人脂肪细胞外基质的制备及评价

目的探寻细胞体外生长理想的三维支架结构的。方法人脂肪细胞外基质的制备:通过物理、化学、酶处理联合的方法进行脂肪组织脱细胞处理,获得人脂肪细胞外基质成分,制备成基质材料;并对人脂肪细胞外基质材料进行评价。采用CCK-8法检测基质材料的细胞毒性,观察基质材料的体外黏附情况;采用Ki67染色来观察h ADSC-gfp在基质材料的增殖情况,观察脂肪间充质干细胞的分化功能。结果⑴脂肪组织经脱细胞处理可制备不同形状的基质材料。⑵基质材料脱细胞彻底。⑶基质材料中含丰富的胶原蛋白、层黏连蛋白等有效成分。⑷基质材料无细胞毒性;细胞在基质材料上的黏附及增殖能力强;接种基质材料上的脂肪来源干细胞可诱导向表皮细胞分化。结论人脂肪细胞外基质制作方法简单,脱细胞较彻底,有效成分保留较好,无细胞毒性,易于细胞黏附、增殖及分化。

ADSCs粘附脂肪组织细胞外基质支架构建组织工程化脂肪的实验研究

目的探讨以成人脂肪来源干细胞(Adipose-derived Stem Cells,ADSCs)为种子细胞粘附于人脂肪组织细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)支架构建组织工程化脂肪的条件与方法。方法采用Body-jet水动力辅助吸脂系统自成人下腹部皮下脂肪丰厚区抽吸获取颗粒脂肪100 ml,酶消化法分离、培养、多向分化诱导鉴ADSCs。从吸脂获取的脂质部分分离提取人脂肪组织ECM成分,经过低温冻干、粉碎、灭菌等一系列处理,得到粉末状ECM产物,电镜扫描观察表面特征并将其与脂肪来源干细胞进行粘附实验,探讨其作为支架材料的可行性。收集ADSCs,以2×10~6/ml的细胞密度粘附于ECM支架复合后移植于裸鼠背部皮下,同鼠对侧背部皮下只移植等量ADSCs作为对照,每侧移植0.5 ml,共6只实验鼠。8周后取材,称量标本湿重,收集数据并用SPSS18.0软件进行统计学处理分析。结果从脂肪组织中分离得到ADSCs和ECM支架。ADSCs与ECM支架相容性良好,粘附率达(89.87±2.59)%,细胞在支架表面可充分伸展生长。体内移植8周后,实验侧和对照侧都能够形成脂肪组织,湿重比较P=0.038<0.05,实验侧较对照侧重,差别具有显著意义。经HE切片及油红O染色均证实实验侧形成成熟的脂肪组织,对照侧只能形成少量成熟的脂肪组织。结论 ADSCs粘附脂肪组织细胞外基质支架在体内能够成功构建成熟的脂肪组织,且8周后支架并无明显吸收,可作为一种较理想的构建组织工程化脂肪的方法。

影响脂肪组织工程中细胞外基质支架的相关因素研究进展

支架作为组织工程三要素之一,它主要是作为细胞临时附着点,其降解速度应与组织再生速度相匹配,待组织重建后支架可降解排泄,不对人体造成任何损害。目前研究的组织工程支架主要有天然可降解高分子材料、人工合成的可降解高分子材料、无机材料等,脂肪组织脱细胞基质支架作为近年来的研究热门,因其来源丰富、取材方便,受到研究者们的青睐,本文就影响脂肪组织细胞外基质支架的相关因素综述如下。

细胞外基质作为组织工程支架的最新进展

目前存在很多由于先天缺陷、创伤或肿瘤切除等导致人体完整性缺陷的现象,故近年来组织工程成为研究热点。支架材料是组织工程的要素之一。人脂肪组织细胞外基质粉末呈三维空间结构,能促进干细胞增殖、分化、新生血管形成及生长因子释放等,已成为组织工程支架的新材料。

脱细胞脂肪组织制备：能否成为异体注射或原位成脂的软组织填充物

背景:通过脱细胞脂肪组织构建无种子细胞的组织工程脂肪为当前软组织填充的研究热点。目的:探讨近年来脱细胞脂肪组织的制备方法对其移植后诱导脂肪再生效果的影响,并展望其临床应用前景。方法:检索1971年1月至2018年12月PubMed数据、Elsevier数据库相关文献,英文检索词为“adipose tissue engineering;adipose tissue extracellular matrix;soft tissue repair;angiogenesis;adipogenic induction”。阅读近年国内外与脱细胞脂肪组织制备和移植相关的文献,从脱细胞脂肪组织制备方法的改良,交联细胞因子和生物材料等方面进行总结归纳。结果与结论:当前研究表明,脂肪组织细胞外基质可作为软组织填充的理想支架材料,植入皮下可募集宿主干细胞并诱导期增殖和成脂分化。但现有的脱细胞方案会导致细胞外基质蛋白和结构的损失,这极大的影响了脱细胞脂肪组织植入体内的脂肪再生能力,但通过超临界二氧化碳设备脱油、机械力预处理、交联细胞因子或生物材料等手段可以减少脱细胞脂肪组织制备过程中细胞外基质蛋白的损失和或补充具有促进组织再生功能的蛋白,最终提高脱细胞脂肪组织移植后的血管和脂肪新生能力。脱细胞脂肪组织由于其天然的成脂诱导能力,在脂肪组织工程中具有强大的应用前景,若能克服其制备流程中细胞外基质蛋白损耗或在安全可控的前提下,有望成为可异体注射并原位成脂的理想软组织填充物。

脂肪移植技术研究进展

脂肪移植距今已有100余年的发展历史,在面部或非面部整形与疾病治疗中应用广泛,脂肪移植的效果提升与Coleman技术、svf-gel等技术的提出密切相关。近年来,脂肪干细胞胶凭借其自身优势在面部年轻化等领域替代了纳米脂肪技术的应用,存在可观的发展前景。本文就脂肪移植概念、发展、应用进展及相关技术进行总结与评述,旨在改善临床应用脂肪移植技术的现状并为新技术的开发提供理论参考。

脂肪组织脱细胞基质研究现状及展望

随着对细胞生物学和分子生物学研究的深入、学科间的交叉和相互渗透以及高新技术的推广应用,创伤修复与组织再生从基础理论研究到临床应用都获得了的令人振奋的成果,由细胞外基质组成的脱细胞组织已被临床用来支持组织和器官的再生。脂肪组织移植已成为整形外科及修复重建领域重要的手段广泛用于软组织缺损的修复和以美容为目的的软组织填充。来源于脂肪组织由细胞外基质组成的脱细胞基质已成为脂肪医学一个新的发展方向,展示出良好的应用前景。脂肪组织脱细胞基质的产生原因可以分为物理性、化学性、酶学以及多种方法的联合,不同的方法对脂肪组织清除细胞的效果不同,对细胞外基质的影响也不同,最终会使宿主对移植的脱细胞材料产生的反应不同,进而影响脱细胞产品的安全性和有效性。现就近年来脂肪组织脱细胞基质研究进展作一综述。

机械剪切力对人脂肪组织细胞表型及特性的影响

目的分析脂肪胶制备过程中所受的剪切力对最终脂肪成活率的影响。方法自2018年7月至2019年1月,广东省妇幼保健院医学美容科获取吸脂手术患者的脂肪,将其制备成标准的Coleman fat作为对照组,再将Coleman fat进一步利用机械剪切分离,制备成的基质血管片段(stromal vascular fraction,SVF)/细胞外基质(extracellular matrix,ECM)凝胶状(gel)脂肪(SVF/ECM gel)作为实验组。对这两种脂肪成活率、细胞组分及表型进行对比研究。结果裸鼠背部移植后3、14、28、60 d,SVF/ECM gel的成活率显著高于Coleman fat。脂肪的粘度与剪切力成正比。虽然剪切力不影响细胞总数,但它显著减少了活细胞的数量。流式细胞术显示,SVF/ECM gel中间充质干细胞、细胞外膜上脂肪基质细胞和脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)数量较多,但内皮祖细胞数量较Coleman fat减少。结论机械剪切力分离脂肪可以增加脂肪细胞的多能性,从而在细胞疗法中改善脂肪移植物成活率。

生物来源皮肤组织工程支架的研究进展

生物来源组织支架材料具备良好的物理和机械特性,可为细胞提供良好的纳米和微观结构,激活细胞所需的各类生物因子,从而促进细胞附着、增殖和分化。天然生物来源支架材料的特性,特别是细胞外基质材料脱细胞脂肪组织基质,在干细胞传递及损伤组织修复等方面有优势及不足,有希望用于皮肤组织工程进行软组织缺损的注射及填充。