昆虫脂肪酸合成通路关键基因的研究进展

脂肪酸对昆虫生长、发育、繁殖、信息交流起到重要的作用。主要介绍脂肪酸合成通路中的5个关键基因,乙酰辅酶A羧化酶基因(ACC)、脂肪酸合成酶基因(FAS)、超长链脂肪酸延伸酶基因(ELO)、去饱和酶基因(desat)及脂酰辅酶A还原酶基因(FAR)在昆虫中的研究进展。

健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α-固醇调节元件结合蛋白-1-脂肪酸合成酶信号转导通路的影响

目的探讨健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝X受体(liver X receptorα,LXRα)-固醇调节元件结合蛋白-1(sterolregulatory element-binding protein-1,SREBP-1)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)信号转导通路的影响。方法将32只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)SD雄性大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组,每组8只。正常组进食普通饲料,其他组进食高脂饲料,健脾疏肝丸组给予4.86 g/(kg·d)灌胃,易善复组给予0.123 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。灌胃与造模同时进行,共8周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。对大鼠肝组织切片进行HE染色和油红O染色,于光学显微镜下观察。采用免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠LXRα、SREBP-1及FAS的表达水平。结果 (1)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠ALT[(3.40±0.81)U/L vs(9.98±2.27)U/L vs(7.80±1.52)U/L vs(6.43±1.89)U/L]、AST [(10.61±1.17)U/L vs(23.63±4.82)U/L vs(18.04±2.98)U/L vs(16.42±3.30)U/L]、TNF-α[(2.40±0.96)×10-3μg/L vs(6.64±0.92)×10-3μg/L vs(4.87±1.35)×10-3μg/L vs(4.45±1.39)×10-3μg/L]、IL-6 [(0.95±0.81)pg/ml vs(7.88±3.08)pg/ml vs(3.17±1.26)pg/ml vs(1.64±0.55)pg/ml]、TG [(0.33±0.13)mmol/L vs(0.90±0.24)mmol/L vs(0.62±0.37)mmol/L vs 0.62(0.46,0.66)mmol/L]、TC [(2.10±0.42)mmol/L vs 5.34(5.17,6.12)mmol/Lvs(3.68±0.63)mmol/Lvs(3.41±0.81)mmol/L]、HDL-C [(1.07±0.17)mmol/Lvs(0.62±0.14)mmol/Lvs(0.78±0.13)mmol/Lvs(0.79±0.12)mmol/L]及LDL-C[0.38(0.26,0.41)mmol/L vs(0.69±0.11)mmol/L vs(0.41±0.13)mmol/L vs(0.43±0.10)mmol/L]水平差异均有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6及TNF-α显著升高,HDL-C显著降低(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组和易善复组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6、TNF-α显著降低,HDL-C显著升高(P<0.05);与健脾疏肝丸组相比,易善复组大鼠血清TC显著降低(P <0.05),其他各指标差异无统计学意义(P> 0.05)。(2)肝组织HE染色和油红O染色示:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变严重;与模型组相比,健脾疏肝丸组大鼠肝脏脂肪变减轻。(3)免疫组织化学结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα(345872±52737 vs 544998±55506 vs 436319±65076 vs 448588±104641)、SREBP-1(259408±71143 vs 538701±62336vs 399705±102395 vs 394167±158047)和FAS(201683±48205 vs 466884±74934 vs 425589±63672 vs417852±84373)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组各蛋白相对表达水平均显著升高(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平显著下降(P <0.05);健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(4)Western blot结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα[0.80±0.29 vs 1.57(1.30,1.67) vs 1.09±0.30 vs 1.10±0.36]、SREBP-1(0.42±0.12 vs 1.15±0.45 vs 0.86±0.20 vs 0.84±0.20)和FAS(0.43±0.12 vs 1.10±0.40 vs 0.81±0.26 vs 0.80±0.28)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组对比,模型组小鼠各蛋白相对表达水平显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组小鼠LXRα蛋白相对表达水平显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(5)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠肝组织LXRα[1.13±0.38 vs 4.14(4.01,4.35) vs 2.65±1.85 vs 1.35(0.54,4.23)]、SREBP-1、FAS[1.37±0.49 vs 4.35±1.97 vs 1.98(1.88,3.22)m RNA相对表达量差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组LXRα[1.46±0.51 vs 6.13±1.17 vs 3.82±2.06 vs 1.56(1.19,4.74)]、SREBP-1、FAS vs1.83(1.64,4.29)] m RNA相对表达量显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达均显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论健脾疏肝丸对大鼠NAFLD的改善作用可能与其抑制LXRα-SREBP-1-FAS信号转导通路有关。

基于FXR-Srebp1c-FAS通路及CD36探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的 以内源性脂肪酸合成相关法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)-固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotein-1c,Srebp1c)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)通路及外源性脂肪酸摄入相关的白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)为切入点,探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、祛痰活血方组和易善复组,每组各10只。模型组、祛痰活血方组和易善复组给予高脂饲料喂养,4周后祛痰活血方组和易善复组开始给药干预,给药8周后取各组小鼠血清用于生化检测;肝组织用于病理、肝脏总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量及FXR、Srebp1c、FAS、CD36基因及蛋白表达的检测。结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝质量明显增加(P<0.05);肝组织病理结果及肝脏TC、TG含量的升高(P<0.01)均提示明显脂肪变性;肝组织FXR、Srebp1c的m RNA表达水平,以及CD36的m RNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01),FAS蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,祛痰活血组小鼠体质量、肝质量均明显降低(P<0.01);肝组织脂肪变性明显减轻;肝组织中FXR m RNA表达明显升高(P<0.01),Srebp1c、FAS、CD36的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 外源性脂肪酸摄入增加可能是高脂引起的NAFLD的主要成因,祛痰活血方既抑制外源性脂肪酸摄入,亦减少内源性脂肪酸合成,双向调节改善NAFLD。

基于Fas/FasL信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响

目的基于脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响。方法选择健康雄性SD大鼠108只,适应性饲养7天,随机分为对照组、模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组、舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组,每组18只。模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组、舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组通过冠状动脉左前降支结扎法制作AMI模型;对照组除不结扎冠状动脉左前降支外,其余步骤与AMI模型相同。舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组分别于AMI模型制作成功后腹腔注射0.1、1µg/kg舒芬太尼。舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组和舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组分别于AMI模型制作成功后腹腔注射1µg/kg舒芬太尼,尾静脉注射200 nmol/kg NC shRNA慢病毒或Fas shRNA慢病毒。对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。术后72 h,采集大鼠尾静脉血,采用ELISA法检测血清肌钙蛋白T;采用超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDd)和左心室收缩末期内径(LVESd)。待大鼠心功能检测完成后,腹主动脉取血,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-6。所有大鼠断头处死,留取心脏,随机取6只大鼠的心脏组织,TTC染色,计算心肌梗死面积;随机取6只大鼠的心脏组织,HE染色,观察心肌组织病理形态变化,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况;取剩余6只大鼠的心脏组织,采用Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及Fas/FasL信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清肌钙蛋白T水平升高,LVEDd、LVESd升高,LVEF、LVFS降低,血清TNF-α、IL-6水平升高,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05);与对照组比较,模型组心肌细胞形态模糊、纹理消失、排列紊乱、心肌间小血管扩张、细胞数量减少,可见大量炎性细胞浸润。与模型组比较,舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组血清肌钙蛋白T水平降低,LVEDd、LVESd降低,LVEF、LVFS升高,血清TNF-α、IL-6水平降低,心肌梗死面积减小,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P均<0.05);与模型组比较,舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组心肌细胞形态、纹理、排列、血管扩张、细胞数量及炎性细胞浸润显著改善。以舒芬太尼高剂量组上述效果改善较为明显。与舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组比较,舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组血清肌钙蛋白T水平升高,LVEDd、LVESd升高,LVEF、LVFS降低,血清TNF-α、IL-6水平升高,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P均<0.05);与舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组比较,舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组心肌细胞形态模糊、纹理消失、排列紊乱、心肌间小血管扩张、细胞数量减少,炎性细胞浸润明显。结论舒芬太尼可改善AMI大鼠心功能,抑制心肌细胞凋亡,并且1µg/kg舒芬太尼的作用效果要优于0.1µg/kg舒芬太尼;抑制Fas/FasL信号通路激活可能是舒芬太尼改善AMI大鼠心功能的作用机制之一。

布托啡诺调节Fas/FasL信号通路对急性心肌梗死 大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨布托啡诺调节脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:126只无特定病原体(SPF)级大鼠按照随机数字表法分为空白组、AMI组、布托啡诺低剂量组(12.5μg/kg)、布托啡诺高剂量组(50.0μg/kg)、尿激酶组、rh-FasL组、布托啡诺高剂量+rh-FasL组,每组18只。除空白组外,其余组大鼠均采用结扎左冠状动脉前降支的方法复制AMI模型。建模成功1 h后,进行给药处理,每日1次,连续干预7 d。彩色多普勒超声显像仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)的变化;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积百分数;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠心肌组织病理变化;DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)染色检测大鼠心肌细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织中Bim、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Fas、FasL蛋白表达。结果:与空白组比较,AMI组大鼠心肌组织病理损伤严重,LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面积百分数、心肌细胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表达升高,LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI组比较,布托啡诺低剂量组、布托啡诺高剂量组、尿激酶组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面积百分数、心肌细胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表达降低,LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表达升高,rh-FasL组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与布托啡诺高剂量组比较,布托啡诺高剂量+rh-FasL组大鼠心肌组织病理损伤加剧,LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面积百分数、心肌细胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表达升高,LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论:布托啡诺可能通过抑制Fas/FasL通路抑制AMI大鼠炎症反应及心肌细胞凋亡。

益母草碱调节Fas/FasL信号通路对乳腺癌细胞恶性生物行为的影响

目的探讨益母草碱(Leonurine,Leo)对乳腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡、细胞周期进展以及上皮间质转化的影响及作用机制。方法体外培养4T1乳腺癌细胞,将细胞分为对照组(Control组)、益母草碱低、中、高浓度组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)、益母草碱高浓度+转染短发夹RNA慢病毒阴性对照组(Leo-H+sh-NC组),益母草碱高浓度+转染Fas短发夹RNA慢病毒组(Leo-H+sh-Fas组)。使用不同浓度的益母草碱(10~160 mmol/L)处理细胞,CCK-8法检测细胞的存活率,筛选最佳实验浓度;通过Transwell小室法评价细胞的迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期进展;Western blot检测N-cadherin、Vimentin、Fas、FasL表达,建立荷瘤小鼠模型评价益母草碱对乳腺癌移植瘤生长的影响。结果使用浓度为10~160 mmol/L的益母草碱处理细胞12 h,4T1细胞存活率显著降低(P<0.05),半数抑制浓度(IC50值)为(53.61±1.729)mmol/L,选择10、20、30 mmol/L为后续实验浓度;与Control组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著升高(P<0.05);与Leo-H+sh-NC组相比,Leo-H+sh-Fas组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著降低(P<0.05);益母草碱可以抑制乳腺癌移植瘤的生长(P<0.05)。结论益母草碱可以抑制乳腺癌细胞恶性生物行为,其作用机制可能与激活Fas/FasL信号通路有关。

丹参酮ⅡA调节Fas/FasL信号通路对脂多糖诱导的牙髓干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)调节脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)通路对脂多糖(LPS)诱导的牙髓干细胞增殖和凋亡的影响。方法鉴定从需正畸的18~20岁患者第三磨牙中分离的人牙髓干细胞(hDPSCs)。用低、中、高剂量TanⅡA处理LPS诱导的hDPSCs后,再用人重组FasL蛋白(rh FasL)干预高剂量TanⅡA作用后的LPS诱导的hDPSCs,检测hDPSCs增殖、凋亡、hDPSCs上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平及hDPSCs中增殖细胞核抗原(PCNA)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、Fas、FasL蛋白表达。结果成功分离出hDPSCs。TanⅡA可促进LPS诱导的牙髓干细胞增殖,抑制凋亡,上调PCNA蛋白表达,抑制TNF-α、IL-6水平及Cleaved Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达,且呈剂量依赖性,rh FasL对LPS诱导的牙髓干细胞的影响与上述对应指标变化趋势相反(P<0.05);rh FasL减弱了高剂量TanⅡA对LPS诱导的牙髓干细胞增殖的促进以及对细胞凋亡的抑制作用。结论TanⅡA可能通过抑制Fas/FasL信号通路促进LPS诱导的hDPSCs增殖,抑制凋亡。

定心方Ⅲ号方通过抑制Akt/mTOR/SREBP-1C通路改善ApoE^-/-小鼠非酒精性脂肪肝的实验研究

目的:观察定心方Ⅲ号方对高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响。方法:40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为模型对照组、定心方Ⅲ号方6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg组和辛伐他汀5 mg/kg组,每组8只,并设同龄C57BL/6J雄性小鼠为正常对照组。ApoE^-/-小鼠连续喂养高脂饲料12 w复制NAFLD模型后,各组分别连续给药12 w。末次给药后禁食8 h,检测小鼠空腹血糖、体质量和肝湿质量,计算肝指数;采用生化法检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),酶标法检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活力,HE染色观察小鼠肝脏病理形态,Western Blot检测小鼠肝脏中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、脂肪酸合成基因(SREBP-1C)、核孔糖蛋白62(p62)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白的表达情况。结果:与正常对照组小鼠比较,模型对照组小鼠的血糖、体质量、肝湿质量和肝指数明显升高(P<0.05或P<0.01),肝细胞中脂滴明显聚集,肝索排列紊乱或消失,NAFLD病理评分显著升高(P<0.01),血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、ALT、AST和MDA的浓度明显升高(P<0.05或P<0.01),SOD和GSH活性显著降低(P<0.01),肝组织中p-Akt、p-mTOR、SREBP-1C、p62、LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组小鼠比较,给药组小鼠血糖、体质量、肝湿质量和肝指数均降低,肝组织病理形态学明显改善,NAFLD评分显著下降,血清中TC、LDL-C、TG、ALT、AST和MDA浓度均有不同程度的下降,HDL-C、SOD和GSH含量活性均升高,肝组织中p-Akt、p-mTOR、SREBP-1C、p62、LC3Ⅱ蛋白表达均明显下降,与模型对照组比较,其中以定心方Ⅲ号方24 g/kg组和辛伐辛伐他汀5 mg/kg组变化最为明显(P<0.05或P<0.01)。结论:定心方Ⅲ号方可降低血脂水平、抑制氧化应激、调节自噬、改善肝功能,从而有效改善非酒精性脂肪的病变程度,其机制可能与抑制Akt/mTOR/SREBP-1C通路有关。

吴茱萸碱对乙型肝炎大鼠肝损伤的影响及其机制

目的基于脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路探讨吴茱萸碱(EVO)对乙型肝炎大鼠肝损伤的作用机制。方法将SD大鼠随机分为对照组(未注射病毒)、模型组、吴茱萸碱低剂量组(EVO-L,5 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(EVO-H,10 mg/kg)、拉米夫定组(10 mg/kg)。在大鼠体内注射乙肝病毒(HBV),建立乙型肝炎大鼠模型。EVO均使用羧甲基纤维素钠助悬。ELISA法检测血清中肝功能指标(ALT、AST、TBIL)、肝纤维化指标(HA、LN)、炎症因子(TNF-α、IL-1β)、HBsAg、HBeAg水平;HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;微量法检测肝组织SOD、GSH、MDA水平;PCR法检测肝组织病毒载量;Western blot检测Fas、FasL、Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组出现肝组织结构受损,细胞坏死,炎性细胞浸润且肝组织纤维结缔增生等病理损伤,血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、TNF-α、IL-1β、HBsAg、HBeAg水平上升,肝组织中MDA、病毒载量、Fas、FasL、Caspase-3蛋白表达上升,SOD、GSH活性下降(均P<0.05)。与模型组比较,EVO-L组、EVO-H组和拉米夫定组肝组织病理学变化明显好转,血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、TNF-α、IL-1β、HBsAg、HBeAg水平下降,肝组织中MDA、病毒载量、Fas、FasL、Caspase-3蛋白表达下降,SOD、GSH活性上升(均P<0.05)。与EVO-L组比较,EVO-H组大鼠血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、TNF-α、IL-1β、HBsAg、HBeAg水平下降,肝组织中MDA、病毒载量、Fas、FasL、Caspase-3蛋白表达下降,SOD、GSH活性上升(均P<0.05)。与拉米夫定组比较,EVO-L组大鼠血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、TNF-α、IL-1β、HBsAg、HBeAg水平上升,肝组织中MDA、病毒载量、Fas、FasL、Caspase-3蛋白表达上升,SOD、GSH活性下降(均P<0.05)。结论EVO可以通过下调Fas/FasL信号通路表达,调节肝功能,抑制肝纤维化、氧化应激和炎症反应,减轻乙型肝炎大鼠的肝损伤。

基于麝香酮对大鼠心肌细胞凋亡的影响探讨辛温通络法治疗糖尿病心肌病的作用机制

目的观察麝香酮调控脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨陈树泉“辛温通络”理论治疗DCM的作用机制。方法将SD大鼠分为空白组、DCM组、麝香酮低剂量组(0.68 mg/kg麝香酮)、麝香酮高剂量组(2.72 mg/kg麝香酮)、二甲双胍组(140 mg/kg二甲双胍)、麝香酮高剂量+重组人FasL蛋白(rh-FasL)组(2.72 mg/kg麝香酮+0.017 mg/kg rh-FasL),每组12只。除空白组外,其他组均采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素方式构建DCM大鼠模型,建模成功后,给药1次/d,持续6周。末次处理结束后,检测各组大鼠空腹血糖、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS);采用苏木素-伊红(HE)染色法、Masson染色法分别检测心肌组织病理损伤及纤维化程度;采用分光光度法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;采用TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Fas、FasL蛋白表达。结果与空白组比较,DCM组大鼠心肌组织病理损伤严重,空腹血糖、MDA含量、心肌胶原面积分数、心肌细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Bax、Fas、FasL蛋白表达升高,LVEF、LVFS、SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与DCM组比较,麝香酮低剂量组、麝香酮高剂量组、二甲双胍组大鼠心肌组织病理损伤减轻,空腹血糖、MDA含量、心肌胶原面积分数、心肌细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Bax、Fas、FasL蛋白表达降低,LVEF、LVFS、SOD活性升高,差异有统计学意义(P<0.05);与麝香酮低剂量组比较,麝香酮高剂量组、二甲双胍组大鼠心肌组织病理损伤减轻,空腹血糖、MDA含量、心肌胶原面积分数、心肌细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Bax、Fas、FasL蛋白表达降低,LVEF、LVFS、SOD活性升高,差异有统计学意义(P<0.05);与麝香酮高剂量组比较,麝香酮高剂量+rh-FasL组大鼠心肌组织病理损伤加剧,空腹血糖、MDA含量、心肌胶原面积分数、心肌细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Bax、Fas、FasL蛋白表达升高,LVEF、LVFS、SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论麝香酮可能通过抑制Fas/FasL通路抑制DCM大鼠氧化应激及心肌细胞凋亡。

舒芬太尼调节Fas/FasL信号通路对卵巢癌增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨舒芬太尼对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其机制是否与脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路有关。方法使用0.001~100μmol/L的舒芬太尼处理卵巢癌细胞SKOV3,筛选最佳药物浓度;将SKOV3细胞分为对照组、低浓度舒芬太尼组(舒芬太尼-L组,0.01μmol/L舒芬太尼)、中浓度舒芬太尼组(舒芬太尼-M组,0.1μmol/L舒芬太尼)、高浓度舒芬太尼组(舒芬太尼-H组,1μmol/L舒芬太尼)、舒芬太尼-H+sh-NC组、舒芬太尼-H+sh-Fas组。检测各组SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Snail、Fas、FasL蛋白表达情况。结果使用0.001~100μmol/L的舒芬太尼处理卵巢癌细胞,细胞存活率显著降低,呈浓度依赖性,选择浓度为0.01、0.1、1μmol/L的舒芬太尼进行后续实验;与对照组相比,舒芬太尼-L组、舒芬太尼-M组、舒芬太尼-H组细胞增殖、迁移、侵袭数,N-cadherin、Snail蛋白水平均降低,细胞凋亡率,E-cadherin、Fas、FasL蛋白水平均升高(P<0.05);抑制Fas表达减弱了舒芬太尼对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论舒芬太尼可能通过激活Fas/FasL信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进卵巢癌细胞凋亡。

金黄色葡萄球菌细胞膜磷脂合成的研究进展

金黄色葡萄球菌引起的危害是目前我国微生物安全的重要问题之一。金黄色葡萄球菌通过脂肪酸生物合成磷脂酸(磷脂合成必需中间体)合成细胞膜磷脂以完成自身繁殖。因此,抑制菌体磷脂酸合成可有效防控金黄色葡萄球菌对环境及生物体造成危害。然而,金黄色葡萄球菌可经Ⅱ型脂肪酸合成(typeⅡfatty acid synthesis,FASⅡ)通路和旁路两条途径合成磷脂酸,常规抑菌剂仅靶向抑制FASⅡ通路,可能导致菌体在富含外源脂肪酸条件下出现“旁路逃逸”,形成防控漏洞。为此,本文系统总结金黄色葡萄球菌基于FASⅡ通路和旁路合成细胞磷脂酸及磷脂酸向其他磷脂类物质转化的信号传导过程,讨论抑菌物质靶向抑制上述信号传导过程中可能的关键靶点,为新型抑菌剂开发提供理论指导。