固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化菜籽油醇解反应合成生物柴油的工艺条件

脂肪酶Lipozyme TL IM在有机相体系中能有效催化菜籽油醇解反应生成生物柴油。作者研究了酶量、底物比率、反应时间、反应温度、转速、水分质量分数、有机溶剂对产物得率的影响。最佳工艺条件为:在正己烷的反应介质中,酶量50%,醇油摩尔比3∶1,反应温度50℃,转速150r/min,添加质量分数5%的水分,反应12 h后产物脂肪酸甲酯得率可达92.3%。

固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化菜籽油制备生物柴油稳定性的研究

研究了固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化菜籽油制备生物柴油的反应,探索了酶的预处理方式、后处理方式、反应温度、甲醇的加入方式等对酶活稳定性的影响。结果表明:将酶在油酸甲酯中浸泡0.5h,过滤后用菜籽油淋洗,在菜籽油中浸泡12h可以提高酶活的稳定性;多批次反应温度40℃为适宜;用丙酮洗涤酶除去甘油可以提高酶的稳定性;分三步加入甲醇的方式可以减轻甲醇对酶的毒害。Lipozyme TL IM经过预处理,40℃下进行多批次反应,每批反应24h,并在反应0、8、16h时加入1摩尔当量甲醇,并在8、16h以及反应结束时用丙酮洗涤固定化酶并重新投入体系,连续反应10批次,Lipozyme TL IM相对酶活仍有85%.

有机溶剂对脂肪酶Lipozyme^(IM)催化活性的影响

脂肪酶LipozYmeIM经有机溶剂浸泡处理后活性显著提高。该文系统地探讨了有机溶剂特性、有机溶剂水含量以及有机溶剂浸泡温度和浸泡时间对LipozymeIM催化活性的影响。发现LipozymeIM经疏水性较强的有机溶剂浸泡处理后活性成倍增长；浸泡的最佳温度为60℃左右；浸泡时间对酶活影响不大；随着有机溶剂水含量的增加，酶活性急剧下降。

基于氯化镁饱和溶液中固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化光皮树油脂合成生物柴油

基于氯化镁饱和溶液反应体系中,对采用固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化光皮树油脂转化为生物柴油的工艺进行了研究。考察了固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化光皮树油转酯化的工艺中甲醇的用量、固定化脂肪酶的添加量、摇床的转速和反应时间对生物柴油产率的影响。实验结果表明,采用氯化镁饱和溶液反应体系,在醇油摩尔比为3∶1,固定化酶Lipozyme TL IM用量为光皮树油质量的20%,摇床转速为150 r/min,反应8 h时,生物柴油产率最高,达到86.5%。与传统的三步甲醇醇解或者有机溶剂反应体系比较,采用的氯化镁饱和溶液体系的酶稳定性更好,反应效率更高,有效地解决了酶在甲醇中失活的问题,生产成本低,可成为生产生物柴油的新工艺。

无溶剂体系脂肪酶Lipozyme TL IM催化拆分DL-薄荷醇

为提高非水相脂肪酶法拆分DL-薄荷醇反应的底物浓度,建立了以乙酸乙烯酯为酰基供体的无溶剂体系。实验考察了底物浓度、酶量、温度和反应时间等因素对脂肪酶Lipozyme TL IM动力学拆分DL-薄荷醇的影响,得到最佳反应条件为DL-薄荷醇浓度2.8 mol/L,酶用量0.5 g,反应温度30℃,反应时间6 h。此条件下,反应转化率为22.7%,e.e.p为99.1%。脂肪酶Lipozyme TL IM重复利用20次,酶立体选择性基本不变,相对酶活为38.7%。

脂肪酶LipozymeTLIM催化合成MLM型结构脂及其1,3专一性的研究(英文)

The structured lipids are produced through sn-1,3-specific interesterification of soybean oil with medium-chain triacylglycerol(MCT) in continuous reactions catalyzed by Thermomyces lanuginose lipase(Lipozyme TL IM).Cheap Lipozyme TL IM presents similar interesterification degree(ID), sn-1,3-specificity and residual activity as expensive Rhizomucor miehei in batch reactions. In packed-bed interesterification of soybean oil with MCT catalyzed by Lipozyme TL IM, the residence time has a significant effect on ID, while temperature has a small effect at45–70 °C. The sn-1,3-specificity of Lipozyme TL IM is not satisfactory when reaction temperature is higher than60 °C. The optimal residence time and temperature are 30–40 min and 55 °C, respectively. Among the solvents,including acetone, isopropanol, tert-butanol, and isobutanol, used to recover the activity of the used Lipozyme TL IM, acetone is the most suitable one than the other solvents.

固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化葫芦籽油合成脂肪酸乙酯工艺研究

目的研究固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化葫芦籽油合成脂肪酸乙酯工艺。方法将葫芦籽油与乙醇(EtOH)作为原料,通过固定化脂肪酶LipozymeTLIM的催化作用,完成脂肪酸乙酯(FAEE)的合成。采用单因素试验与RSM(响应面分析法),确定葫芦籽油脂肪酸乙酯的最佳合成工艺。结果单因素试验表明醇油摩尔比、Lipozyme TL IM质量分数、反应温度与时间依次为4∶1、30%、50℃与1 d时,脂肪酸乙酯转化率最高。响应面法优选工艺条件为:醇油摩尔比为4∶1、LipozymeTLIM质量分数为35%,以及反应时间与温度各为26 h、50℃时,通过3次试验检验最优条件下的合成工艺,脂肪酸乙酯转化率达到了(85.74%±0.43%),与预测值相差1.05%。葫芦籽油脂肪酸乙酯GC-MS分析结果表明,不饱和脂肪酸乙酯含量为73.55%,其中亚油酸乙酯的含量达58.483%。结论本工艺操作简单可行,适用于葫芦籽油脂肪酸乙酯的合成,具有较好的应用前景。

1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其产脂肪酶特性

【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2 h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10^(9)CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10^(9)CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。

内皮脂肪酶和脂蛋白酶在冠状动脉粥样硬化发生及发展中的作用研究进展

冠心病是主要由冠状动脉粥样硬化导致的心肌缺血性病变。动脉壁僵硬、脂质代谢异常导致动脉内膜脂质类物质聚集、纤维组织增生和钙质沉积,斑块形成,从而影响血液运输。内皮脂肪酶(EL)是一种磷脂酶,可水解血浆高密度脂蛋白胆固醇,具有促进脂肪分解代谢的作用。脂蛋白酶(LPL)是溶解脂蛋白的关键酶,其特定的酶分子结构可水解甘油三酯,参与人体内脂蛋白代谢。因此,了解EL、LPL在冠状动脉粥样硬化发生及发展中的作用对早期防治冠心病至关重要。现对EL和LPL的结构、生物学特点以及在冠状动脉粥样硬化形成中的作用进行综述。

樟树5种化学型精油组成及其胰脂肪酶抑制活性研究

采用GC和GC-MS方法分析确定了樟树5种精油化学成分组成,进一步研究了5种不同类型精油的胰脂肪酶抑制活性。结果表明:5种精油主成分分别为:芳樟醇(91.98%)、樟脑(81.25%)、龙脑(91.88%)、反式-橙花叔醇(52.63%)和桉叶油素(57.73%)。精油的胰脂肪酶抑制活性顺序为:反式-橙花叔醇型>桉叶油素型>芳樟醇型>樟脑型>龙脑型。其中反式-橙花叔醇型精油IC50为(20.02±3.27)mg/mL,当其精油浓度为100 mg/mL时,胰脂肪酶抑制率达90.17%±1.56%。

血清淀粉酶、脂肪酶及C-反应蛋白在急性胰腺炎患者中的应用价值

目的探讨血清淀粉酶、脂肪酶及C-反应蛋白联合检验对诊断急性胰腺炎的临床价值。方法选取2020年4月—2022年5月甘肃省天水市第一人民医院收治的50例急性胰腺炎患者为研究组,包括30例轻型急性胰腺炎患者及20例重型急性胰腺炎患者;同时选择50例非急性胰腺炎急腹症患者作为A1组,50例健康体检人员作为A2组;对所有研究对象均展开血清淀粉酶水平检测、脂肪酶水平检测以及C反应蛋白检测,比较3组的血清淀粉酶水平、脂肪酶水平以及C反应蛋白检测结果,比较轻型、重型急性胰腺炎患者指标测定结果,并进行相关性分析。结果研究组血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平及C反应蛋白水平均高于A2组和A1组,差异有统计学意义(P均<0.05);重型急性胰腺炎患者血清淀粉酶水平为(768.49±43.22)U/L、血清脂肪酶水平为(1694.88±300.15)mg/L、C反应蛋白水平为(137.49±13.35)mg/L,高于轻型急性胰腺炎患者的(591.85±48.22)U/L、(1232.49±300.13)mg/L、(26.25±4.13)mg/L,差异有统计学意义(t=19.288、7.702、56.288,P均<0.05)。随着急性胰腺炎病情的严重,患者的血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平呈现出显著提升(r=0.128、0.139、0.137,P均<0.05)。结论临床对急性胰腺炎患者在开展早期诊断工作期间,合理展开血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平检测工作,可为疾病顺利诊断提供一定依据,发现随着急性胰腺炎病情的严重,患者的血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平呈现出显著提升对于疾病的有效治疗可以奠定基础。

Lipozyme RM IM脂肪酶催化酸解制备MLM型结构脂质

采用脂肪酶Lipozyme RM IM催化辛酸、癸酸与大豆油进行酸解反应以制备MLM型结构脂质。通过单因素实验研究底物摩尔比、辛癸酸摩尔比、酶添加量、反应时间、反应温度和初始水分含量对酸解反应的影响。得到适合的反应条件为:底物摩尔比3∶1(总脂肪酸/大豆油),辛酸与癸酸摩尔比(辛酸/癸酸)2.5∶1,酶添加量7.5 wt%(基于底物总重),反应时间5 h,反应温度65℃,加水量1.0 wt%(基于底物总重),得到MLM结构脂脂肪酸组成中辛酸含量为20.0 wt%,癸酸含量为10.5 wt%,两者质量比为1.92。

牛蒡根中多酚成分对脂肪酶的抑制作用

为明确牛蒡根中多酚成分对脂肪酶的抑制作用,本文提取并富集牛蒡根中的多酚成分,采用福林-西奥卡特(Folin-Ciocalteu)法测定总酚含量;HPLC-UV法测定多酚部位中指标性成分的含量;对硝基苯基丁酸酯(p-NPB)法测定牛蒡根多酚和其指标性成分对脂肪酶的抑制效果、抑制类型,采用等效线图解法和药物联合指数(CI)测定牛蒡根中的多酚单体化合物联合使用时的抑制作用。结果表明,富集后的牛蒡根多酚部位的总多酚含量达到51.23%,5种指标性成分的含量占纯化后牛蒡根多酚含量的12.87%,牛蒡根多酚对脂肪酶半数抑制浓度IC_(50)值为1.706 mg/mL,抑制类型为可逆性竞争型抑制。新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、绿原酸和异绿原酸A对脂肪酶的IC_(50)值分别为0.872、0.910、0.280、0.847、0.244 mg/mL。绿原酸和异绿原酸A浓度比为1:2.15时,CI值为0.549,咖啡酸和异绿原酸A浓度比为1:0.87时,CI值为0.282,对脂肪酶具有协同抑制作用。本研究为探究牛蒡根降脂功效的物质基础及其降脂的机制提供了实验依据,为牛蒡根的开发奠定基础。

Lipozyme TL IM脂肪酶催化茶油酯交换制备类可可脂的研究

研究了无溶剂体系中利用Lipozyme TL IM脂肪酶催化茶油与硬脂酸和棕榈酸进行酯交换反应制备类可可脂。利用酯交换程度和酰基位移程度来评价各反应影响因素对反应工艺的影响。反应条件为：茶油3 g,反应时间14 h,底物物质的量比为6.0（脂肪酸/茶油）,加酶量20%（以茶油质量计）,反应温度60℃,硬脂酸与棕榈酸的物质的量比为2/1,水活度0.43（20℃）时所制备的类可可脂产品的β-POP＋β-POSt＋β-StOSt的总量为27.24%,与天然可可脂的符合度达到37.3%;熔点范围为21～24℃,这与产品中油酸含量偏高有关。

Lipozyme RM IM脂肪酶催化苦瓜籽油和癸酸合成功能性油脂

以苦瓜籽油为原料,利用癸酸在脂肪酶Lipozyme RM IM的催化下进行结构修饰,来降低苦瓜籽油中桐酸的含量。选取底物物质的量的比、加酶量、反应温度、反应时间为影响因素,采用响应面分析法进行反应条件优化,得最佳反应条件为底物物质的量的比(苦瓜籽油:癸酸)=1:4、加酶量(占底物质量的质量分数)12.5%、反应温度60℃、反应时间14.8h。在此最优反应条件下得到的新油脂中癸酸含量为47.12%,同时桐酸含量由反应前苦瓜籽油中的56.17%降为25.46%。

黑曲霉酸性脂肪酶Tgl的酶学性质及其酯化能力研究

脂肪酶是一种具有水解、酯化、酯交换等多种功能的生物催化剂,为研究脂肪酶的酯化能力,该文克隆表达了来源于黑曲霉的脂肪酶Tgl编码基因,对其进行生物信息学分析,研究该酶的酶学性质及其催化合成脂肪酸乙酯的能力。结果表明,脂肪酶Tgl的最适反应温度为50℃,在50℃下孵育12 h后残余酶活力仍能达到70%左右;最适反应pH值为5.0,在pH 5.0条件下孵育12 h后,其相对酶活力为70%。有机试剂对脂肪酶Tgl均表现出不同程度的抑制作用,其中,乙醇对脂肪酶的抑制作用最为明显,但是在40%的乙醇体系下,Tgl的残余酶活力仍接近80%。20%的乙醇体系中,Tgl催化合成乙酸乙酯的产量最高,为41.62 mg/L,而在60%乙醇体系中催化合成己酸乙酯的产量最高,可达171.08 mg/L。由此可见,黑曲霉酸性脂肪酶Tgl具有较高的催化脂肪酸乙酯合成的能力,在酿造工业中具有很大的应用潜力。

米根霉全细胞脂肪酶在化学-酶法环氧化反应体系中的稳定性

为了提高米根霉(Rhizopus oryzae CGMCC 3.5040)全细胞脂肪酶在化学-酶法环氧化反应体系中的稳定性,以α-蒎烯为模式底物,考察柠檬酸三钠用量、戊二醛交联细胞、过氧化氢(H_(2)O_(2))用量和回用方式对催化剂稳定性的影响。结果表明:过氧有机酸会影响酶稳定性,添加3.5 mmol柠檬酸三钠会与质量分数为30%H_(2)O_(2)水溶液形成高渗液,防止细胞涨破,同时能中和过量过氧酸,提高反应选择性与细胞的回用稳定性;经过戊二醛交联后,全细胞催化剂的热稳定性、储存稳定性和回用稳定性都显著提高;蒎烯环氧化的最适H_(2)O_(2)用量为5 mmol;可采用直接分离有机相,再加入新鲜有机相的方式进行回用。优化回用方式后,该全细胞催化剂第7次使用时,催化反应仍然有77.3%的转化率。

Lipozyme TL 100L脂肪酶的固定化及其性质研究

比较了8种大孔树脂对脂肪酶Lipozyme TL 100L的固定化效果,选取树脂AB-8为该酶最佳的固定化载体,并对固定化条件进行了优化,得到AB-8固定化脂肪酶的最佳pH为9.0,最佳吸附量为54.5mg/g树脂,最佳含水量为6%～7%。固定化脂肪酶的pH稳定性、热稳定性、操作稳定性和贮存稳定性均有一定程度的提高。

VKT多肽介导的固定化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶催化制备生物柴油

生物柴油是一种环境友好的生物液体燃料,对于酶法生产生物柴油,迫切需要找到廉价和高效的固定化脂肪酶。本研究利用固体结合肽(SBPs)VKT,将其与疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)融合构建融合脂肪酶,并将其固定化在硅基材料上,获得了一种新型的生物催化剂。在所测试的硅基材料(ZSM-5、Na-Y、SAR-100、MCM-41和SiO_(2)微粉)中,固定在ZSM-5沸石上的TLL-VKT(TLL-VKT@ZSM-5)表现出最佳的固定化效率和最大负载,且具有优异的pH、温度、储存和洗脱稳定性。以TLL-VKT@ZSM-5为生物催化剂,对麻疯树籽油进行转酯化反应,48h生物柴油得率即达到93.9%。此外,TLL-VKT@ZSM-5还表现出较高的重复使用性能,在7次重复使用后,生物柴油得率依然保持71.9%。本研究的酶固定化方法具有简单高效、稳定性高和重复使用性能高等优点。本研究显示VKT肽在酶蛋白固定化的应用方面具有较好前景。

猫球形马拉色菌脂肪酶SMG 1基因的真核表达及重组载体脂肪酶活性分析

【目的】马拉色菌(Malassezia)是引起猫外耳炎的病因之一,具有脂质依赖性,脂肪酶SMG 1基因能调控球形马拉色菌脂肪酶的合成。本研究旨在构建脂肪酶SMG 1基因毕赤酵母表达载体,获得SMG 1基因重组表达产物,并对脂肪酶酶活性进行分析,为后续马拉色菌脂肪酶SMG 1基因功能研究提供依据。【方法】对1例疑似猫马拉色菌性外耳炎病例的致病菌进行真菌分离鉴定,并通过相似性比对确定菌种类型;利用DNAworks软件优化脂肪酶SMG 1基因,构建克隆载体并鉴定;使用毕赤酵母表达系统构建SMG 1基因真核表达载体,并对重组表达载体进行筛选及鉴定;对重组载体脂肪酶活性进行测定。【结果】试验成功从疑似患有马拉色菌性外耳炎的患猫耳道中分离得到1株马拉色菌菌株,鉴定为球形马拉色菌;通过对马拉色菌脂肪酶SMG 1基因密码子的优化,将密码子适应指数(codon adaptation index,CAI)提高至0.95;成功构建脂肪酶SMG 1基因克隆载体,成功构建重组质粒pGAPZαA-SMG1并转入毕赤酵母X33中,诱导表达后使用SDS-PAGE分析,蛋白产物大小为35 ku,脂肪酶酶活性测定为0.023 U/mL;重组脂肪酶SMG1在30℃酶活性最高(0.027 U/mL),与40、45℃组间差异均极显著(P<0.01)。【结论】球形马拉色菌在猫耳道皮肤温度附近有较高的脂肪酶活性,同时脂质促进了马拉色菌的生长;毕赤酵母表达系统可成功表达并分泌重组脂肪酶SMG1。试验结果为后续猫马拉色菌性外耳炎的致病机制研究、脂肪酶抑制剂研制及快速检测技术的开发奠定了基础。