circ_0005379通过调控miR-17-5p/酰基辅酶A氧化酶1轴抑制口腔鳞状细胞癌的发展进程

目的探讨circ_0005379对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法分别以癌旁正常组织及正常口腔黏膜细胞HOK-16A为对照,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OSCC组织和SCC15细胞中circ_0005379和miR-17-5p表达水平,蛋白印迹(Westernblot)检测酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)蛋白表达水平。转染circ_0005379过表达载体至SCC15细胞,四甲基噻唑蓝(MTT)染色法、流式细胞术、Transwell和Westernblot分别检测过表达circ_0005379对SCC15细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、β连环素(β-catenin)和Snail蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验检验SCC15细胞中circ_0005379与miR-17-5p及miR-17-5p与ACOX1调控关系。建立稳定过表达circ_0005379的SCC15细胞裸鼠移植瘤模型,观察过表达circ_0005379对裸鼠移植瘤生长的影响。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。与HOK-16A细胞比较,SCC15细胞中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。过表达circ_0005379后,SCC15细胞活性、迁移和侵袭细胞数及β-catenin和Snail蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。circ_0005379靶向负调控miR-17-5p表达,ACOX1是miR-17-5p的靶基因。过表达miR-17-5p可逆转过表达circ_0005379对OSCC细胞系增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。过表达circ_0005379的裸鼠肿瘤体积和重量降低(P<0.05),肿瘤组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达水平升高(P<0.05),miR-17-5p表达水平降低(P<0.05)。结论circ_0005379可能通过靶向miR-17-5p/ACOX1来抑制体外OSCC细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,同时抑制体内肿瘤生长,其可能是OSCC治疗的潜在靶点。

脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质

目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱。结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积。

脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。

巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合

目的探讨脂肪分化相关蛋白是否与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶相互结合。方法 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6 h,使用逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹分析技术检测脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA及蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶是否相互结合。结果随着氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞孵育时间的延长,逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析显示,脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0 h相比,差异有显著性(P<0.05,n=3)。免疫共沉淀实验显示,RAW264.7细胞与氧化型低密度脂蛋白孵育0、0.5、1、3 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1结合,6 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1不结合;孵育0、0.5、1 h时脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶不结合,3、6 h时与中性胆固醇酯水解酶结合。结论在荷脂的RAW264.7细胞中脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1相互结合。脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶在细胞内脂质代谢中可能协同作用。

脂肪分化相关蛋白促进RAW264.7细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1高表达

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的变化,阐明脂肪分化相关蛋白促进细胞内脂质蓄积的机制。方法构建的pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒。用病毒感染RAW264.7细胞,Puromycin筛选后获得稳定高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞株。应用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测经感染后细胞内脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。并应用阿托伐他汀处理高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞,观察酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的改变。结果用pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒感染RAW264.7细胞后,脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1 mRNA和蛋白表达明显升高,而对照组表达无明显变化。加入阿托伐他汀后,即在去除底物对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达影响的情况下,高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达仍升高。结论高表达脂肪分化相关蛋白可明显上调RAW264.7细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。

富硒灵芝对非酒精性脂肪性肝病大鼠酰基辅酶A氧化酶水平的影响

目的观察富硒灵芝对高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏病理学、胆碱酯酶(CHE)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、总蛋白以及酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)表达的影响。方法 60只SD大鼠分为空白对照组、模型对照及富硒灵芝3组,NAFLD动物模型建立后,富硒灵芝组给予富硒灵芝水灌胃治疗,模型对照组给予生理盐水灌胃,空白对照组不加以干涉,分别在治疗6、12周后处死大鼠各半,观察其肝脏病理及相关指标变化。结果肝脏病理学检查:模型对照组6周和12周大鼠均存在明显的肝脏脂肪沉积;富硒灵芝组6周肝脏沉积明显减少,12周几乎恢复到正常的水平。CHE、TBIL、直接胆红素、间接胆红素富硒灵芝组较模型对照组在6周时即发生了显著的变化,12周时变化呈现出稳定状态(P<0.05);富硒灵芝组也可明显降低大鼠血清中TBA、总蛋白;富硒灵芝治疗后,大鼠ACOX1的mRNA和蛋白表达在第6周只呈现出微小的变化,12周时差异有统计学意义(P<0.05)。结论富硒灵芝可明显改善高脂饮食诱导的大鼠肝脏脂肪含量,调节CHE、TBIL及TBA等,同时增加ACOX1的表达,可能对NAFLD具有一定的防治作用。

结直肠癌组织中ACOX1、DUSP14蛋白表达变化及临床意义

目的探讨结直肠癌组织中酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、双特异性磷酸酶14(DUSP14)蛋白表达变化及临床意义。方法选择手术治疗的98例CRC患者,术中取癌和癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)。用免疫组化染色法检测组织中ACOX1、DUSP14蛋白,用Spearman秩相关分析CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达的相关性,以及二者表达与临床病理参数的关系;对患者进行随访,记录其生存状况,Cox回归模型分析CRC预后的影响因素。结果CRC癌组织、癌旁组织中ACOX1蛋白阳性表达率分别为24.49%(24/98)、84.69%(83/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRC癌组织、癌旁组织中DUSP14蛋白阳性表达率分别为79.59%(78/98)、12.24%(12/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达呈负相关(rs=-0.792,P<0.05)。与TNM分期Ⅰ、Ⅱ期,高中分化及无淋巴结转移的CRC组织比较,TNM分期Ⅲ期、低分化程度及淋巴结转移的CRC组织中ACOX1蛋白阳性表达率低,DUSP14蛋白阳性表达率高(P均<0.05)。CRC患者随访期间死亡42例,3年总生存率为57.14%(56/98)。ACOX1蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为87.50%(21/24)、47.30%(35/74),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);DUSP14蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为48.72%(38/78)、90.00%(18/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。ACOX1蛋白表达阴性、DUSP14蛋白表达阳性、TNM分期Ⅲ期及淋巴结转移为CRC患者预后的危险因素(P均<0.05)。结论CRC中ACOX1低表达、DUSP14高表达,二者表达变化与肿瘤发展及预后有关。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝病大鼠脂肪酸β-氧化的改善作用研究

目的研究人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠β-氧化的作用。方法将120只SD大鼠分为对照组(CON组)、模型组(HFD组)及人参皂苷Rg1低、中、高剂量组(GLD、GMD、GHD组)和熊去氧胆酸钠治疗组(PDT组),每组20只,分别于治疗4、8周后处死大鼠各半,肝脏切片HE染色,检测肝功能、血脂、肝脏脂酰CoA合成酶1(CoASH1)、脂酰肉毒碱转移酶I(CATI)及酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA和蛋白表达。结果治疗4周后,肝脏HE染色GHD组有改善,PDT、GLD、GHD组未见改善;8周后,PDT组与GLD组仍有少量脂肪颗粒聚集,GMD组和GHD组看不到任何脂滴浸润;治疗4周后,PDT、GLD、GMD、GHD组与HFD组相比,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显降低(P<0.05),8周后进一步降低;治疗4周后,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)4个组均升高,8周后几乎恢复到对照组的水平;治疗4周后肝脏组织CoASH1、CACTI及ACOX1表达4个组均显著升高(P<0.05),治疗8周后改善更为明显。结论人参皂苷Rg1可通过调节大鼠β-氧化来改善脂代谢及肝功能。

艾塞那肽通过调控PPARα及ACOX1改善大鼠非酒精性脂肪肝病症状

目的研究艾塞那肽对高脂诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用。方法120只SD大鼠随机分为对照组(CON)、模型组(1FD)、艾塞那肽低、中、高剂量干预组(ELD、EMD、EHD)和阳性药物多烯磷脂酰胆碱治疗组(PDC),每组20只,成功复制NAFLD模型后,给予相应治疗,治疗4周和8周后分别处死大鼠各半,肝脏切片HE染色、相应试剂盒检测肝功能、血脂指标,RT-PCR及Western blot测定PPARα及ACOX1的mRNA和蛋白表达。结果治疗8周后,肝脏HE染色除ELD外,PDC、EMD及EHD看不到任何脂肪颗粒浸润;治疗4周后,PDC、ELD、EMD以及EHD组与HFD组相比,肝功能指标AST、ALT与CHE,血脂指标CHOL与TG,明显降低(P<0.05),8周后进一步降低;治疗后肝脏组织过氧化物酶增殖激活受体α(PPARα)和酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)表达有显著改善。结论艾塞那肽可通过调控PPARα及ACOX1表达改善NAFLD大鼠症状。

人参皂苷Rg1通过调节脂肪代谢改善非酒精性脂肪肝病大鼠的肝功能

目的:研究人参皂苷Rg1对高脂饮食(HFD)诱导的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏β-氧化的作用。方法:60只SD大鼠随机分为对照组(CON)、HFD组、人参皂苷Rg1低、中、高剂量干预组(LDG、MDG及HDG)及阳性药物熊去氧胆酸钠治疗组(PDT)。HFD 8周后成功复制NAFLD模型,之后用相应药物治疗,治疗4周和8周后分别处死大鼠各半,收集肝脏做切片HE染色,同时检测其肝功能和血脂指标,RT-PCR及Western blotting测定肝脏脂酰Co A合成酶1(Co ASH1)、肉毒碱脂酰转移酶I(CATI)及脂酰Co A氧化酶1(ACOX1)mRNA和蛋白的表达。结果:治疗4周后,肝脏HE染色除HDG组有改善外,PDT组、LDG组及MDG组的脂肪肝浸润现象没有改善;治疗8周后,PDT组与LDG组仍有少量脂肪颗粒聚集,而MDG组和HDG组则看不到脂滴浸润现象;治疗4周后,PDT组、LDG组、MDG组及HDG组与HFD组相比,肝功能指标AST、ALT、AKP以及血脂指标TC、TG、LDLC明显降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低;治疗4周后,4个治疗组HDL-C均明显升高,8周后几乎恢复到CON组的水平;治疗4周后4个治疗组肝脏组织的Co ASH1、CACTI及ACOX1表达均有显著升高(P<0.05),治疗8周后改善更为明显,同时MDG组与HDG组表达要高于PDT组(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可通过调节大鼠β-氧化相关的酶改善脂肪代谢对NAFLD大鼠的肝损伤,从而发挥治疗作用。

决明子蒽醌苷对非酒精性脂肪肝病大鼠脂酸β氧化相关酶蛋白表达的影响

目的:探讨决明子蒽醌苷对非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠脂酸β氧化途径关键酶过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(peroxidase acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)和肉毒碱棕榈酰转移酶I(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)表达的影响。方法:将60只SD大鼠适应性喂养10天后,随机分为正常组、模型组、阳性药物(多烯磷脂酰胆碱)组及决明子蒽醌苷低、中、高剂量组,每组10只,高脂高糖饮食8周成功构建NAFLD模型,给予相应治疗8周后处死大鼠,收集大鼠血清和肝脏,检测大鼠血脂、肝功能、肝脏病理学以及肝脏组织中ACOX1和CPT1A的mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠肝功能指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、血脂指标甘油三酯(triglyceride,TG)和胆固醇(total cholesterol,TC)均升高(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组肝功能及血脂指标均降低(P<0.05),高剂量组低于阳性药物组(P<0.05)。HE染色正常组大鼠肝脏细胞大小均一,分布均匀,模型组出现明显的脂肪空泡和炎症反应,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均可以减少肝脏脂肪浸润。与正常组比较,ACOX1和CPT1A、模型组及决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均降低(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组ACOX1和CPT1A均升高(P<0.05),高剂量组高于阳性药物组(P<0.05)。结论:决明子蒽醌苷可以通过增加脂酸β氧化途径关键酶ACOX1和CPT1A mRNA以及蛋白表达水平,促进肝脏脂肪颗粒排出,最终改善肝功能。

L-谷氨酰胺调节脂质代谢与大鼠非酒精性脂肪肝病的相关性

目的观察L-谷氨酰胺(L-Gln)对高脂诱导的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠血脂、肝功能的影响和对基辅酶A氧化酶(ACOX)1、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)1 mRNA和蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组(CON组)、NAFLD模型组(NAF组)及L-Gln治疗组(L-Gln),给予NAF组以及L-Gln组大鼠高脂饮食建立NAFLD模型,造模成功后,L-Gln组给予L-Gln灌胃治疗,NAF组给予其生理盐水灌胃辅助参考,CON组不加以干涉,治疗6 w和12 w后处死大鼠,观察其ACOX1、SCD1及血脂、肝功能指标变化。结果 L-Gln组治疗12 w谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(UBIL)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较NAF组有明显降低(P<0.05);总胆汁酸(TBA)较NAF组有显著降低(P<0.01);总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较NAF组有明显升高(P<0.05);NAFLD大鼠ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达经L-Gln治疗12 w明显升高(P<0.05)。结论 L-Gln可以明显提高高脂饮食诱导NAFLD大鼠肝脏ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达,通过上述酶的表达,调节血脂代谢,进而降低了大鼠肝脏脂肪含量,改善肝功能,可能对NAFLD具有一定的防治作用。

Vaspin对巨噬细胞THP-1向泡沫细胞转变的抑制作用

目的腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,vaspin)是新发现的脂肪因子,对代谢性疾病具有改善作用。该研究旨在研究vaspin对体外培养的THP-1细胞泡沫化的影响。方法 100 n M佛波酯孵育THP-1巨噬细胞48 h后分为对照组,氧化低密度脂蛋白组(ox-LDL浓度50μg/ml,48 h),vaspin干预组(vaspin终浓度100 ng/ml,预孵24 h);采用油红0染色法检测vaspin对THP-1细胞泡沫化的影响;Real-time PCR和Western blot法检测vaspin对THP-1细胞中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(acy1-coenzyme A:cholesterol acyltrasferase-1,ACAT-1)、ATP结合盒转运体A1(ATP binding casstte transporter A1,ABCA1)及细胞清道夫受体-A1(scavenger receptor-A1,SR-A1)mRNA及蛋白表达水平的影响。结果与oxLDL组比较,ox-LDL+vaspin组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P<0.05);ox-LDL+vaspin组ACAT-1和SRA1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 vaspin能够抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,发挥抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的作用。

PPARα信号通路激活抵抗高脂和Leptin缺失诱导的肥胖和脂肪肝

脂肪酰基辅酶A氧化酶1(acyl-coenzyme A oxidase 1,Acox1)缺失可通过内源性配体激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)及其调控的信号通路,从而减轻肥胖基因leptin突变型(ob/ob)小鼠的肥胖和脂肪肝症状,但提高了其肝癌发生率.为进一步研究PPARα信号通路在高脂日粮和leptin缺失诱导的脂肪肝形成过程中的作用,本研究以野生型、Acox1-/-、ob/ob和Acox1Δob/ob小鼠为模型,用正常日粮或60%高脂日粮饲喂10个月.结果显示,正常日粮或高脂日粮饲喂情况下,Acox1-/-和Acox1Δob/ob小鼠的体重、白色脂肪细胞体积、棕色脂肪组织含量及肝脏脂肪含量均分别显著低于WT和ob/ob小鼠.溴化脱氧尿嘧啶核苷(Brdurd)及烯酰辅酶A水合酶(L-PBE)免疫组化染色结果显示Acox1-/-和Acox1Δob/ob小鼠肝脏内肝细胞增殖及L-PBE活性、肝脏重量及其占体重的百分比均显著高于WT和ob/ob小鼠.正常日粮饲喂的WT、Acox1-/-、ob/ob和Acox1Δob/ob小鼠肝癌发生率分别为0%、100%、0%和4%,高脂日粮饲喂后,其肝癌发生率分别为0%、100%、2.9%和100%.Q-PCR结果显示Acox1-/-和Acox1Δob/ob小鼠肝脏内L-PBE、Cyp4a3、Akr1b10、ap2等基因的表达水平显著高于WT和ob/ob小鼠.综上所述,PPARα信号通路激活可以抵抗高脂日粮和leptin缺失诱导的肥胖和脂肪肝,但脂质过氧化反应可能通过Nrf2-Akr1b10信号通路促进了肝癌发生.

富硒灵芝粗提物对2型糖尿病模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用研究

目的:研究富硒灵芝粗提物对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用。方法:将120只大鼠随机分为正常对照组(n=20,生理盐水)和造模组(n=100)。正常对照组大鼠喂养普通饲料,造模组大鼠喂养高脂饲料。4周后,造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液(30 mg/kg)复制T2DM模型。将造模成功的90只大鼠再次随机分为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(二甲双胍,200 mg/kg)和富硒灵芝粗提物低、中、高剂量组(300、600、1 200 mg/kg,以提取物计),每组18只。灌胃给药,每天1次,每周周一至周六给药。分别于给药4、8周后各组均取一半大鼠,检测其血清中葡萄糖、胰岛素水平,并计算胰岛抵抗指数;采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)]、血脂指标[游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平;苏木精-伊红染色后,通过显微镜观察其肝组织病理学变化;并分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blot法检测其肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药4、8周后血清中葡萄糖、胰岛素含量显著增加(P<0.01),胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.01);血清中肝功能指标、血脂指标和炎症因子水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);肝细胞肿胀呈圆形,且体积较正常对照组明显增大,肝脏有不同程度的脂肪变性及空泡样变,并伴随有少量炎细胞浸润现象;肝组织中PPARα、ACOX1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,除富硒灵芝粗提物低剂量组大鼠给药4周后的胰岛素抵抗指数和血清中AST、ALT、IL-6、IL-1β水平以及给药8周后血清中葡萄糖、胰岛素、ALT水平和给药4、8周后4个血脂指标水平降低不显著外(P>0.05),其余各组大鼠在给药4、8周后上述血清指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);给药4、8周后大鼠肝组织病理学变化不同程度减轻;各给药组大鼠给药4、8周后肝组织中PPARα、ACOX1的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:富硒灵芝粗提物可上调肝组织中PPARα和ACOX1蛋白和mRNA的表达,促进蓄积的脂肪酸排出,明显改善T2DM模型大鼠脂肪酸代谢、炎症反应和肝功能。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养大鼠肾脏脂质合成和分解代谢的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)-1、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α及酰基辅酶A氧化酶(ACO)的变化,探讨其对脂质合成代谢和分解代谢的影响并观察鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组及CDCA组,每组16只,8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;SREBP-1c、SCD-1、PPAR-α及ACO基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重,血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 hUMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01);PPAR-α和ACO基因及蛋白表达明显减少,且随时间延长其表达更少(P<0.01)。CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸血症和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织脂质合成代谢增强,分解代谢减弱,进而导致肾脏损伤。CDCA可下调SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达,上调PPAR-α和ACO基因及蛋白表达,减少脂质合成,促进脂质分解,减轻肾损伤。