华根霉前导肽和成熟肽脂肪酶基因的克隆表达及性质研究

以华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)为出发菌株,提取总DNA,PCR扩增出前导肽脂肪酶基因(proRCL)及成熟肽脂肪酶基因(mRCL),克隆到原核载体pET-28a,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达并纯化出活性目的蛋白。经SDS-PAGE分析,重组蛋白ProRCL和MRCL的分子量分别约43kD和33kD。两重组脂肪酶主要酶学性质基本相似,最适反应温度均为35℃,40℃下较为稳定;最适反应pH相近,分别为8.0和8.5;以pNP脂肪酸酯为底物,均对短链脂肪酸酯底物特异性较高。MRCL上述性质与野生型RCL基本一致。研究结果表明,通过条件控制可以利用E.coli表达系统表达具有活性的华根霉前导肽脂肪酶ProRCL和成熟肽脂肪酶MRCL。与米根霉脂肪酶(ROL)不同,前导序列对华根霉脂肪酶的主要酶学特性没有显著影响。

少根根霉脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达

利用PCR技术从少根根霉基因组中扩增出脂肪酶成熟肽基因ral,并从枯草芽孢杆菌基因组中扩增出sacB基因的启动子-信号序列(SacB);通过搭桥PCR将SacB序列与ral基因融合,并将该基因表达盒连接到枯草杆菌分泌表达载体pGJ103中构建了脂肪酶基因的诱导表达载体pGJ103-SacB-ral。将重组载体转化至枯草芽孢杆菌后,少根根霉脂肪酶成熟肽基因在SacB启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,产物分泌至胞外。

LPL、LMF1与重度高甘油三酯血症相关性及鱼油对其影响的分析

目的:研究脂蛋白脂肪酶(LPL)、脂肪酶成熟因子1(LMF1)与重度高甘油三酯血症(HTG)发生的相关性;观察高纯度鱼油治疗重度HTG效果,及其对LPL、LMF1的影响。方法:入选2020年9月-2021年10月就诊于包头医学院第一附属医院门诊甘油三酯(TG)≥5.65 mmol/L且<22.60 mmol/L的患者60例为重度HTG(SHTG)组,以TG<1.7 mmol/L的非HTG患者60例作为对照组。全部入选者用全自动生化分析仪检测血脂,用ELISA法检测血清中LPL和LMF1水平。其中SHTG组口服高纯度药用鱼油治疗3个月,3 g/d(早中晚各1 g),分别于用药前后空腹采集静脉血,用全自动生化分析仪检测血脂、肝肾功能,用ELISA法检测血清中LPL和LMF1水平。结果:SHTG组总胆固醇、极低密度脂蛋白(VLDL)均高于对照组(P<0.05),低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、LPL、LMF1均低于对照组(P<0.05),两组年龄、性别、体重指数及高血压病史比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。LPL、LMF1与TG呈负相关(P<0.05),LPL与LMF1呈正相关(P<0.05)。logistic回归分析结果显示,LPL为重度HTG的保护因素[OR=0.968,95%CI(0.941,0.996),P=0.026],LMF1非重度HTG的保护因素(P>0.05)。SHTG组鱼油治疗后LDL、LPL均升高、TG、VLDL均降低(P<0.05),HDL、LMF1干预前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:LPL是重度HTG的保护因素,LPL及LMF1降低与重度HTG的发生有关。鱼油可以有效降低重度HTG患者的TG、VLDL水平,升高LPL水平。

影响血浆甘油三酯代谢的新基因

随着生活环境的改变,高甘油三酯血症已经成为最为常见的病症之一。血浆甘油三酯的代谢受到众多基因的调控。进入二十一世纪以来,几种明显影响血浆甘油三酯水平的新基因(载脂蛋白AⅤ、糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1和脂肪酶成熟因子1)相继被发现,其作用主要是通过影响脂蛋白脂肪酶而实现。对这几种基因的研究,丰富了人们对血浆甘油三酯代谢调控的认识,并为预防和控制高甘油三酯血症提供了新的途经。