大黄素对脂肪细胞水通道蛋白-7表达的调节效应与其机制研究

目的观察大黄素对脂肪细胞水通道蛋白-7(AQP7)表达的调节效应并探讨其可能机制。方法成熟的3T3-L1前脂肪细胞分为5组,不同浓度大黄素组(1μM、10μM、50μM),空白对照组(不加药,加入同等体积二甲基亚砜),阳性对照组(吡格列酮10μM)干预24 h。分析大黄素对3T3-L1前脂肪细胞的分化影响,采用MTT法检测12h、24 h、48 h脂肪细胞活力。3T3-L1脂肪细胞诱导分化成熟后构建3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,分为5组,酶比色法测定甘油及葡萄糖摄取量。用Western Blot分析脂肪细胞中AQP7、过氧化物体增殖剂活化受体γ(PPAR-γ)表达量。结果大黄素组与阳性对照组OD值、3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型甘油及葡萄糖摄取率及脂肪细胞中AQP7与PPAR-γ表达量显著高于空白对照组(P<0.05),并且大黄素组呈现剂量依赖性,但大黄素组中浓度与阳性对照组之间无显著性差异(P>0.05)。大黄素浓度在1~50μM时,3T3-L1前脂肪细胞活力均≥0.95,且浓度为10μM时,3T3-L1前脂肪细胞活力>1。结论大黄素能够促进脂肪细胞分化,增加脂肪细胞同时对甘油及葡萄糖摄取,既能改善胰岛素抵抗又不增加体重,并且存在剂量依赖性。

脂肪因子Apelin-13对3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7基因表达的影响

目的 探讨脂肪因子Apelin-13对3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7（AQP7）基因表达的影响.方法 体外培养3T3-L1脂肪细胞,以油红O染色鉴定为成熟脂肪细胞后,分为阴性对照组（无干预）,不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6nmol/L） Apelin-13干预组（均干预24 h）,阳性对照组（10^-5 nmol/L罗格列酮干预24 h）和10^-7 nmol/L Apelin-13干预不同时间（0、12、24、36、48 h）组.用反转录-聚合酶链反应检测各组细胞AQP7 mRNA表达水平.结果 阴性对照组、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6 nmol/L Apelin-13和阳性对照组AQP7表达水平分别为（0.22±0.02）、（0.29±0.07）、（0.36±0.05）、（0.43±0.05）、（0.31±0.06）、（0.32±0.08）,阳性对照组与阴性对照组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;与阴性对照组比较,10^-8、10^-7 nmol/L Apelin-13能明显刺激AQP7 mRNA表达（P ＜0.05）;10^-8、10^-7 nmol/L Apelin-13组与阳性对照组比较,10^-7 nmol/L Apelin-13能明显刺激AQP7 mRNA表达（P＜0.05）;10^-8、10^-7 nmol/L Apelin-13组间差异无统计学意义.在时间组中,10^-7 nmol/L Apelin-13的0、12、24、36、48 h各组灰度比值分别为（0.27±0.09）、（0.43±0.07）、（0.55±0.10）、（0.42±0.08）、（0.33±0.09）,12、24、36 h组AQP7 mRNA表达较0h组能明显刺激AQP7 mRNA表达（P＜0.05）,作用24 h表达最高;但12、24、36h3组之间AQP7mRNA表达差异无统计学意义.结论 Apelin-13在一定程度上能增加3T3-L1脂肪细胞AQP7 mRNA表达的水平,并分别以10^-7 nmol/L和24 h为最佳作用浓度和时间.

水通道蛋白1对MCF-7人乳腺癌细胞增殖能力的影响

目的采用RNA干扰(RNAi)技术沉默水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)基因的表达,观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法构建针对AQP1的shRNA重组质粒,脂质体法转染MCF-7细胞,实验分为正常对照组、阴性对照组和4个AQP1-shRNA转染组。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染前后MCF-7细胞中AQP1mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测AQP1对MCF-7细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3的变化。结果四组特异性shRNA转染MCF-7细胞后48 h,AQP1基因的mRNA和蛋白水平均不同程度降低,其中以AQP1-shRNA4对AQP1的沉默效果最明显(mRNA和蛋白表达抑制率分别为70.54%和72.42%)。AQP1基因沉默48 h后,与正常对照组相比,MCF-7细胞的增殖活性明显受抑(P<0.05);细胞凋亡率显著增加为(27.77±2.82)%(P<0.05);细胞中的Caspase-3蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论 AQP1表达沉默可有效抑制MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡,提示AQP1有望成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。

水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及意义

目的研究水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins)AQP3、AQP7、AQP9基因在油酸钠诱导的脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义。方法以常规培养的人肝癌HepG2细胞为对照,采用油酸钠诱导HepG2细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪变性肝细胞模型,利用油红O染色及细胞内甘油三酯含量测定检测肝细胞脂肪变性程度,并分别于0、12、24、48 h采用实时荧光定量PCR与Western blot方法检测水甘油通道蛋白AQP3、AQP7、AQP9基因的表达。结果油红O染色观察及肝细胞内甘油三酯含量测定显示HepG2细胞在油酸钠处理12 h后即开始出现脂肪变性,随着刺激时间延长,脂肪变性程度逐渐加重,肝细胞内甘油三酯含量在48 h组(79.76±0.75)较0 h组明显升高(P<0.05)。模型组中,AQP3mRNA水平12 h时表达开始减低,48 h时(0.39±0.08)表达最低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);AQP7mRNA表达与对照组相比略有升高,差异无统计学意义(P>0.05);而AQP9 mRNA表达水平自12 h(1.59±0.11)即开始增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组中,AQP3蛋白水平12 h时表达开始减低,24、48 h组[(0.016±0.002),(0.012±0.001)]与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);AQP7蛋白表达与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05);AQP9蛋白水平12 h表达开始增高,24、48 h[(0.050±0.002)、(0.079±0.002)]组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肝细胞脂肪变性模型中水甘油通道蛋白AQP3表达下调、AQP9表达上调、AQP7表达无明显差异,提示不同亚型的水甘油通道蛋白可能通过不同的机制参与了肝细胞非酒精性脂肪变性。

右美托咪定对脓毒症大鼠心肌组织水通道蛋白-1及炎症细胞因子水平的干预作用

目的：研究脓毒症大鼠心肌组织水通道蛋白-1（AQP-1）水平的变化规律，并比较AQP-1与心肌细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及心肌组织含水量的相关性，探讨右美托咪定对脓毒症大鼠心肌的保护作用及可能机制。方法将90只雄性SD 大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症模型组和右美托咪定组，每组30只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒症模型；假手术组仅开腹、关腹，不行CLP。右美托咪定组于术前0.5 h静脉注射右美托咪定1μg/kg，浓度为2μg/mL，模型组和假手术组大鼠术后皮下注射生理盐水5 mL/kg。于术后2、12、24、48、72 h处死6只大鼠取出心脏，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各时间点心肌组织匀浆中AQP-1含量及炎症细胞因子TNF-α、IL-6水平，利用干湿重法检测心肌组织含水量，并比较AQP-1与TNF-α、IL-6及心肌组织含水量的相关性。结果模型组术后2 h起心肌组织AQP-1、TNF-α及IL-6水平均较假手术组明显升高；随时间延长，AQP-1水平及心肌组织含水量有所降低，但TNF-α及IL-6水平却持续增高。右美托咪定组除术后72 h心肌组织含水量外，从术后2 h起上述各指标即均较模型组明显降低〔AQP-1（ng/g）：9.29±0.15比9.73±0.26，TNF-α（pg/g）：109.47±8.41比128.13±7.36，IL-6（pg/g）：232.95±20.56比279.71±22.24，心肌组织含水量：（74.82±6.37）%比（75.62±6.39）%，均P＜0.05〕，但仍高于假手术组。相关性分析显示，脓毒症大鼠AQP-1与早期心肌组织含水量（r＝0.418，P＝0.001）和晚期心肌组织含水量（r＝0.235，P＝0.022）的变化呈正相关，与早期（术后2 h）细胞因子TNF-α（r＝0.235，P＝0.021）及IL-6（r＝0.345，P＝0.003）浓度变化呈正相关，与晚期（术后72 h）细胞因子TNF-α（r＝-0.408，P＝0.037）及IL-6（r＝-0.276，P＝0.002）浓度变化呈负相关。结论脓毒症大鼠早期即出现明显心肌损伤，导致AQP-1的过度表达，从而引起心肌细胞水肿；右美托咪定可通过减少心肌组织AQP-1的表达及心肌炎症细胞因子水平进而减轻心肌细胞水肿，而发挥心肌保护作用。

地塞米松对人眼小梁细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的 :观察地塞米松对人眼小梁细胞水通道蛋白 -1(AQP -1)表达的影响。方法 :通过RT -PCR方法 ,半定量检测原代培养的人眼小梁细胞AQP -1的mRNA水平及不同浓度地塞米松的作用。结果 :正常人眼小梁细胞AQP -1的mRNA(灰度比 )为1 643±0 354,10-8mol、5×10-8mol、10-7mol、5×10-7mol地塞米松作用3d为1 577±0 405、1 117±0 443、0 458±0 301、0 267±0 243。地塞米松浓度≥5×10 -8mol出现抑制作用 (P<0 05)。结论 :地塞米松使培养的正常人眼小梁细胞AQP -1的mRNA减少 ,可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

水通道蛋白-4 mRNA沉默可抑制离体缺氧星形胶质细胞水通道蛋白-4的表达

目的：研究水通道蛋白-4（AQP4） mRNA沉默对体外缺氧星形胶质细胞AQP4表达的影响.方法： 用氯化钴诱导体外星形胶质细胞缺氧,建立AQP4 mRNA沉默缺氧星形胶质细胞模型.随机分为正常组、对照组、缺氧组和干扰组,观察星形胶质细胞形态,免疫细胞化学、荧光定量PCR、免疫印迹法检测AQP4 mRNA 及蛋白表达.结果： 星形胶质细胞的AQP4 mRNA 和蛋白表达一致.正常组有少数弱阳性表达细胞.对照组与缺氧组成相同的改变：从15min始AQP4 表达增强,以1～2h显著,4h后缓慢增强.干扰组与对照组对比,在15min～4h时间段AQP4表达明显受抑制,尤其在1、2h最突出,与对照组对应时相点相比差异有统计学意义,4h后AQP4表达缓慢回升,12h差异无统计学意义.对照组的星形胶质细胞水肿逐渐加重,以1、2h变化最明显.干扰组在30min～4h细胞水肿明显减轻,尤以1、2h变化明显,4h后细胞水肿继续加剧.结论： 星形胶质细胞水肿与AQP4表达高度一致,AQP4 mRNA沉默可以明显抑制早期缺氧（小于4h）星形胶质细胞的AQP4表达,并减轻细胞水肿.推测AQP4是产生细胞水肿的＂最后共同通道＂.

水通道蛋白-1在高糖培养人晶状体上皮细胞中的表达

目的研究水通道蛋白-1(AQP-1)在糖尿病性白内障发病机制中的作用。方法从健康的供体眼中分离出人晶状体囊膜,用组织块培养法将人晶状体囊膜分别置于1g/L葡萄糖+体积分数15%胎牛血清的DMEM培养液中(对照组)或4.5g/L葡萄糖+15%胎牛血清的DMEM培养液中进行培养(高糖组)。培养3d、28d后观察2组人晶状体上皮细胞(LECs)的生长状态。采用免疫荧光技术和流式细胞术检测AQP-1在人LECs中表达的平均荧光强度,应用流式细胞术检测2组人LECs的凋亡和坏死情况,并进行比较。结果培养第3天2组LECs的生长形态近似,但培养28d高糖组坏死细胞增加。培养3d后高糖组人LECs的AQP-1免疫荧光表达较对照组明显增强,2组间平均荧光强度的差异有统计学意义(t=3.934,P=0.004),但2组间LECs的凋亡率和坏死率差异均无统计学意义(t=1.681,P=0.131;t=1.064,P=0.318)。培养28d后高糖组人LECs的AQP-1免疫荧光表达较对照组弱,差异有统计学意义(t=3.069,P=0.015),LECs凋亡率、坏死率较对照组升高,差异均有统计学意义(t=11.213,P<0.01;t=15.778,P<0.01)。结论 AQP-1的异常表达在糖尿病性白内障的发生发展中起重要作用。

鞘内移植骨髓基质细胞对兔脊髓缺血/再灌注损伤早期水通道蛋白-4表达的影响

目的探讨鞘内移植骨髓基质细胞(BMSCs)对兔脊髓缺血/再灌注损伤早期水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响。方法日本大耳白兔72只,随机分为3组:假手术组(S组)、脊髓缺血/再灌注损伤组(I/R组)和BMSCs移植组(M组)。I/R组和M组阻断肾动脉下腹主动脉30 min建立脊髓缺血/再灌注损伤模型,S组暴露肾动脉下腹主动脉,但不阻断。损伤前2天蛛网膜下腔置管,M组注入1×108BM-SCs,I/R组注入等容量PBS。分别于再灌注损伤后4 h和24h进行神经功能评分,干湿重法测定脊髓组织含水量,测定血管外伊文思蓝含量示踪血脊髓屏障通透性变化,免疫组化和免疫印迹法检测脊髓组织中AQP-4表达情况。结果与S组比较,I/R组神经运动功能评分降低,脊髓组织含水量和伊文思蓝含量增加,AQP-4表达增加(P<0.05)。与I/R组比较,M组神经运动功能评分增高,脊髓组织含水量和伊文思蓝含量降低,血脊髓屏障AQP-4表达减少(P<0.05)。结论 BMSCs移植可抑制脊髓损伤早期AQP-4的表达,进而减轻脊髓水肿和脊髓缺血/再灌注损伤。

静脉注射骨髓间充质干细胞可抑制大鼠损伤脊髓水通道蛋白-4的表达

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠损伤脊髓AQP-4表达的调节作用。方法:体外分离、培养、纯化MSCs,应用流式细胞术检测MSCs表面细胞标志CD34、CD45、CD29、CD90。根据改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为假手术组、对照组和实验组,假手术组和实验组经尾静脉注射MSCs,对照组经尾静脉注射PBS。损伤注射MSCs后1、3、7 d,应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织水通道蛋白-4(AQP-4)的表达。结果:对照组大鼠脊髓的AQP-4表达于损伤后1 d开始增加,损伤后3 d达到峰值,损伤后7 d开始减少。实验组大鼠脊髓的AQP-4表达比对照组明显减少。结论:MSCs移植可抑制脊髓损伤后AQP-4的表达。

地塞米松对体外培养的晶状体上皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的观察体外培养的人眼晶状体上皮细胞(LECs)水通道蛋白-1(AQP-1)的表达;研究地塞米松对其表达水平的影响。方法运用免疫组织化学法测定人眼LECs AQP-1的表达;用含0、1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L地塞米松的DMEM培养液培养人眼LECs7d,采用RT-PCR检测地塞米松对LECs AQP-1表达的影响。结果免疫组织化学检测示体外培养的正常人眼LECs胞膜和胞浆中可见AQP-1的表达;RT-PCR示正常人眼LECs AQP-1/β-actin吸光度比值为1·43±0·12;4种浓度地塞米松处理7d后其比值分别为1·32±0·09、1·27±0·08、1·01±0·09、0·67±0·10,当地塞米松浓度≥5×10-8mol/L时有抑制作用(P<0·05),且抑制作用随地塞米松浓度的增加逐渐增强。结论体外培养的人眼LECs中可见AQP-1的表达,AQP-1可能参与维持晶状体的脱水状态及其透明性;地塞米松抑制体外培养的人眼LECs AQP-1的表达,AQP-1可能在皮质类固醇性白内障的发生发展中起重要作用。

自发2型糖尿病模型OLETF大鼠不同病程脂肪组织水通道蛋白7mRNA的表达

目的观察自发性2型糖尿病动物模型OLETF大鼠不同病程阶段皮下及肾周脂肪水通道蛋白7(AQP7)mRNA的表达。方法以OLETF大鼠为研究对象,同种系非糖尿病LETO大鼠为正常对照。分别在8、14、22周龄行口服葡萄糖耐量试验,试验后取皮下及肾周脂肪组织,采用实时PCR方法测定其AQP7 mRNA的表达。结果 LETO组皮下及肾周脂肪组织均随肥胖增加表达上调,OLETF组皮下及肾周脂肪组织则呈先上调后下调趋势,且与血清甘油变化趋势一致。结论 AQP7可能在腹型肥胖的发生中发挥重要作用。

低渗液对星形胶质细胞水通道蛋白-9表达的影响

目的探讨体外培养星形胶质细胞在低渗状态下水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)表达的变化特点及其所起的作用。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和低渗组(又分268、254、240mmol/L三个组),每组分为3、6、12、24h共4个时间点,每个时间点细胞孔数为6。对照组予正常培养液常规培养,低渗组分别予不同渗透压的低渗液作用于细胞,建立星形胶质细胞对低渗液反应的实验模型。通过采用原位杂交检测AQP9mRNA的表达,乳酸脱氢酶活性的测定及图像分析等方法研究星形胶质细胞对低渗液的反应及AQP9的表达变化。结果对照组在正常渗透压培养液中培养3、6、12、24h后,AQP9表达差异无统计学意义(P>0.05)。在相同的作用时间条件下,各低渗组细胞AQP9mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。尤以作用12h后明显,而且与作用时间和低渗液的程度密切相关;同时细胞存活能力明显下降,其严重程度与低渗液的作用时间和渗透压有关。结论低渗液可导致细胞的生存能力下降、AQP9mRNA表达增强,提示星形胶质细胞AQP9的表达与渗透压可能直接相关,AQP9可能参与脑水肿的形成。

川芎嗪对人间皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的:研究川芎嗪注射液不同干预方法对人间皮细胞水通道蛋白-1表达的影响。方法:采用两种干预方式对人间皮细胞进行培养:含药血清培养组和直接加药培养组,分别加入不同浓度的葡萄糖乳酸盐腹透液及高低剂量的含药血清,进行细胞培养。采用R-T PCR法和Western blot法检测人间皮细胞水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP-1)的表达。结果:(1)与正常对照组相比较,经腹膜透析液刺激后,人间皮细胞AQP-1表达水平明显增加(P<0.05),且葡萄糖浓度越高AQP-1表达量越显著(P<0.05)。(2)运用PCR检测表明,予川芎嗪含药血清干预24 h后,高糖PDS+低浓度含药血清组和高糖PDS+高浓度含药血清组与高糖PDS组比较,AQP-1表达量均呈显著性下降(P<0.05)。含药血清和直接加药两种不同药物干预方式间比较,高糖PDS+高浓度药物两组中,直接给药组较含药血清组AQP-1表达量下降更显著(P<0.05)。(3)Western blot检测人间皮细胞AQP-1蛋白结果显示,在给予川芎嗪含药血清或直接加入2μg/ml和10μg/ml川芎嗪注射液培养24 h后,各药物干预组人间皮细胞AQP-1表达量均较1.5%和4.25%葡萄糖乳酸盐腹膜透析液组有所下降。而在含药血清和直接加药两种不同药物干预方式间比较发现,低糖PDS+低浓度药物两组中,直接加药组较含药血清组AQP-1表达量下降更显著(P<0.05)。结论:含糖腹透液可刺激人间皮细胞内AQP-1的表达增加,川芎嗪具有拮抗含糖乳酸盐透析液刺激人间皮细胞AQP-1高表达的作用,且高剂量川芎嗪的作用优于低剂量。

星形胶质细胞水通道蛋白-4在高渗液中的表达变化

目的 研究高渗培养液对体外培养星形胶质细胞表达水通道蛋白- 4 (Aquaporin - 4 ,AQP4 )的影响及AQP4在高渗性脱水中的作用。方法 取生后2d的Wistar大鼠的大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,分别予不同程度的高渗培养液作用于星形胶质细胞,建立星形胶质细胞对高渗液反应的实验模型。通过形态学观察、PT -PCR、免疫细胞化学、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及图像分析等方法,研究体外星形胶质细胞对高渗液的反应及AQP4mRNA和蛋白的表达变化。结果 高渗组各时相点吸光度A值均低于对照组(P <0 . 0 5 ) ,星形胶质细胞表现出特征性的细胞脱水形态学变化,AQP4mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P <0 . 0 1) ,尤以作用12h后最明显,而且AQP4mRNA和蛋白的表达呈显著正相关(rs >0 84 85 ,Ps <0 . 0 1)。结论 在高渗状态下,AQP4mRNA和蛋白的表达增强,AQP4表达上调在高渗性脱水的早期(<12h)可能起到重要的代偿作用。

高表达水通道蛋白7的脂肪细胞的脂代谢的研究

目的研究高表达AQP7的3T3-L1脂肪细胞的脂代谢变化。方法构建高表达的AQP7的3T3-L1脂肪细胞,测定AQP7mRNA和AQP7蛋白表达的变化,以及脂代谢指标甘油和脂肪酸的变化。结果与对照组比较AQP7mRNA和AQP7蛋白表达明显增加差异有统计学意义(P<0.01),培养基中甘油的水平也升高差异有统计学意义(P<0.05),脂肪酸的水平无变化差异有统计学意义(P>0.05)。结论高表达的AQP7蛋白,可显著减少脂肪细胞内甘油,减少脂肪细胞体积,减轻胰岛素抵抗。

急性高眼压大鼠视网膜胶质细胞水通道蛋白-4的内化

目的：观察急性高眼压时大鼠视网膜胶质细胞水通道蛋白-4（AQP4）内化的时空变化及其规律,并探讨其与视网膜水肿的关系.方法：建模并分组；应用免疫荧光双标鉴定视网膜AQP4阳性细胞；观察AQP4与早期内涵体抗原1（EEA1）及晚期内涵体标记物甘露糖-6-磷酸受体（MPR）的共表达规律.结果：在正常视网膜内,表达AQP4的星形胶质细胞胞体位于节细胞层,Müller细胞的胞体位于内核层.正常及假手术组未见AQP4与EEA-1、MPR的共表达；高眼压作用不同时间,AQP4与EEA1共表达细胞的分布部位及其占AQP4阳性细胞比例都有改变,在高眼压作用60 min,AQP4与EEA1共表达细胞的比例达到最高值,AQP4与MPR共表达细胞分布的部位也有变化.结论：高眼压可诱导视网膜胶质细胞AQP4的内化,即AQP4经过内吞进入早期内涵体,再转运至晚期内涵体.AQP4的内化可能对肿胀的胶质细胞起保护作用.

白细胞介素-1β对水通道蛋白4表达的影响及其在癫痫发作中的作用

目的:观察白细胞介素-1β(IL-1β)和戊四氮致急性癫痫大鼠大脑海马水通道蛋白4(AQP4)表达变化,探讨IL-1β调节AQP4表达参与癫痫发病的作用机制。方法:将大鼠随机分为5组,对照组、IL-1β组、戊四氮组、IL-1ra(IL-1受体拮抗剂)+戊四氮组、地塞米松+戊四氮组。记录60 min内各组大鼠痫性发作级别。免疫组织化学、RT-q PCR检测6、12、24、36 h海马AQP4的表达。结果:IL-1β组和戊四氮组重度癫痫发作;地塞米松+戊四氮组和对照组无明显发作;IL-1ra+戊四氮组较戊四氮组发作减轻(P<0.05)。免疫组化和荧光定量PCR显示:戊四氮组与对照组相比12 h后AQP4表达明显升高(P<0.05),发作后24 h达到高峰(P<0.001),IL-1ra+戊四氮组12～36 h的AQP4表达都低于戊四氮组同时间点(P<0.05),地塞米松+戊四氮组与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:促炎因子IL-1β可能通过上调海马AQP4表达,影响脑内局部水平衡,增加细胞外兴奋性氨基酸或离子的浓度,促进神经元放电。

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白-1表达变化

目的研究大鼠糖尿病性白内障(diabetic cataract,DC)晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)表达水平的变化。方法链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60 mg/kg体重一次性尾静脉注射制作大鼠糖尿病模型,分别在造模后不同时间点摘取模型组及对照组大鼠的眼球,制作石蜡切片,应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对晶状体囊膜下上皮细胞AQP1进行检测。结果透明晶状体和DC各期晶状体囊膜下上皮细胞膜均有AQP1阳性表达。图像分析显示:在造模2周糖尿病大鼠晶状体尚透明,LECs的AQP1平均吸光度(A)值即下降,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);DC各期LECs的AQP1表达均显著低于对照组(均P<0.01),随着白内障的发展,A值逐渐下降。除DCⅡ期与Ⅲ期之间A值差异无显著性意义外,其余DC各期之间差异均有极显著性意义(均P<0.01)。结论LECs胞膜AQP1表达量减少先于DC的发生,DC早期AQP1的表达量显著下降,AQP1表达改变可能在DC发生发展中起一定作用。