脂肪细胞和骨细胞。细胞接种于PLGA／CS支架材料上第8天分裂增殖达到高峰，扫描电子显微镜下提示ADSCs在支架表面贴附生长良好，并向孔隙内壁充分延伸，细胞周围形成丰富的基质成分。活死双染结合共聚焦显微镜显示材料对细胞活性无影响，尼罗红染色可见成脂诱导后的ADSCs细胞质内有红色脂滴颗粒形成。结论多孔PLGA／CS支架与兔ADSCs具有良好的生物相容性，可作为构建组织工程脂肪组织的支架材料。

角膜基质细胞诱导分化的脂肪间充质干细胞羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制

背景角膜化学烧伤是致盲眼病之一，先前的各种疗法在临床上的应用均受到一定的限制，而脂肪间充质干细胞（ADSCs）移植疗法受到密切关注。目的观察诱导分化的ADSCs羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制。方法无菌条件下剪取兔角膜，用悬浮基质片法分离并培养兔角膜基质细胞（CSCs）。取兔腹股沟脂肪组织，以酶消化法（质量分数0．25％胰蛋白酶）分离及培养兔ADSCs，并用流式细胞术鉴定ADSCs表面抗原的表达。将CSCs与ADSCs共培养，采用免疫荧光技术和逆转录PCR（RT-PCR）鉴定CSCs诱导后ADSCs向角膜基质样细胞分化的表达，分别将诱导或未诱导的ADSCs种植于羊膜上制备成细胞羊膜片。选择60只新西兰白兔，右眼用浸有质量分数1％NaOH的滤纸贴敷于角膜中央50S制备兔角膜碱烧伤模型，按随机数字表法将模型眼随机分为诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组及模型组。分别于术后1周、2周和1个月在裂隙灯显微镜下观察各组兔模型眼角膜的混浊程度和新生血管形成情况，并对角膜炎症进行评分，采用ELISA法检测术后1个月角膜组织匀浆中CD45、叮干扰素（IFN-γ）、白细胞介素．10（IL-10）蛋白及房水中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的质量浓度。结果从脂肪组织分离培养的ADSCs表面抗原CDl05、CD29、CD44的阳性表达率分别为90．23％、88．56％、98．88％；分离培养的CSCs波形蛋白呈阳性表达；CSCs与ADSCs共培养后多数细胞双标记染色阳性。苏木精一伊红染色显示，ADSCs种植于羊膜后生长良好。术后1个月，模型组角膜混浊呈瓷白色，新生血管面积最大，而诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜透明，新生血管最少。术后1个月，诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组兔角膜混浊程度评分分别为1．65±0．18、2．05±0．17、2．68±0．25和2．904-0．18，新生血管面积分别为（10．59±1．78）、（22．58±1．63）、（37．98±1．90）和（45．37±1．65）mm^2，术后1周、2周及1个月4个组间角膜混浊程度评分和角膜新生血管（CNV）面积的差异均有统计学意义（F=280．826、330．172、465．707，均P=0．000；F=60．020、670．811、1510．231，均P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜炎症评分睨显低于其他3个组，CNV面积小于其他3个组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后1个月，4个组间角膜组织匀浆中CD45、IL-10、IFN-γ质量浓度的差异均有统计学意义（F=916．545、1739．358、462．134，均P=0．000），其中与未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组比较，诱导ADSCs＋羊膜移植组CD45、IFN-γ质量浓度明显降低，而IL-10质量浓度明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。4个组兔房水中VEGF质量浓度的总体比较差异有统计学意义（F=129．126，P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组兔房水中VEGF质量浓度明显低于未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论CSCs诱导的ADSCs羊膜片移植法治疗兔角膜碱烧伤有较好的疗效，其作用机制可能是ADSCs在CECs诱导下分化为具有角膜上皮细胞特征的细胞，同时羊膜可减轻免疫炎症反应，抑制新生血管形成。

SPIO标记脂肪干细胞移植治疗大鼠脑梗死的磁共振示踪成像研究

目的通过采用多聚左旋赖氨酸(PLL)与超顺磁氧化铁纳米微粒(SPIO)的复合物对脂肪干细胞(ADSCs)体外进行标记,观察SPIO标记ADSCs脑内移植治疗大鼠脑梗死的分布和迁徙情况。方法显微镜下直接结扎大脑中动脉方法制备大鼠脑梗死模型36只,随机分成缺血未干预对照组(12只)、磁性标记ADSCs移植组(12只)和未磁性标记ADSCs移植组(12只),采用立体定向方法脑内移植。对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,病理组织化学染色观察ADSCs在体内的分布情况,并用磁共振成像的方法在体观察ADSCs的分布,并与病理结果进行对比。结果移植后3周神经系统行为学评分显示移植组动物明显改善,ADSCs脑内移植后3周MRT2WI显示移植区低信号改变并通过胼胝体向病灶迁移。病理组织检查显示磁共振低信号改变区可见普鲁士蓝染色阳性细胞。结论移植ADSCs可以有效地促进大鼠脑梗死后神经行为功能的恢复,MRI可用于在体评价经SPIO和PLL复合物标记的ADSCs细胞移植后在体内的分布、迁移过程。

自体脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠脑内的作用

目的：脂肪干细胞来源于成脂细胞,取材容易,已经成为干细胞研究一个新的方向。观察脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠的脑组织局部组织学变化以及神经行为学变化。方法：实验于2006-01/2007-08在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成。①实验材料：SD大鼠,雌雄不限,体质量300g左右,由中南大学湘雅医学院动物学部提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：体外培养并传代SD大鼠脂肪干细胞,并用BrdU标记。制作大鼠的脑冷冻伤模型,实验组在冷冻伤动物脑内移植脂肪干细胞,对照组在冷冻伤动物脑内移植培养基,假手术组仅行颅骨开窗,每组15只。③实验评估：分别在移植细胞后1,3,5,7,14,30d对实验动物进行NSS神经行为学评分,并制作脑组织切片,行免疫荧光染色检测BrdU阳性细胞。采用Tunel染色检测凋亡细胞,脑组织RT-PCR检测血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子mRNA表达。结果：①与对照组相比,实验组大鼠在3-14dNSS神经行为学评分降低（P〈0.05）。②免疫荧光检测显示,Brdu标记的脂肪干细胞在大鼠脑组织内存活并且迁移。③Tunel法检测显示,3d后实验组凋亡细胞数目明显少于其他组。④RT-PCR检测显示,与其他两组比较,移植脂肪干细胞的大鼠脑组织中血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子表达更高。结论：脂肪干细胞可以在中枢神经系统中存活,并分化为神经元样细胞,它可以引起血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子的高表达从而减少细胞凋亡,加速神经功能修复过程并达到保护脑组织的目的。

脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植干预大鼠慢性难愈合性创面血管内皮生长因子的表达

背景:生物工程支架是临床治疗慢性难愈合性创面的常用方法,具有一定的疗效,但也存在一些问题。脂肪来源干细胞作为新兴的治疗慢性难愈合性创面的方法具有其独特的疗效和优势。但是,脂肪来源干细胞和生物工程支架联合应用治疗慢性难愈合性创面的疗效和机制尚不清楚。目的:研究脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植对慢性难愈性创面血管内皮生长因子表达的影响。方法:实验共选取31只SD大鼠,购自上海斯莱克实验动物责任有限公司。取1只大鼠腹股沟处脂肪,分离培养原代脂肪来源干细胞。将另外30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、支架组、脂肪来源干细胞组和联合组。对照组制备全层皮肤缺损创面(在大鼠腰椎正中偏上部两侧分别制备1处全层皮肤缺损伤口),术后每日常规换药;其余各组制备2处慢性难愈合性创面(同对照组制备全层皮肤缺损伤口,创面局部注射醋酸氢化可的松);模型组术后每日给予常规换药;支架组术后给予生物蛋白工程支架覆盖创面;脂肪来源干细胞组给予自体自体脂肪干细胞移植;联合组在脂肪来源干细胞移植后给予生物工程支架覆盖创面。干预7d后取材,观察创面情况,测量创面面积大小;采用免疫组化法检测血管内皮生长因子表达,采用Westernblot检测血管内皮生长因子蛋白表达量,采用qP CR检测血管内皮生长因子mR NA表达情况。结果与结论:(1)对照组创面面积显著小于其他组创面面积(P <0.05);联合组创面面积显著小于模型组、支架组和脂肪来源干细胞组(P<0.05);(2)对照组血管内皮生长因子表达水平最高,血管内皮生长因子蛋白和mR NA表达水平均显著高于其他组(P <0.05);联合组血管内皮生长因子表达较高,血管内皮生长因子蛋白和mR NA表达水平显著多于模型组、支架组和脂肪来源干细胞组(P <0.05);(3)结果提示,脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植上调难愈合性创面血管内皮生长因子表达,促进创面愈合。

PLGA-Fibrin杂合支架构建及与脂肪源性干细胞复合成软骨的研究

目的：探讨在特定的软骨细胞诱导培养液中，由纤维蛋白（fibrin）修饰的聚乳酸／聚羟基乙酸共聚物（PLGA）杂合支架材料对脂肪源性干细胞成软骨的影响。方法：PLGA支架材料采用快速成形技术制备；PLGA-Fibrin杂和支架材料采用低温冷冻的方法制备。分离兔脂肪源性干细胞，分别种植在未修饰的PLGA支架材料和Fbirin修饰的PLGA上，并在特定软骨诱导液中培养至14d，分别应用SEM观察杂合支架材料的性能；生化方法检测硫酸软骨素的含量；支架材料的亲水性和细胞黏附能力也被检测。通过体内实验对两种支架材料与干细胞复合修复软骨缺损的性能进行形态学染色和评分。结果：体外研究表明，与未修饰的PLGA支架材料相比，Fibfn修饰的PLGA亲水性明显被提高，同时也提高了干细胞在杂合支架材料上的黏附性能和硫酸软骨素的含量。软骨损伤修复研究表明，脂肪源性干细胞与Fibirn修饰的PLGA支架材料复合后，具有良好的修复软骨缺损的功能，其性能明显优于单纯的PLGA材料复合干细胞。结论：Fibim修饰的PLGA支架材料可提高脂肪源性干细胞向软骨细胞分化的能力，促进缺损软骨的再生。

脂肪间质干细胞移植对大鼠肝硬化模型的治疗作用

目的:探讨脂肪间质干细胞经门静脉及尾静脉移植后,对CCl4诱导的大鼠肝硬化模型的治疗作用.方法:SD♂大鼠45只随机分为对照组、门脉移植组及尾静脉移植组.所有大鼠经腹腔皮下注射CCl4混合物8wk.第6周时门静脉组及尾静脉组分别从肠系膜上静脉及尾静脉注射大鼠脂肪间质干细胞悬液每只2mL(细胞数量为2×106个),对照组自尾静脉注射等容量的细胞培养液.细胞移植前后取血检测肝功能指标.取肝脏标本并行包埋切片,HE染色后显微镜下观察各标本肝细胞变性坏死及肝硬化程度并进行病理评分.对所有实验数据行统计学分析.结果:门静脉及尾静脉移植组大鼠的肝功能指标(AST、ALT、ALB)较对照组有明显改善(142.2±31.2U/L,167.9±28.3U/Lvs354.2±26.4U/L;79.4±18.9U/L,85.8±21.4U/Lvs456.7±35.3U/L;26.3±2.0g/L,24.5±2.2g/Lvs17.2±1.7g/L,均P<0.05),但TBIL没有明显改善.与对照组相比,脂肪干细胞移植能抑制肝组织的变性坏死和纤维化形成.病理评分对比差异有统计学意义(P<0.05).结论:经门静脉及尾静脉移植脂肪间质干细胞对大鼠肝硬化模型有治疗作用,能改善肝功能及肝硬化程度.

脂肪干细胞转化神经元移植对大鼠颞叶癫痫发作的影响

目的研究脂肪干细胞(ADSCs)转化神经元移植对颞叶癫痫大鼠癫痫发作情况的影响。方法SD大鼠40只,随机分为移植组(n=15)、移植对照组(n=15)、生理盐水对照组(n=10),依据大鼠左侧海马CA3区坐标,通过立体定向手术将ADSCs转化神经元用微量注射器注入移植组大鼠海马;对比手术前后实验大鼠的行为学、皮层及海马脑电改变情况。结果移植后2周,癫痫大鼠的发作频率与移植前2周比较明显减少,海马及大脑皮层可记录到少量的癫痫波;2个月内绝大多数大鼠癫痫发作逐渐停止,活动逐渐恢复正常;2个月时,癫痫大鼠海马和大脑皮层记录到的脑电图,与生理盐水组大鼠脑电图差别较小。结论ADSCs转化神经元移植可减轻大鼠颞叶癫痫的发作。

脂肪源干细胞移植骨质疏松模型大鼠骨密度及骨形态计量学指标的变化

背景:越来越多的研究者希望通过干细胞移植促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞增殖,从而治疗骨质疏松症。目的:探讨外源性脂肪干细胞移植对卵巢切除骨质疏松大鼠的治疗作用。方法:选取30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、脂肪干细胞移植组,每组10只。模型组和脂肪干细胞移植组进行双侧卵巢切除手术,建立骨质疏松模型,假手术组仅摘除卵巢附近的脂肪组织,但不摘除卵巢。脂肪干细胞移植组经尾静脉注射第4代脂肪干细胞(2×106个脂肪干细胞),模型组注射等量生理盐水,每周1次。细胞移植6周后,检测血清钙、磷、碱性磷酸酶水平及骨密度、骨形态计量学指标。结果与结论:(1)与假手术组相比,模型组大鼠胫骨骨小梁体积百分比明显降低(P<0.01),与模型组相比,脂肪干细胞移植组大鼠胫骨骨小梁体积百分比显著增加,差异有显著性意义(P<0.05);(2)与假手术组相比,模型组大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比、骨小梁形成表面百分比明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,脂肪干细胞移植组大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比、骨小梁形成表面百分比显著降低,差异有显著性意义(P<0.05);(3)与假手术组相比,模型组血清钙、碱性磷酸酶水平和骨密度显著降低(P<0.05),而血清磷水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,脂肪干细胞移植组血清钙、碱性磷酸酶水平和骨密度显著升高(P<0.05),而血清磷水平显著降低(P<0.05);(4)结果表明,脂肪干细胞移植后能够改善卵巢切除骨质疏松大鼠的骨量流失。