多因子联合诱导脂肪组织源性干细胞分化为神经元样细胞

背景:国内均可见有探讨脂肪干细胞向神经元诱导分化的相关研究报道,但运用差速贴壁法纯化脂肪组织源性干细胞,多因子联合诱导脂肪组织源性干细胞分化为神经元样细胞的研究鲜有报道。目的:观察多因子联合诱导和分步诱导方案诱导大鼠脂肪组织源性干细胞体外分化为神经元样细胞的可行性。方法:取SD雄性大鼠腹股沟和附睾脂肪垫脂肪组织,酶消化法分离、差速贴壁法纯化脂肪组织源性干细胞。免疫荧光细胞化学法鉴定脂肪组织源性干细胞(CD44,CD49d,CD106);"鸡尾酒"式神经元诱导培养基对脂肪组织源性干细胞进行诱导分化,并用免疫荧光细胞化学法鉴定(Nestin和NeuN)分化结果。结果与结论:大鼠腹股沟和附睾脂肪垫脂肪组织内分离、原代培养的脂肪组织源性干细胞形态均一,呈长梭形,细胞核椭圆形,核仁明显,细胞质染色浅,呈旋涡状克隆样生长;CD44和CD49d阳性表达而CD106阴性;诱导培养基内培养6h后脂肪组织源性干细胞呈锥体形或不规则,有短而细的指状突起;24h后多数细胞显示类神经元的形态学特征,且Nestin和NeuN阳性。提示肪组织源性干细胞在多因子"鸡尾酒"式培养基内可向神经元方向分化。

脂肪组织源性干细胞分步诱导分化为神经元样细胞

目的探讨脂肪组织源性干细胞(ADSCs)诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法 ADSCs分离自雄性SD大鼠附睾脂肪垫,差速贴壁法纯化ADSCs,传至第3代培养细胞行流式细胞术行表型鉴定(CD106,CD11b,CD45,CD90,CD29,CD49d),并进行成脂诱导。取鉴定后的ADSCs用分步诱导法,即先用含10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20ng/ml表皮生长因子(EGF)、2%B27的DMEM/F12培养基I培养,诱导其向神经干细胞转分化,再用含10 ng/ml胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),10 ng/ml脑源性神经营养因子(BDNF),1μmol/L维甲酸(RA)的培养基II诱导分化为神经元样细胞(NLCs),免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物巢蛋白(nestin),神经细胞特异性标志微管相关蛋白(MAP2),神经元核蛋白(NeuN)。结果分离纯化的ADSCs CD90、CD29表达强阳性;成脂诱导分化后细胞油红O染色阳性;ADSCs经培养基I培养7 d后聚集成球样细胞团悬浮于培养液中,表达nestin;继而用培养基II诱导分化4 h后细胞球逐渐贴壁,球周边少数细胞向外发出突起,形似神经元,MAP2、NeuN均呈阳性。结论特定条件下,ADSCs在体外可被逐步诱导分化为NLCs。

地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌血管内皮细胞生长因子的影响

目的探讨地黄低聚糖(RGO)对分离、培养的人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响。方法人脂肪组织用2.5 g/L胶原蛋白酶Ⅰ消化、分离ADMSCs。取沉淀的细胞进行培养,用免疫细胞化学染色法鉴定其表面CD44、CD105、CD45和CD34分子的表达。以IMDM培养基作为空白对照,加入RGO配成不同浓度(0、1、10、100及400 mg/L)的IMDM分别培养ADMSCs,用MTT比色法检测ADMSCs的增殖。培养72 h后,用ELISA法测定不同培养基中VEGF的含量。结果免疫细胞化学染色显示,分离培养的细胞表面CD44+、CD105+、CD34-、CD45-。MTT比色法的结果显示,与空白对照组相比,1和10 mg/L组无明显差别,100及400 mg/L组明显升高(均P<0.01),且100 mg/L组明显高于400 mg/L组(P<0.05)。0、1、10、100、400 mg/L5个组VEGF的含量,分别为(627.88±33.86)、(655.50±40.29)、(666.50±43.20)、(843.50±53.05)和(722.88±51.34)ng/L。结论RGO对ADMSCs的增殖有促进作用,且呈一定的浓度依赖性,并导致其分泌VEGF的作用增强。

ADSCs细胞辅助脂肪颗粒移植填充面部软组织凹陷的临床疗效研究

目的:探究脂肪组织源性干细胞(Adipose derived stemcells,ADSCs)辅助脂肪颗粒移植(Cell-assisted lipotransfer,CAL)在填充面部软组织凹陷中的临床应用。方法:选取2015年5月-2018年5月经笔者医院诊治的面部软组织凹陷患者86例,根据随机数字表法分为研究组和对照组,各43例。两组患者均采用局部肿胀吸脂术于下腹部抽取自体脂肪颗粒组织。研究组经分离、纯化后获取的ADSCs与脂肪颗粒混合均匀后以填充面部软组织凹陷;对照组单纯采用脂肪颗粒移植治疗。观察两组患者术后临床疗效并调查其满意度,比较两组患者术后并发症发生情况。结果:研究组患者满意度为100.00%(43/43)显著高于对照组79.07%(34/43),术后并发症发生率为0.00%显著低于对照组的37.21%(16/43),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CAL可通过提高自体脂肪颗粒存活率以达到较好的面部软组织凹陷填充效果,对患者面部损伤小且术后并发症少,在面部软组织凹陷的治疗中具有较好的临床应用价值。

富含血管基质层细胞自体脂肪颗粒移植纠正颜面萎缩的临床观察

目的:探讨富含血管基质层细胞(stromal vascular fraction,SVF)的自体脂肪颗粒注射移植在面部萎缩中的应用,达到提高脂肪存活率效果。方法:从2011年8月到2013年2月,我们选择6例半侧颜面萎缩的患者,于下腹部采用肿胀吸脂术获得自体颗粒脂肪,通过静置,纯化后采用多层次、多隧道、多点的注射方法,充填修复颜面部凹陷畸形。术后3个月随访,效果欠佳者即进行第二次手术脂肪颗粒移植,直至效果满意为止。结果:本组6例半侧颜面萎缩患者,随访3～12个月(平均6.5个月),充填后脂肪吸收率低,面部两侧基本达到对称,效果满意。结论:应用自体颗粒脂肪移植修复半侧颜面萎缩操作简单,创伤性小,效果理想,对于轻度中度的颜面萎缩患者而言,是一种较为理想的简单有效的治疗方法,值得推广。

miR-217在hADSCs增殖与成骨分化中的作用及其机制研究

目的探索microRNA-217(miR-217)在调控人脂肪组织源性间充质干细胞(hADSCs)增殖与成骨分化中的作用机制。方法分离、纯化培养人hADSCs,体外诱导成骨分化,基因芯片检测hADSCs向成骨细胞分化过程中microRNA表达。向hADSCs转染miR-217模拟物或miR-217抑制剂,CCK8检测细胞增殖,实时定量PCR检测成骨细胞特异转录因子(Osterix)、骨钙蛋白(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)的表达变化。结果基因芯片显示hADSCs成骨细胞分化过程中多个microRNA表达上调,其中miR-412-5p、miR-19a-3p、miR-217升高趋势最明显,qPCR显示在hADSCs向成骨细胞分化过程中miR-217升高最显著,差异有统计学意义(P<0.05);miR-217模拟物能够促进hADSCs细胞增殖、而miR-217抑制剂能抑制增殖;miR-217模拟物促进hADSCs内Osterix、OCN、Runx2、ALP mRNA的表达,相反miR-217抑制剂显著抑制上述基因表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-217能促进hADSCs增殖,通过正向调控成骨相关基因从而促进hADSCs向成骨细胞分化。