脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究

目的建立人脂肪来源的基质细胞（ADSCs）的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×10^7-4×10^7个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。

小鼠脂肪来源基质细胞向成骨细胞的分化

目的研究小鼠脂肪来源基质细胞的分离培养、鉴定及向成骨方向分化的潜能。方法取小鼠睾丸脂肪垫用胶原酶消化后获得血管基质层(SVFs),进行体外培养。取第4代细胞用流式细胞技术检测细胞表面分子CD29、CD44、Sca-1,用碱性磷酸酶染色及矿化结节染色法鉴定分化的成骨细胞。结果小鼠脂肪来源基质细胞高表达CD29、CD44,双阳性达84.9%,但Sca-1成阴性表达。经诱导的成骨细胞碱性磷酸酶染色胞质成黑色,矿化结节-茜素红与Von Kossa染色成红褐色与黑色。结论小鼠脂肪来源基质细胞为一种理想的成体干细胞,可用于基础实验研究,且能成功分化为成骨细胞。

新分离的脂肪来源基质细胞与培养的脂肪干细胞用于肝纤维化治疗的效能比较

目的:比较新分离的脂肪来源基质细胞(f ASC)与脂肪干细胞(ASC)在抗大鼠肝纤维化方面的治疗潜能。方法:利用胶原酶解法获得新鲜分离的f ASC,体外扩增培养获得不同代数的ASC,用流式细胞仪分析不同代数细胞的表型;建立大鼠肝纤维化模型,并将f ASC或ASC用于干细胞移植治疗,通过血液肝功能指标检测、RT-PCR、H&E染色和天狼星红染色评价2类细胞的治疗效果。结果:f ASC和ASC均可显著改善肝纤维化的大鼠肝脏功能,二者用于治疗肝脏疾病的疗效相似。结论:在肝脏疾病的脂肪干细胞移植治疗中,应当综合考虑移植的干细胞体外传代次数和治疗效果间的关系。

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adiposetissue-derivedstromalcells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和β管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%～0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%～50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。

人脂肪组织来源基质干细胞成脂分化及Ad-EGFP体外转染研究

目的探讨重组腺相关病毒载体能否有效地转染脂肪组织来源基质干细胞及(ADSC)其影响,同时为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用抽脂法分离培养ADSC,诱导培养液诱导细胞成脂分化,行细胞形态学检查,细胞表面抗原鉴定,油红O染色,评价细胞成脂情况。在此基础上转染Ad-EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的理想感染复数(MOI)值,同时通过活力和增殖实验进行Ad-EGFP体外转染对ADSC的影响研究。结果细胞扩增迅速,形态良好,经诱导后呈现明显的成脂改变。实验确定Ad转染细胞的较佳MOI值为50,以此值转染Ad-EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达,并可传至子代,可以满足示踪标记的需要。Ad转染效率高,对细胞活性影响小。结论ADSC的培养和分化能满足脂肪组织工程的要求;Ad长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法。

脂肪组织来源基质细胞的心肌样细胞分化

脂肪组织来源基质细胞具有多向分化潜能、易获得性、易于分离培养和较强的再生能力等突出优点,已成为一种新的组织工程干细胞来源。现就脂肪组织来源基质细胞生物学特性、影响分化因素、向心肌样细胞分化及治疗缺血性心脏疾病等方面进行综述。

温度护理干预在脂肪来源干细胞基质胶面部填充术中的应用

目的:探讨温度护理干预对脂肪来源干细胞基质胶面部填充术效果的影响。方法:选取2019年1月-2020年12月于西安交通大学第一附属医院接受脂肪来源干细胞基质胶(Stromal vascular fraction-gel,SVF-gel)注射面部脂肪填充术20例患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和干预组,各10例。对照组采用常规护理,干预组实施温度护理干预,比较两组护理效果。结果:两组体温比较,差异有统计学意义(F组间=371.431,P组间<0.001);T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)干预组体温均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);两组体温均有随时间变化的趋势(F时间=230.426,P时间<0.001);分组与时间有交互效应(F交互=55.439,P交互<0.001)。干预组寒战发生率为10.00%,对照组寒战发生率70.00%,干预组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组热舒适度出PACU时评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组患者护理满意率为100.00%明显高于对照组的50.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温度护理干预可有效保持SVF-gel移植术中患者体温的恒定,提高患者舒适度和护理满意度,减少了低温和寒颤发生。促进了患者早日康复。

脂肪来源的基质血管成分细胞辅助脂肪移植在面部年轻化中的应用

目的探讨脂肪来源的基质血管成分细胞(SVF)在面部年轻化中的应用效果。方法选取2015年4月至2016年11月期间来长春海峡医学美容医院改善面部年轻化的40例女性为研究对象,按照简单随机抽样法分为治疗组和对照组,每组20例,两组患者均接受常规治疗,治疗组接受SVF辅助脂肪移植治疗,对照组接受单纯脂肪移植,比较两组患者面部除皱及并发症情况,并采用专业的皮肤图像分析系统对患者治疗前后的皱纹,纹理进行监测,并对所有数据进行统计学分析。结果治疗前,治疗组的老化评分为(2.95±0.308)分,皱纹评分为(65.75±0.654)分,纹理评分为(52.48±0.356)分,斑点评分为(63.56±0.635)分;对照组老化评分为(2.95±0.224)分;皱纹评分为(64.63±0.864)分,纹理评分为(51.56±0.421)分,斑点评分为(35.44±0.345)分。治疗后,治疗组老化评分为(0.95±0.515)分,皱纹评分为(41.65±0.425)分,纹理评分为(30.46±0.451)分,斑点评分为(49.56±0.654)分;对照组老化评分为(2.05±0.510)分,皱纹评分为(48.73±0.542)分,纹理评分为(35.44±0.345)分,斑点评分为(56.35±0.541)分。治疗前后对照组的老化评分和斑点评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗前后对照组的皱纹评分、纹理评分比较差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗后治疗组患者的老化评分、皱纹评分、纹理评分均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前后的斑点评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组面部老化评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组面部斑点评分、皱纹评分和纹理评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SVF细胞辅助脂肪移植技术一定程度上可改善皮肤状态,尤其在皮肤斑点及皮肤毛孔的改善方面效果更好。

脂肪来源干细胞基质胶联合重组人表皮细胞生长因子治疗深Ⅱ度烧伤患者的效果

目的:观察脂肪来源干细胞基质胶(SVF-gel)联合重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)治疗深Ⅱ度烧伤患者的效果。方法:选取78例深Ⅱ度烧伤患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组(39例,创面110个)和观察组(39例,创面106个)。对照组采用rhEGF治疗,观察组在对照组基础上联合SVF-gel治疗,比较两组治疗前后视觉模拟评分法(VAS)评分,治疗7、14 d后创面愈合率,创面完全愈合时间和不良反应发生率。结果:观察组治疗7、14 d后VAS评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗7、14 d后创面愈合率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组创面完全愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组均未发生明显不良反应。结论:SVF-gel联合rhEGF治疗深Ⅱ度烧伤患者可减轻患者疼痛,提高创面愈合率,缩短创面完全愈合时间,效果优于单纯rhEGF治疗。

经结膜入路下睑袋矫正术联合脂肪来源干细胞基质胶移植在眶下区年轻化中的效果分析

目的探讨经结膜入路下睑袋矫正术联合脂肪来源干细胞基质胶(SVF-gel)移植在眶下区年轻化中的应用效果。方法回顾性分析2019年4月至2021年4月武汉市第一医院整形外科门诊收治的眶下区年轻化患者的临床资料。根据术前照片对泪沟畸形进行Hirmand分型。术中采用经结膜入路去除膨出的眶隔脂肪,同时抽取腹部或大腿脂肪制备SVF-gel,进行泪沟或眶下区凹陷注射填充治疗。术后对患者进行随访观察,记录手术相关并发症。术前、术后根据泪沟畸形等级量表(TTRS),分别对泪沟凹陷深度、色素沉着程度、颧脂肪垫下垂程度及下睑皮肤皱褶程度进行评分,总分越高提示泪沟畸形越严重;根据Barton美学评级标准,对眶-颊结合部的形态进行评级(0~3级);结合患者手术效果满意度调查表(非常满意、满意、不满意3个等级),综合分析患者下睑袋及泪沟矫治的美学效果。采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,呈正态分布的计量资料用±s表示,术前、术后TTRS评分比较采用配对样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果共纳入92例双侧下睑袋伴泪沟或中面部凹陷患者。其中男15例,女77例,年龄(38.8±9.6)岁(21~55岁)。术前Hirmand泪沟分型:Ⅱ型37例、Ⅲ型55例。所有患者术后3 d均有不同程度结膜水肿及下睑肿胀,其中35例出现不同程度的皮肤淤斑,术后1~2周均自行恢复,均未出现血肿、复视、脂肪液化、脂肪结节及脂肪栓塞等并发症。术后随访6~12个月。术前、术后TTRS评分比较:与术前比较,Hirmand泪沟Ⅱ型患者[(2.37±0.78)分vs.(4.83±0.98)分,t=36.54,P<0.001]和Ⅲ型患者[(2.61±0.60)分vs.(5.38±0.93)分,t=55.20,P<0.001]的TTRS评分在术后均有明显降低,差异均有统计学意义。术前、术后Barton美学评级比较:对于HirmandⅡ型患者,术前评级为1级7例、2级19例、3级11例,术后改善为0级36例、1级1例;对于Hirmand Ⅲ型患者,术前评级为2级20例、3级35例,术后改善为0级50例、1级5例。术后患者满意度调查:非常满意85例(92.4%)、满意5例(5.4%)、不满意2例(2.2%)。2例不满意患者中1例因泪沟畸形改善效果不明显,3个月后行第2次SVF-gel填充,达到满意效果;1例患者因术后下睑外侧仍有睑袋,3个月后再次手术矫正,达到满意效果。结论对于无明显皮肤松弛的下睑袋伴泪沟或眶下区凹陷患者,采用经结膜入路下睑袋矫正术联合SVF-gel移植术治疗,可以达到眶下区年轻化的效果。

精细化靶向注射自体脂肪干细胞基质胶治疗眶区轻中度老化的效果观察

目的探讨精细化注射自体脂肪来源干细胞基质胶(SVFgel)治疗以眶区软组织缺失为主要表现的眶区老化的临床疗效。方法回顾性队列研究。纳入2021年1月—2022年6月蚌埠医学院第一附属医院整形外科有眶区年轻化需求的眶区老化患者46例,其中女43例、男3例,年龄27~47(35.3±3.5)岁,体质量指数(BMI)18.6~24.4(20.5±1.6)kg/m^(2)。眶区老化分级1级5例、2级17例、3级24例。46例患者均于自体大腿内侧或下腹部低负压手动抽脂,离心制作Coleman脂肪及SVFgel。按照注射材料的不同分为2组:观察组25例,注射材料为SVFgel,采用以眶区脂肪室解剖为基础的精细化靶向注射法填充眶区凹陷;对照组21例,注射材料为Coleman脂肪,采用多隧道多层次注射法填充眶区凹陷。对比2组患者性别、年龄、BMI、眶区老化分级等基线资料,观察手术完成情况和术后并发症。使用三维(3D)激光扫描仪将患者术前与术后即刻、术后3个月的面部3D扫描图像进行最佳拟合,通过色阶图色阶差分析眶区软组织体积变化,计算术后1个月内未行二次注射填充患者的泪沟点和眶睑沟凹陷最明显处在矢状轴方向的线性距离变化。术后3个月,采用问卷调查表进行患者满意度评价。结果2组患者性别、年龄、BMI、老化分级等基线资料比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。46例患者均完成注射充填治疗,术后均未出现感染、血肿、脂肪栓塞、硬结、凹凸不平等并发症;其中8例根据患者要求于术后1个月内进行二次注射填充治疗。所有患者术后3个月与术前3D偏差色阶图眶区注射区域示眶区体积增加。未行二次注射填充治疗的38例患者线性距离变化示,与术前相比,术后即刻及3个月时观察组与对照组患者上下睑凹陷均有明显改善,但术后3个月时较术后即刻改善值均有所下降,差异均有统计学意义(t=18.76、20.02、9.94、23.63,P值均<0.001)。术后3个月,行上睑注射的患者眶睑沟凹陷改善值在观察组(12例)为(4.90±0.41)mm,高于对照组(10例)的(3.81±0.28)mm;行下睑注射的患者泪沟点凹陷改善值在观察组(18例)为(2.21±0.22)mm,高于对照组(14例)的(1.81±0.22)mm:差异均有统计学意义(t=−7.17、−4.99,P值均<0.001)。观察组满意度高于对照组,但组间比较差异无统计学意义(Z=1.30,P=0.194)。结论以眶区脂肪室解剖为基础,精细化靶向注射SVFgel,术后并发症少,较传统方法注射Coleman脂肪可更好地改善眶区凹陷及肤质,患者满意度更高,在眶区年轻化治疗中具有较高的临床价值。

PRP与SVF-gel辅助自体脂肪移植手术的效果观察

目的探讨富血小板血浆(PRP)与脂肪来源干细胞基质胶(SVF-gel)应用于自体脂肪移植手术的临床效果。方法将2018年2月至2019年9月在我科行自体脂肪移植手术的患者247例根据其自愿选择的移植方案分成对照组和观察组。对照组123例患者采用PRP联合自体脂肪移植手术,观察组124例患者采用SVF-gel辅助自体脂肪移植手术,对2组患者的临床治疗效果、满意度进行观察比较。结果术后6个月,观察组需要进行二次填充的例数明显少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者满意率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与PRP联合自体脂肪移植相比,SVF-gel辅助自体脂肪移植的移植脂肪存活率及术后患者满意度均有明显优势,临床应用效果好。

ECM/SVF-gel对比Coleman脂肪治疗糖尿病大鼠创面的效果与机制研究

目的对脂肪来源干细胞基质胶(ECM/SVF-gel)与Coleman脂肪治疗糖尿病大鼠创面的疗效进行对比,并探讨ECM/SVF-gel促进创面愈合的作用机制。方法选取体重250~300 g的SD雄性大鼠10只,腹腔注射链脲佐菌素进行糖尿病造模,成功后以直径10 mm的组织活检器于大鼠背部制备2个全层皮肤缺损创面,将预先制备好的同种异体Coleman-条件培养基(CM)和ECM/SVF-gel-CM分别注射于2个创面,每个创面各注射100μL,分别命名A组、B组。记录各创面术后第3、7、10、14天愈合情况并计算对比创面愈合率,并在术后第7、14天取创面皮肤组织进行CD34免疫组织化学染色,运用酶联免疫吸附试验试剂盒检测并对比Coleman-CM和ECM/SVF-gel-CM生长因子——表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF-β1)表达水平。结果与A组创面比较,B组创面各时间点愈合情况均更好,创面愈合率更高,差异有统计学意义(P<0.05),新生血管更多;B组ECM/SVF-gel-CM生长因子——EGF、bFGF、VEGF、TGF-β1表达水平均高于A组,其中EGF、bFGF、VEGF表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与Coleman脂肪比较,ECM/SVF-gel促进糖尿病大鼠创面愈合的效果更优,其作用机制可能为通过旁分泌途径分泌生长因子作用于创面。

SVF-gel联合自体颗粒脂肪在外生殖器整形中的临床应用

自体脂肪移植已逾百年,自Coleman技术问世以来,自体脂肪移植得到了长足的发展[1-2]。但自体脂肪移植术后出现的高吸收率现象仍严重影响着其临床效果。细胞辅助的自体脂肪移植(cell-assisted lipotransfer,CAL)自2008年正式提出以来[3],国内外学者对此进行了基础及临床的诸多研究,结果显示,CAL技术能有效地提高移植后脂肪的成活率[4-7]。