脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的 研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果 从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外扩增可超过 10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化 ,分化的细胞早期表达巢蛋白 ,后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,在最适合的诱导条件下约 60 %～85 %的细胞表达这两种神经元的标志物。

BrdU标记家兔脂肪组织来源干细胞的体外研究

目的通过采用BrdU标记连续培养的家兔脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stromal stem cells,ADSCs),检测其最佳标记时间、标记剂量及毒性作用,探讨其作为干细胞标记示踪方法的可行性。方法8～12周龄健康新西兰大白兔6只,雌雄不限,体重1.5～2.0kg。切取腹股沟皮下1～2mL脂肪组织,采用贴壁法体外分离培养ADSCs,并进行鉴定。取第3代细胞以终浓度分别为5、10、15和20μg/mL的BrdU进行标记,分别记为A、B、C及D组;另1孔不含BrdU,作为空白对照(E组)。标记12、24、48和72h后,采用免疫组织化学检测各组细胞阳性率,苔盼蓝排染法行细胞计数观察标记后细胞活性。结果原代培养的ADSCs形态主要为宽大、扁平、短梭形细胞;传代后细胞形态主要为长梭形;第3代ADSCs经诱导均能向成骨细胞和脂肪细胞分化。免疫组织化学观察:第3代ADSCs经BrdU标记后,在荧光显微镜下胞核呈绿色荧光。孵育12h,A、B、C、D组细胞标记阳性率逐渐增高,分别为30.6%±2.3%、32.4%±1.9%、45.8%±1.8%、50.8%±3.1%,C、D组与A组比较,差异有统计学意义(P<0.01);24h,A、B、C及D组标记率分别为45.9%±2.0%、87.9%±3.3%、90.6%±2.9%及91.7%±3.2%;48h和72h,A、B、C、D组标记情况与24h相似;E组各时间点细胞标记阳性率为0。孵育24、48及72h,B、C及D组细胞阳性率与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。孵育12、24、48及72h细胞计数,各组细胞活性均在90%以上,A、B、C、D组与E组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论BrdU标记ADSCs的最佳时间为48h,最佳浓度为10μg/mL;BrdU对细胞标记率及安全性高。

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adiposetissue-derivedstromalcells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和β管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%～0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%～50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。

脂肪组织来源干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的:探讨脂肪组织来源干细胞(ADSC)作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法:采用胶原酶消化SD大鼠脂肪组织,经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。15只SD大鼠随机分成3组:ADSC复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原移植组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于SD大鼠背部皮肤缺损处,比较观察创面修复效果。结果:ADSC复合胶原实验组、单纯胶原移植组和空白对照组创面愈合时间分别为:(14.3±1.7),(16.9±2.5)和(21.2±4.2)d,差异有显著性意义(P<0.05)。组织学观察显示,ADSC复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原移植组和空白对照组明显增多。结论:ADSC复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以ADSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。

体外培养脂肪组织来源干细胞与胶原/壳聚糖复合支架的亲和性

目的:制备适合脂肪组织来源的干细胞生长的支架,观察复合支架各组成的体积比率与细胞培养的亲和性。方法:实验于2006-09/2007-01在大连理工大学干细胞与组织工程研发中心完成。①实验方法:将3.55g/LⅠ型胶原和20g/L壳聚糖分别以9∶1,7∶3,5∶5,3∶7,1∶9的体积比混合冻干,碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联后再次冻干并进行分析。②实验评估:扫描电镜观察不同材料交联前后的微观结构;IPP软件分析计算支架的平均孔径;测量支架的吸水性和孔隙率;通过胶原酶检测支架的体外生物可降解性;扫描电镜和苏木精-伊红染色观察脂肪组织来源的干细胞在复合支架上的生长情况。结果:①交联前后的微观结构:冻干后的各种支架材料呈白色,表面粗糙,材料内部呈海绵状多孔隙结构,其中以胶原/壳聚糖体积比为9∶1的复合支架最为疏松,1∶9的支架最致密。扫描电镜下支架的胶原含量越高,支架内的胶原丝越多,支架的孔与孔之间相互连通构成了通孔。交联前后支架的形态结构无明显改变。②支架的平均孔径:交联后体积比为9∶1,7∶3和5∶5的复合支架孔径50～200μm,可用于细胞的三维培养。③支架的吸水性和孔隙率:体积比为5∶5的复合支架的吸水性和含水量最高,而7∶3次之;多孔支架在水中未发生明显的溶胀现象;支架的孔隙率均在90%以上。④支架的体外生物可降解性:未交联的支架随着胶原含量的减少,支架的降解速率增加。而交联后随着胶原含量的减少,降解速率减慢,交联后的复合支架降解速度较未交联慢。⑤脂肪组织来源的干细胞在复合支架上的生长情况:脂肪组织来源的干细胞在支架上培养5d后扫描电镜观察细胞在7∶3的支架上爬行生长并融合成片,苏木精-伊红染色观察支架孔内及表面出现大量的细胞团,并融合成片状,而5∶5支架上黏附生长的细胞较少。结论:结合支架的孔径、吸水性、孔隙率、体外生物可降解性和细胞与支架的生物相容性,可知体积比为7∶3的复合支架对脂肪组织来源的干细胞的亲和性较好,适于脂肪组织来源的干细胞的三维培养。

脂肪组织来源干细胞促进软组织创面愈合的实验研究

目的探讨大鼠脂肪组织来源干细胞(rADSCs)对软组织创面的促愈作用并比较全身和局部注射两种移植途径的有效性。方法分离培养获得SD大鼠的ADSCs,体外进行成脂、成骨、成神经的诱导分化鉴定。在大鼠背部制作软组织缺损创面模型,分别经创面局部点状注射和尾静脉注入全身途径移植DiI标记的ADSCs,移植细胞数为2.4×106/只。术后3、7、11、14d观察创口收缩率,愈合时间等,24d收集创面组织标本行荧光显微镜及常规HE染色观察。结果 rADSCs具有成脂、成骨、成神经分化潜能。局部途径在术后3d即可见显著的创面收缩,全身途径在术后7d创面收缩开始加速,这两组创面愈合时间均短于对照组,但两组间比较无显著性差异。组织学观察发现细胞移植组较对照组肉芽丰富,成纤维细胞、腺样结构及新生血管形成更明显。结论 rADSCs对软组织创伤具有促愈作用,局部较全身移植途径起效快且发挥作用更明显。

三种示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞的对照研究

目的比较3种不同的荧光示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞(ASCs)的效率,以寻找脂肪组织来源干细胞最佳的标记示踪方法。方法吸脂术获取人脂肪组织,胶原酶消化法后体外贴壁法培养,获得的长梭形细胞经鉴定为脂肪组织来源干细胞。分别使用5μl DiI,10μg/ml的脱氧尿苷BrdU及50 MOI的携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒进行标记,荧光显微镜观察不同时间点及不同代数的脂肪干细胞的标记效率及形态变化。结果成功分离获得ASCs,经鉴定其表达间充质干细胞表面标志,并能被成功实现成脂、成骨及成软骨的诱导分化。DiI标记ASCs 48 h后,荧光显微镜下观察可见100%细胞浆呈现红色荧光,胞核未染,保持了良好的正常形态。但细胞传代后荧光衰减迅速。10μg/ml BrdU标记ASCs 48 h后,90%的胞核呈绿色荧光,传代后胞核荧光逐渐衰减。携带GFP重组腺病毒转染ASCs 24 h后胞浆内即可见绿色荧光,5 d后90%以上的细胞呈现绿色荧光。反复传代后未见明显的荧光衰减。结论 DiI,BrdU及携带GFP的重组腺病毒均能有效的标记人脂肪组织来源干细胞。DiI示踪技术为细胞膜标记,BrdU为细胞核标记,两项技术均操作简单,但传代后衰减迅速,适合于短期标记示踪。携带GFP的腺病毒标记方法较为复杂,但反复传代后仍不衰减,适合于长期的标记示踪观察。

脂肪组织来源干细胞的细胞生物学研究

目的探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红“O”染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;MTT比色法活性测定均证实ASCs具有很强的增殖活性,细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。丫啶橙染色3、4、6、8代无明显衰老。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均成阳性;HLA-DR、CD133表达为阴性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红“0”染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。

腺病毒重组绿色荧光蛋白转染脂肪组织来源干细胞的特点

目的:体外基因转染成人脂肪组织来源的干细胞后,观察腺病毒载体能否有效地转染及对细胞的影响。实验应用腺病毒增强型绿色荧光蛋白进行体外基因转染以验证基因修饰效果。方法:实验于2006-10/2007-02在南方医科大学生物技术工程研究所实验室完成。实验对象:脂肪组织取自南方医科大学附属医院整形科手术室5例成年女性腹部吸脂术患者,排除了冠心病、高血压及糖尿病等。手术前均与患者本人谈话并征得其同意,获取脂肪组织进行实验,并经医院伦理委员会批准。实验方法:分离人脂肪组织,进行原代和传代培养。取第4代脂肪组织来源干细胞进行流式细胞术表型鉴定,并将0,10,20,30,50,100感染复数值的腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白,通过活力和增殖实验进行体外转染,观察其对脂肪组织来源干细胞的影响。结果:5份标本均成功培养出脂肪组织来源干细胞,生长良好,均成功进行了腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白基因转染。①原代细胞培养48h后可见细胞贴壁,13d后可见细胞铺满瓶底80%细胞绝大多数呈梭形。1∶2传代后细胞增殖速度明显加快,3d后细胞即已长满培养瓶底,即可传代。第4代的脂肪组织来源干细胞表型,呈CD29+,CD34-,CD44+,CD106-,CD133-和HLA-DR-。②腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白转染24h可见绿色荧光,5d荧光表达强度最强,脂肪组织来源干细胞细胞传代培养后仍有强荧光表达。③转染组和未转染组细胞培养1,3,5,7,9,11d时细胞活力、增殖分化均无统计学差异。结论:腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白可成功进入脂肪组织来源干细胞,感染复数值为50时较为理想。

人脂肪组织来源基质干细胞成脂分化及Ad-EGFP体外转染研究

目的探讨重组腺相关病毒载体能否有效地转染脂肪组织来源基质干细胞及(ADSC)其影响,同时为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用抽脂法分离培养ADSC,诱导培养液诱导细胞成脂分化,行细胞形态学检查,细胞表面抗原鉴定,油红O染色,评价细胞成脂情况。在此基础上转染Ad-EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的理想感染复数(MOI)值,同时通过活力和增殖实验进行Ad-EGFP体外转染对ADSC的影响研究。结果细胞扩增迅速,形态良好,经诱导后呈现明显的成脂改变。实验确定Ad转染细胞的较佳MOI值为50,以此值转染Ad-EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达,并可传至子代,可以满足示踪标记的需要。Ad转染效率高,对细胞活性影响小。结论ADSC的培养和分化能满足脂肪组织工程的要求;Ad长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法。

环孢菌素A-纳米乳促进猪脂肪组织来源干细胞的增殖

目的评估环孢菌素A-纳米乳(cyclosporine A-nanopaticals emulsion,CsA-NP)对体外脂肪组织来源干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ASCs)增殖和分化的影响。方法提取小型猪腹股沟脂肪组织经分离、消化、培养和扩增。ASCs表面标志物经流式细胞仪检测。ASCs增殖和分化采用细胞直接计数和MTT检测。结果检测结果提示ASCs分子表型CD29、CD44、CD90、CD105均呈阳性表达,而CD31、CD34、CD45、HLA-DR均呈阴性表达。CsA-NP浓度在(0.01～1.00mg/ml)之间1～3天对细胞增殖有明显促进作用(P<0.01);其中又以0.5mg/ml的CsA-NP浓度组为最佳。而5mg/ml以上抑制细胞增殖。结论 CsA-NP能促进ASCs增殖和分化,但呈现剂量、时间效应。

脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化及其在脑缺血疾病治疗中的应用进展

近年来，细胞移植治疗脑缺血疾病已成为研究热点，多种细胞已被用于基础研究及临床治疗中。目前常用的种子细胞是骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），它在一定的条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌母细胞和神经细胞。但骨髓穿刺具有创伤性，有一定的痛苦，且只能得到少量的细胞（大约1MSC／10s基质干细胞），需经体外大量扩增才能满足临床需要，是一个费时、昂贵、并有细胞污染和丢失风险的过程，因此。广泛、大量使用颇为受限。

多囊卵巢综合征患者血清网膜素、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9、内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂水平与病情的相关性和诊断价值的研究

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清网膜素(Omentin)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)、内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平与患者病情的相关性及其对PCOS的诊断价值。方法选取2015年10月至2021年3月邯郸市中心医院收治的106例PCOS患者作为观察组,根据PCOS分型标准将其分为1型组(n=36)、2型组(n=28)、3型组(n=24)、4型组(n=18)4个亚组;选取同期64例健康女性体检者作为对照组。检测两组血清Omentin、CTRP9、Vaspin水平,观察组患者行经阴道超声检查,统计卵巢体积和卵巢直径<9mm的卵泡数目。采用Pearson相关性分析评价血清Omentin、CTRP9、Vaspin水平与病情的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清Omentin、CTRP9、Vaspin水平对PCOS的诊断价值。结果观察组血清Omentin、CTRP9水平低于对照组,Vaspin水平高于对照组(P<0.05)。与1型组比较,4型组、3型组、2型组血清Omentin、CTRP9水平降低,且4型组<3型组<2型组(P<0.05)。与1型组比较,4型组、3型组、2型组血清Vaspin水平升高,且4型组>3型组>2型组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清Omentin水平与卵巢体积、卵泡数目均呈负相关(r=-0.458、-0.469,P<0.05),血清CTRP9水平与卵巢体积、卵泡数目均呈负相关(r=-0.391、-0.402,P<0.05),血清Vaspin水平与卵巢体积、卵泡数目均呈正相关(r=0.429、0.452,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清Omentin诊断PCOS的曲线下面积(AUC)为0.841,临界值为71.74ng/L;血清CTRP9诊断PCOS的AUC为0.782,临界值为229.04ng/mL;血清Vaspin诊断PCOS的AUC为0.808,临界值为0.62mg/L;三者联合诊断PCOS的AUC为0.908。结论PCOS患者血清Omentin、CTRP9水平降低,Vaspin水平升高;血清Omentin、CTRP9、Vaspin水平与患者病情密切相关;血清Omentin、CTRP9、Vaspin三者联合检测对PCOS诊断具有重要价值。

基底膜基质胶携带人脂肪组织来源间充质干细胞移植改善心肌梗死大鼠心脏功能

目的:应用基底膜基质胶(matrigel)携带人脂肪组织来源间充质干细胞(ADMSCs)在大鼠的心肌梗死部位注射,观察其对细胞存活的影响及改善心梗模型大鼠心脏功能的能力。方法:分离、培养、扩增人ADM-SCs,左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型。将大鼠急性心肌梗死模型随机分为4组,对照组(PBS组)、matrigel组、PBS+ADMSCs组、matrigel+ADMSCs组,对移植4周后细胞的存活及心梗局部新生血管的密度进行测量,并利用心脏超声检测大鼠心脏功能。结果:与其它各组相比,matrigel+ADMSCs组的细胞4周存活细胞数量以及心肌梗死区域新生血管密度均显著提高,心脏超声结果也表明该组大鼠的心脏功能改善最为显著。结论:基底膜基质胶能够提高人脂肪组织来源间充质干细胞在大鼠心肌梗死部位的存活,有助于提高心肌梗死部位微血管生成并改善心肌梗死大鼠的心脏功能。

核心结合因子过表达定向诱导脂肪组织来源干细胞体内、外成骨

目的:探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)和核心结合因子(Core Binding Factor Alpha 1,Cbfa1)的成骨潜能及其应用于基因增强的骨组织工程临床治疗的可能性。方法:利用重组了Cbfa1的腺病毒载体在ADSCs中过表达Cbfa1。采用Realtime RT-PCR定量检测成骨特异性基因和成脂特异性基因的表达变化。同时采用Von Kossa染色观察Cbfa1过表达后21天ADSCs内钙盐的沉积情况。在体内实验中,裸鼠右下肢肌肉内注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞,8周后,采用石蜡切片(HE和甲苯胺蓝染色)检测软骨和骨的生成情况。结果:Cbfa1转染后3天,ADSCs中检测到Cbfa1 RNA表达,及骨钙素、骨桥素、I型胶原表达,同时脂蛋白脂酶表达下降。Vocassa染色证明,转染Cbfa1后,ADSCs细胞基质中的钙盐沉积显著增加。体内实验8周后,注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞的肌肉内有明显的软骨和骨组织形成。结论:Cbfa1过表达可定向诱导ADSCs体外钙盐沉积和体内成骨,可作为基因增强的骨组织工程中有潜力的治疗基因和载体细胞。

脂肪组织来源干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的分离、培养、分化和鉴定的方法,为进一步的实验研究提供理论依据。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均呈阳性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34,CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"O"染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。

脂肪组织来源干细胞治疗缺血性心脏病的研究进展

干细胞移植治疗心血管疾病尤其是缺血性心脏病取得了令人鼓舞的结果,但既往研究主要集中于胚胎干细胞和骨髓间充质干细胞的研究。近年来,人们发现脂肪组织来源干细胞(ASCs)与其他组织来源干细胞相比具有来源广、取材创伤小、具有多向分化潜能、增殖能力强等优点,故近几年来ASCs在心血管疾病治疗上的作用受到越来越多的重视。本文对ASCs细胞生物学特性以及ASCs作为种子干细胞在缺血性心脏病、心肌细胞再生方面的基础和临床研究进展作一综述。

脂肪组织来源的干细胞体外培养随机恶性转化

目的研究脂肪来源干细胞在体外能否恶性转化。方法从小鼠脂肪组织培养出脂肪组织来源干细胞(ADSCs),观察细胞是否发生恶性转化,应用免疫细胞化学方法检测转化细胞的相关标志物的表达,并对其染色体结构进行分析,并将转化细胞移植到裸鼠皮下以检测其成瘤性。结果 1个培养瓶中的细胞在体外培养4个月左右发生了转化,已经永生化,目前体外培养超过100代,细胞仍维持原来的增殖速度。细胞表达中胚层的标志物vimentin,但不表达pan-CK,说明其是间充质来源;同时表达PCNA、Ki67和VEGF-c,不表达p16;染色体分析证明为非整倍体,有广泛的易位;透射电镜下可见细胞表面微绒毛结构;细胞在软琼脂中没有克隆形成能力;裸鼠皮下移植能够形成肿瘤组织,肿瘤组织的主体成分为肉瘤。结论脂肪组织来源的干细胞在体外长期培养能够发生恶性转化,裸鼠皮下移植能够形成肉瘤。

脂肪组织来源基质细胞的心肌样细胞分化

脂肪组织来源基质细胞具有多向分化潜能、易获得性、易于分离培养和较强的再生能力等突出优点,已成为一种新的组织工程干细胞来源。现就脂肪组织来源基质细胞生物学特性、影响分化因素、向心肌样细胞分化及治疗缺血性心脏疾病等方面进行综述。

人脂肪组织来源的干细胞体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能

目的初步探讨人脂肪组织来源的干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSC)体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能。方法分离、纯化、体外扩增hADSC,流式细胞术鉴定所获得细胞的CD29+、CD34-、CD49d+、CD105+、CD106-的表达情况。成脂、成骨诱导鉴定其多向分化潜能。在DMEM/F12体系、KM体系及上述二者等体积混合的KM/DMEM/F12体系内添加不同梯度浓度的生长因子对hADSC进行体外诱导:0μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、30μg·L-1、40μg·L-1、50μg·L-1的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF),及50μg·L-1EGF+10μg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(basicfibro blast growth factor,bFGF)和50μg·L-1EGF+20μg·L-1bFGF。连续诱导21d,观察hADSC形态学的改变及第21天时角膜特异性蛋白AE5(CK3/CK12)的免疫化学表达情况,比较不同培养体系及不同浓度生长因子对hADSC诱导作用的差异。结果流式细胞仪测定传3-5代的细胞CD34-、CD106-、CD29+、CD49d+、CD105+。成脂、成骨体外诱导14d后,油红O、碱性磷酸酶染色阳性率分别为74.6%和29.3%。KM体系中加入终浓度为0～50μg·L-1EGF诱导21d后,hADSCAE5阳性细胞率均占90%以上。其中,40μg·L-1EGF诱导下的AE5阳性细胞率为98.7%,50μg·L-1EGF可达到100%。而加入bFGF的hADSC则为AE5弱阳性。而另2个体系对各浓度EGF、bFGF诱导的hADSC的作用均为阴性。结论人吸脂术废弃液中可获得大量高纯度脂肪组织来源的干细胞,经体外条件诱导具备向角膜上皮样细胞分化潜能。添加EGF的角质细胞培养液有利于其分化,并具有浓度依赖性,bFGF则对分化有抑制性作用。