脂肪细胞外泌体调节NOX4/TGF-β1/Smad信号通路促进老年自发性高血压大鼠心肌纤维化

目的 探究脂肪细胞外泌体对老年自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及机制。方法 采用差速离心法提取脂肪细胞所分泌的外泌体,透射电镜和Western印迹鉴定外泌体;实验动物分为对照组、SHR组、exosome组,exosome组尾静脉注射脂肪细胞外泌体,检测各组收缩压(SBP)、左心室重量指数(LVI)、心肌胶原容积分数(CVF)、血管周围胶原面积(PVCA)、超氧化物歧化酶(SOD)、心肌活性氧(ROS)、羟脯氨酸、白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ表达;p-细胞质果蝇蛋白质(Smad)、Smad、尼克酰胺腺嘌呤氧化酶(NOX)4、转化生长因子(TGF)-β1表达。结果 相比于SHR组,exosome组SBP、LVI显著升高(P<0.05),CVF、PVCA显著升高(P<0.05),SOD、ROS、羟脯氨酸及血清炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α均显著升高(P<0.05),心肌组织PPARγmRNA表达显著下调(P<0.05),NOX4、TGF-β1表达及Smad磷酸化水平均显著上调(P<0.05)。结论 脂肪细胞外泌体能够通过影响NOX4/TGF-β1/Smad信号通路而促进老年自发性高血压大鼠心肌纤维化。

脂肪间充质干细胞外泌体对体外培养压力损伤的大鼠RGCs的保护作用

目的:通过体外建立大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)压力损伤模型,研究脂肪间充质干细胞(ADSCs)外泌体对损伤的RGCs的保护作用。方法:培养ADSCs收集上清提取并鉴定外泌体,将体外培养大鼠RGCs分为正常培养的RGCs对照组、不同压力(40、80、120 mmHg)培养的RGCs模型组、不同压力培养的RGCs加入外泌体治疗组,通过CCK-8法检测各组RGCs细胞增殖活力,qPCR法检测各组RGCs中BDNF、Caspase-3的mRNA表达水平,Western Blot检测各组RGCs中BDNF、Caspase-3的蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测发现,在对照组中,与24 h的细胞增殖活力相比,48 h时细胞增殖活力上升(P<0.05)。在48 h时,与加压40、80、120 mmHg模型组相比,加入外泌体后细胞活力均上升(均P<0.05)。qPCR法检测发现,与对照组比较,40 mmHg组中BDNF mRNA表达下降,但无差异(P>0.05),80、120 mmHg组中BDNF mRNA表达下降(均P<0.05)。加压40、80 mmHg组加入外泌体后RGCs的BDNF mRNA表达均上升(均P<0.05),加压120 mmHg组加入外泌体后RGCs的BDNF mRNA表达上升,但无差异(P>0.05)。与对照组比较,加压40 mmHg组中Caspase-3的mRNA表达上升,但无差异(P>0.05),加压80、120 mmHg组中Caspase-3 mRNA表达均上升(均P<0.05)。加压40、80 mmHg组加入外泌体治疗后RGCs的Caspase-3 mRNA表达下降(P<0.05),加压120 mmHg组加入外泌体治疗后RGCs Caspase-3的mRNA表达下降,但无差异(P>0.05)。Western Blot检测发现,与对照组比较,加压40 mmHg组中BDNF蛋白表达下降,但无差异(P>0.05),加压80、120 mmHg组中BDNF蛋白表达下降(均P<0.001)。与模型组相比,加入外泌体治疗后BDNF蛋白表达均上升(均P<0.05)。与对照组比,加压后各模型组中Caspase-3蛋白表达均上升(均P<0.05);与模型组相比,加入外泌体治疗后各组Caspase-3蛋白表达均下降(均P<0.05)。结论:ADSCs来源的外泌体能够增加体外培养不同压力损伤的大鼠RGCs的细胞增殖活力,提高BDNF的mRNA及蛋白表达水平,降低Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平,说明ADSCs来源的外泌体对体外培养压力损伤的大鼠RGCs具有保护作用。

脂肪间充质干细胞外泌体在妇科疾病的应用及进展

随着干细胞研究的发展,脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cell,ADSC)和脂肪间充质干细胞外泌体(adipose derived mesenchymal stem cell exosome,ADSC-Exo)成为妇科领域的研究热点。ADSC是一类来源于脂肪组织的间充质干细胞,与其他间充质干细胞一样具有较高的增殖能力和多向分化潜能,ADSC-Exo还可通过释放的细胞外囊泡传递各种生物活性分子,如微小RNA、蛋白质和细胞因子,对目标细胞发挥一定的调节作用。ADSC-Exo在妇科领域的应用日益受到关注。有研究表明,ADSC-Exo可以促进子宫内膜的再生和修复,为宫腔粘连和不孕症的患者带来了希望。此外,一些研究提到ADSC-Exo在慢性子宫内膜炎、卵巢功能不全、多囊卵巢综合征和妇科恶性肿瘤等疾病的治疗中也具有一定的潜力。综述ADSC-Exo在妇科领域的应用及进展。

人脂肪间充质干细胞来源外泌体联合黄芪多糖对心肌损伤保护机制研究

目的探索人脂肪间充质干细胞来源外泌体(Exosome-HADSCs)联合黄芪多糖(APS)对心肌损伤的保护作用机制。方法体外培养人脂肪间充质干细胞(HADSCs),提取外泌体,并通过电镜、Western blot法对外泌体进行鉴定。实验设置对照组(control组)、Exo组、APS组、Exo+APS组,采用血管形成实验和划痕实验分析Exosome-HADSCs联合APS对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成和细胞迁移的影响。在AC16心肌细胞损伤模型中,实验设置对照组(control组)、氯化钴(CoCl_(2))组、CoCl_(2)+Exo组、CoCl_(2)+APS组、CoCl_(2)+Exo+APS组,比较各组细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达水平。结果与control组相比,Exo+APS组HUVECs形成血管网格的数量显著增多(P<0.05),且Exo+APS组形成血管网格的数量多于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。与control组相比,Exo+APS组细胞迁移率增高,且Exo+APS组细胞迁移率高于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Exosome-HADSCs联合APS能够显著提高CoCl_(2)损伤AC16细胞的存活率,降低细胞凋亡率,且作用效果较单独使用Exosome-HADSCs和APS更显著(P<0.05)。与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Exo+APS组凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达水平显著降低(P<0.05),抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著增高(P<0.05),磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、苏氨酸-丝氨酸蛋白激酶(Akt)蛋白表达水平均显著增高(P<0.05)。结论Exosome-HADSCs联合APS对心肌损伤具有保护作用,其机制可能与促进血管形成和内皮细胞迁移,提高细胞存活率,减少心肌细胞凋亡有关,并通过PI3K/Akt信号通路实现。

脂肪间充质干细胞外泌体保存策略研究

对超高速离心法获得的脂肪间充质干细胞外泌体进行浓度、粒径、形态和蛋白标志物验证,分别研究-80℃条件下不同保存时间节点(1周、1月)外泌体和细胞样本浓度、粒径和蛋白释放浓度的变化,4种保存策略(-80℃冻存;添加物质的量浓度为25 mM的海藻糖,-80℃冻存;添加体积分数为10%的二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide,简称DMSO),-80℃冻存;添加体积分数为30%的甘油,-80℃冻存)在不同时间节点(1周、1月)对外泌体浓度、粒径和蛋白释放浓度的影响以及快速冻融循环(3次)对外泌体浓度及粒径的影响。结果显示,脂肪间充质干细胞在上述存储条件下浓度、粒径和完整性都发生改变,实验应尽可能提取新鲜外泌体,当实验条件不完备时,可采用细胞冻存后回收外泌体的保存方式,但切忌反复冻融。

人脂肪干细胞外泌体对烟熏诱导小鼠炎症和肺部损伤的治疗作用

目的探讨人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)外泌体对烟熏诱导慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠炎症反应和肺部损伤的治疗作用和机制,每组8只。方法从hADSCs的培养上清液中分离外泌体。C57bl/6小鼠按照随机数字表法分为对照组、COPD组和外泌体组,每组8只。烟熏4周构建COPD模型,外泌体组小鼠经气道滴注30μL外泌体(蛋白浓度100 mg/L),其余2组小鼠仅滴注等体积PBS,4周后处死小鼠并收集标本。ELISA法检测血清TNF-α、IL-6和趋化因子CXCL1水平;免疫荧光测定肺组织焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3和ACS水平;Western blot测定肺组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的水平;HE和PAS染色观察肺组织病变和粘液分泌情况。结果与对照组比较,COPD组小鼠体质量增长缓慢;血清TNF-α、IL-6和CXCL1均升高;肺组织Caspase-1、NLRP3和ACS表达增多,Bcl-2表达减少,而Bax、Caspase-3和Caspase-9表达均增加(P<0.05)。与COPD组比较,外泌体组小鼠体质量增长较快;血清TNF-α、IL-6和CXCL1均降低(P<0.05);肺组织Caspase-1、NLRP3和ACS表达减少,Bcl-2表达增加,而Bax、Caspase-3和Caspase-9表达减少(P<0.05)。COPD组小鼠肺组织破坏明显,可见大量粘液分泌;外泌体治疗后小鼠肺组织损伤减轻,粘液分泌明显减少。结论hADSCs外泌体可减轻烟熏诱导的炎症水平,抑制肺组织焦亡和凋亡发生,减少气道粘液分泌,促进肺损伤修复从而治疗COPD。

脂肪干细胞外泌体应用于瘢痕治疗的研究进展

瘢痕狭义上是指病理性瘢痕,是组织损伤非再生愈合的结果,是组织损伤修复的一种重要并发症。病理性瘢痕是各种原因引起的组织损伤愈合后的病理性变化,是一种血液循环不良、结构异常、神经分布错乱的纤维化性病变,其基质为结缔组织,主要成分是胶原纤维,表层为菲薄的上皮结构,仅由几层上皮细胞组成,称为瘢痕上皮。近年来,随着脂肪干细胞外泌体(ADSC-exos)的不断研究,越来越多的实验结果证实了ADSC-exos不仅有修复伤口的功能同时也有治疗瘢痕的能力。文章就ADSC-exos应用于瘢痕治疗的研究进展进行综述。

脂肪干细胞源性外泌体对瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响

目的观察脂肪干细胞源性外泌体(ADSC-Exos)对瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控作用。方法将瘢痕成纤维细胞分为对照组、ADSC-Exos组。采用CCK-8法检测不同组别中瘢痕成纤维细胞的增殖情况;采用蛋白免疫印迹法检测纤维化指标的表达量;采用实时荧光定量-PCR检测纤维化相关基因mRNA的表达水平。结果与对照组相比,在ADSC-Exos作用下,瘢痕成纤维细胞的增殖能力减弱,纤维化相关指标水平降低(P均<0.05)。瘢痕成纤维细胞在ADSC-Exos的作用下,Ⅰ、Ⅲ胶原及α-平滑肌肌动蛋白的mRNA表达下调(P均<0.05)。结论ADSCExos能抑制瘢痕成纤维细胞的生物学活性。

脂肪间充质干细胞来源的外泌体对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及机制

目的探讨脂肪间充质干细胞来源的外泌体(ADSC-Exos)对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及机制。方法采用超速离心法获取到较高纯度的ADSC-Exos,利用Western blot、纳米粒跟踪分析和透射电镜检测ADSC-Exos特征。取36只小鼠随机分为正常对照组,模型组,低、中、高剂量外泌体组和普拉洛芬组,每组6只。除正常对照组外,其余各组小鼠双眼结膜囊内滴入2 g·L^(-1)苯扎氯铵溶液,每天2次,连续滴眼14 d,制作中重度干眼模型。造模结束后,在正常对照组和模型组小鼠结膜囊内滴入5μL磷酸盐缓冲液,低、中、高剂量外泌体组分别滴12.5 g·L^(-1)、25.0 g·L^(-1)和50.0 g·L^(-1)ADSC-Exos,普拉洛芬组滴相同体积的1 g·L^(-1)普拉洛芬滴眼液,每天3次,连续滴眼7 d。检测各组小鼠角膜荧光素染色评分、酚红棉线湿润长度和泪膜破裂时间。利用流式细胞仪检测各组小鼠结膜组织中白细胞介素(IL)-1α、γ-干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western blot和实时荧光定量PCR检测各组小鼠结膜组织中Myd88和Toll样受体4(TLR4)蛋白及mRNA的表达。结果与正常对照组相比,治疗后第4天和第7天,模型组小鼠角膜荧光素染色评分均明显增加,酚红棉线湿润长度和泪膜破裂时间明显缩短(均为P<0.01)。与模型组相比,治疗后第4天,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠角膜荧光素染色评分均明显降低(均为P<0.05),酚红棉线湿润长度均明显增加(均为P<0.01),泪膜破裂时间延长,但差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与模型组相比,治疗后第7天,中、高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠角膜荧光素染色评分均显著降低(均为P<0.05),酚红棉线湿润长度均明显增加(均为P<0.01);高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠泪膜破裂时间均明显延长(均为P<0.01)。与正常对照组相比,模型组小鼠结膜组织中IL^(-1)α、γ-IFN和TNF-α含量明显增加(均为P<0.05)。治疗后第7天,与模型组相比,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠结膜组织中IL^(-1)α、γ-IFN和TNF-α含量均明显下降(均为P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠结膜组织中Myd88和TLR4蛋白及mRNA相对表达量均显著增加(均为P<0.05)。与模型组相比,治疗后第7天,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠结膜组织中Myd88和TLR4蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(均为P<0.05)。结论ADSC-Exos对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼具有明显的治疗作用,其机制可能与ADSC-Exos抑制TLR4信号通路的激活有关。

膝痹宁Ⅱ联合脂肪干细胞外泌体调控线粒体自噬改善膝骨关节炎的机制

目的:观察膝痹宁Ⅱ及脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用对软骨退变及线粒体自噬的影响,探讨其改善膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法:将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、ADSC-Exos组(4×10^(8)个/周)、膝痹宁组(8 g·kg^(-1)·d^(-1))和ADSC-Exos(4×10^(8)个/周)+膝痹宁(8 g·kg^(-1)·d^(-1))组。采用用前交叉韧带切断术(ACLT)建立膝骨关节炎模型。评估大鼠痛敏状态、微计算机断层扫描技术(Micro-CT)及病理染色检测膝关节及软骨组织退变程度、免疫荧光观察p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)B表达情况、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-15水平、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、含血小板结合蛋白基序的解聚素金属5(ADAMTS5)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)、软骨蛋白聚糖抗体(ACAN)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、p62、LC3A/B蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值逐渐下降,软骨组织出现不同程度的磨损及缺失,软骨组织退变,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量明显升高(P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达升高,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值升高,软骨组织退变程度减轻,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量降低(P<0.05,P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达降低,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);且以Exos+膝痹宁组改变最为明显。结论:ADSCs-Exos及膝痹宁Ⅱ均可以通过促进PINK1/Parkin信号通路表达,提高软骨细胞线粒体自噬水平,延缓软骨组织退变,且二者联用可以增强疗效。

脂肪干细胞源性外泌体的应用进展

外泌体是由细胞分泌的一种纳米级囊泡,其可以将功能性蛋白质、代谢物和核酸等物质转移至受体细胞,进而发挥细胞间的通讯作用。研究表明,脂肪干细胞向胞外分泌的小囊泡——脂肪干细胞源性外泌体(ADSCs-Exos)可以运输多种细胞成分并与靶细胞融合,介导局部和系统性的细胞间通讯,从而调节受体细胞生物学行为。此外,ADSCs-Exos还在许多疾病中显示出较大的治疗潜力。本文主要综述了ADSCs-Exos在伤口愈合、肥胖、糖尿病、COVID-19、肿瘤、神经退行性疾病及心血管疾病中的应用进展。

间充质干细胞外泌体lncRNA ZEB1-AS1通过靶向miR-142-5p/PTEN调控糖尿病性肾病

目的探讨脂肪源间充质干细胞(adMSC)的外泌体长链非编码RNA锌指E盒结合同源框1反义链1(Zinc finger E-box binding homeobox 1 antisense 1,ZEB1-AS1)在糖尿病肾病(DN)中的作用机制。方法采用大鼠DN模型和高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞(GMCs)模型进行生化分析和炎症/氧化应激检测;双荧光素酶基因报告实验验证ZEB1-AS1、第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)与microRNA(miR)-142-5p的结合关系;Western blotting检测PTEN蛋白表达水平。结果adMSC分泌的外泌体ZEB1-AS1可降低DN大鼠血糖、血清肌酐、24 h尿蛋白、肾脏重量、肾组织纤维化以及炎症细胞浸润水平。同时,在DN大鼠和HG诱导的GMCs中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达下降,而谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)的表达上升。此外,miR-142-5p能与ZEB1-AS1、PTEN结合;miR-142-5p过表达或PTEN沉默逆转了外泌体ZEB1-AS1对炎症细胞因子水平的抑制作用和对抗氧化酶浓度的促进作用。结论来自adMSC的外泌体ZEB1-AS1通过miR-142-5p/PTEN通路,控制炎症和氧化应激来抑制DN的进展。这表明ZEB1-AS1可能是治疗DN潜在、有效的靶点。

脂肪干细胞外泌体在创面修复中的研究进展

脂肪干细胞外泌体(adipose-derived stem cell derived exosomes,ADSC-Exos)是一种大小为30~150 nm的脂质双分子层囊泡,参与细胞间信息交换,并在组织修复与再生,以及疾病诊断等方面发挥着重要作用。ADSC-Exos可以调节炎症反应,加速细胞增殖、分化,促进细胞迁移,调控血管生成速度,改变细胞外基质重建程度,抑制瘢痕形成等,促进创面修复过程的同时抑制异常修复。现对其在各类创面修复中的作用进行总结,并结合临床实践应用,为临床医师提供参考。

基于SIRT1介导的线粒体自噬研究膝痹宁Ⅱ联合脂肪干细胞外泌体保护软骨细胞的作用机制

目的通过SIRT1介导的线粒体自噬,探讨膝痹宁Ⅱ(XBN)和脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用保护膝骨关节炎(KOA)软骨细胞的作用机制。方法大鼠软骨细胞随机分为空白组(CON组)、模型组(KOA组)、外泌体组(EXOs组)、膝痹宁Ⅱ含药血清组(XBN组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体组(XBN+EXOs组),观察膝痹宁Ⅱ含药血清及ADSC-Exos对退变软骨细胞的影响。将大鼠软骨细胞分为空白组(CON组)、模型组(KOA组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体组(XBN+EXOs组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体+EX-527组(EX-527组),基于SIRT1介导的线粒体自噬观察膝痹宁Ⅱ含药血清联合ADSC-Exos对退变软骨细胞的影响。观察软骨细胞病理形态、线粒体自噬水平、软骨细胞退变相关蛋白及线粒体自噬相关蛋白表达水平。结果外泌体示踪显示,ADSC-Exos能与软骨细胞线粒体结合。病理染色结果显示,经LPS干预后软骨细胞发生退变,ADSC-Exos和XBN含药血清联合干预可改善软骨退变;加SIRT1抑制剂EX-527后,其对软骨细胞损伤修复作用明显下降。与CON组比较,KOA组软骨细胞线粒体自噬水平下降(P<0.05),软骨细胞MMP3、MMP13、ADAMTS5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Collagen II、TIMP1、ACAN、PINK1、Parkin、p62和LC3A/B蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与KOA组比较,各治疗组软骨细胞线粒体自噬水平升高(P<0.05),软骨细胞MMP3、MMP13、ADAMTS5蛋白表达水平降低(P<0.05),Collagen II、TIMP1、ACAN、PINK1、Parkin、p62和LC3A/B蛋白表达水平升高(P<0.05)。其中,XBN+Exos组改变最明显。SIRT1抑制剂EX-527干预后,这种调节作用明显降低(P<0.05)。结论ADSC-Exos和XBN含药血清均能通过激活SIRT1/PINK1/Parkin信号通路,增强线粒体自噬,改善线粒体功能,延缓软骨细胞退变,且二者联合具有增效作用。

基于TLR4/NF-κB通路研究桃叶珊瑚苷联合ADSCs-exos对TBHP诱导的髓核细胞保护作用

该文研究桃叶珊瑚苷(aucubin)协同脂肪间充干细胞外泌体(adipose-derived stem cells-exosomes,ADSCs-exos)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的人源髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)炎性损伤、衰老及凋亡的保护作用及机制。将TBHP诱导NPCs分为正常组、模型组、aucubin组、ADSCs-exos组及aucubin+ADSCs-exos组。细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖,细胞染色-β-半乳糖苷酶活性染色方法(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)炎症因子的表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,与模型组比较,aucubin或ADSCs-exos组NPCs活性和增殖上升,G_(0)/G_(1)期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,凋亡减少,细胞衰老比例降低,IL-1β和TNF-α水平下降,TLR4和NF-κB mRNA及蛋白表达显著减少,IL-10水平上升,aggrecan和COL2A1 mRNA及蛋白表达均升高;与aucubin或ADSCs-exos单独处理组比较,aucubin+ADSCs-exos组NPCs活性和增殖进一步上升,G_(0)/G_(1)期细胞比例进一步降低,S期细胞比例进一步增加,凋亡水平和细胞衰老比例都进一步降低,IL-1β和TNF-α水平,TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平均进一步下降,而IL-10和aggrecan、COL2A1 mRNA及蛋白水平均进一步上升。综上所述,aucubin和ADSCs-exos均能通过抑制炎症反应,减少NPCs凋亡和衰老,促进细胞活性、增殖以及细胞外基质(ECM)的合成而发挥保护作用,其作用机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,而两者联合应用,可以对保护作用起协同增效的作用。

增生性瘢痕注射治疗所用药物或生物相关制剂的研究

增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)主要以真皮层的成纤维细胞异常增殖、胶原纤维过度堆积为主要特征,是临床上常见的病理性瘢痕,局部导致的疼痛、瘙痒等不适,可严重影响患者生活。尽管治疗方法多种多样,如物理疗法、激光和手术等,但这些方法的治疗效果通常欠佳。为了寻求一种简便、治疗效果较好的方式,人们将目光投向了注射治疗,如局部注射脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)及其外泌体、富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)等。现就对近年来国内外学者对注射治疗增生性瘢痕的研究进展作一综述。