脂联素对HepG2细胞中脂肪酸合成酶及激素敏感性脂肪酶基因启动子活性的影响

目的构建含人脂肪酸合成酶(FAS)及激素敏感性脂肪酶(HSL)基因启动子的荧光素酶报告基因表达质粒,探究脂联素对人肝癌细胞系HepG2中FAS及HSL基因启动子活性的影响。方法扩增人FAS及HSL启动子序列-622~+3 bp片段与-697~+53 bp片段,构建含人FAS及HSL启动子的pGL3-hFAS625-Luc(hFAS 625-Luc)与pGL3-hHSL750-Luc(hHSL 750-Luc)荧光素酶报告基因表达质粒。脂质体瞬时转染HepG2细胞,观察0.5~10.0μg/mL脂联素作用24 h或者5μg/mL脂联素作用2~32 h细胞中荧光素酶活性的变化。结果hFAS 625-Luc与hHSL 750-Luc荧光素酶表达质粒均能在HepG2细胞中良好表达。1.0~10.0μg/mL脂联素作用24 h能剂量依赖性地促进转染hFAS 625-Luc及hHSL 750-Luc质粒的HepG2细胞中荧光素酶的表达,最高分别达到对照组的1.76倍(P<0.01)和1.37倍(P<0.01)。5μg/mL脂联素作用于转染hFAS 625-Luc质粒的HepG2细胞4 h和8 h能够促进荧光素酶的表达(P<0.01),作用16 h和32 h则抑制荧光素酶的表达(P<0.01);而脂联素对转染hHSL 750-Luc质粒HepG2细胞作用不同时间(2~32 h)均能促进荧光素酶的表达,最高为对照组的1.37倍(P<0.01)。结论成功构建含人FAS与HSL启动子荧光素酶报告基因质粒。脂联素能够剂量依赖性地促进HepG2细胞中FAS及HSL启动子活性。脂联素作对FAS启动子的活性影响与作用时间有关,而对HSL启动子活性的影响一直表现为促进作用。

日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响

选择初始体重约20.7 kg的长白×荣昌杂交猪72头,随机分为3组,研究日粮能量水平对肥育猪肌内脂肪含量的影响及其与脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的关系。日粮的消化能分别为11.75 MJ/kg(低能组)、13.05 MJ/kg(中能组)、14.36 MJ/kg(高能组)。试验猪体重达到100 kg时,进行屠宰。结果表明:①提高日粮能量水平,对猪的日增重、日采食量没有显著影响(P>0.05),但提高了饲料转化率(P<0.05),缩短了育肥时间(P<0.05),增加了背膘厚、外周脂肪和肌内脂肪含量(P<0.05);②14.36 MJ/kg的能量水平提高了背膘中脂肪酸合成酶mRNA的表达(P<0.05),降低了激素敏感脂酶mRNA的表达,从而增加了背膘中肌内脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA的比值;③日粮能量水平与肌内脂肪含量、脂肪酸合成酶mRNA丰度以及脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA的比值呈显著正相关(P<0.05),脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA比值和肌内脂肪含量也呈显著正相关(P<0.05),激素敏感脂酶mRNA表达量与能量水平呈极显著负相关(P<0.01),与肌内脂肪含量呈显著负相关(P<0.05)。本研究表明,提高日粮能量水平能增加脂肪沉积;能量水平影响脂肪(尤其是肌内脂肪)沉积可能是通过调节脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶两种酶mRNA表达量实现的,而不是单独调节其中之一实现的。

日粮能量水平对猪脂肪酸合成酶和激素敏感酯酶的影响

选择初始体重约20kg的长白×荣昌杂交猪72头,随机分为3个处理,研究日粮能量水平对生长育肥猪脂肪酸合成酶(FAS)和激素敏感酯酶(HSL)活性及基因表达量的影响。日粮消化能分别为11.75MJ/kg(低能量组)、13.05MJ/kg(中能量组)和14.36MJ/kg(高能量组)。试验猪体重达到100kg时屠宰。结果表明:与低能量组相比,中能量组和高能量组的脂肪组织、肝脏组织和肌肉组织的FAS活性显著提高(P<0.05),而HSL活性明显降低,并且FAS和HSL活性具有组织差异性,脂肪组织中活性最高,肝脏组织中的活性其次,肌肉组织中的活性最低;与低能量组相比,中能量组和高能量组的脂肪组织和肌肉组织的FASmRNA表达量均明显提高,HSLmRNA表达量均显著降低(P<0.05)。本研究结果初步表明,能量水平调控脂肪沉积可能是通过调节FAS和HSL的活性及基因表达量来实现的。

绿茶提取物对运动大鼠腓肠肌游离脂肪酸含量及激素敏感性脂肪酶蛋白表达的影响

目的研究绿茶提取物在运动中对机体肌肉组织中能量代谢的作用。方法 SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别为安静对照组,运动对照组,低剂量绿茶提取物组(TPEL),中剂量绿茶提取物组(TPEM),高剂量绿茶提取物组(TPEH)。每天在运动前30 min灌胃1次,连续灌胃6 w,6 d/w,低、中、高剂量组分别为5,10,15 g·kg-1·d-1,对照组灌胃等量生理盐水。6 w力竭训练结束后,宰杀大鼠。根据试剂盒的方法测定大鼠腓肠肌游离脂肪酸(FFA)含量和Western印迹法测定大鼠腓肠肌组织激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白表达。结果力竭游泳训练导致大鼠腓肠肌FFA含量均显著升高,绿茶提取物组大鼠高于安静对照组(P<0.01)和运动对照组(P<0.05)。力竭游泳运动和绿茶提取物各组大鼠腓肠肌HSL蛋白表达水平升高绿茶提取物组大鼠高于安静对照组和运动对照组(P<0.01),TPEM、TPEH组与运动对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论绿茶提取物能够促进肌内脂肪酸合成为运动供能并调节脂质代谢。

遵义地区人群激素敏感性脂肪酶基因第6内含子多态性与2型糖尿病的关系

目的探讨遵义地区人群激素敏感性脂肪酶基因(hsl)第6内含子(i6)多态性与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法采用聚合酶链式反应-单链构象多态性方法,检测247例中国遵义地区人群hsli6多态性,其中T2DM患者130例,正常对照(NC)117名。结果hsli6等位基因5、9在T2DM组和NC组的频数分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论遵义地区正常糖耐量人群与T2DM人群之间hsli6第5、第9等位基因分布频率可能存在统计学差异。

运动与工作肌激素敏感性脂肪酶关系研究进展

在人体的能源系统中,与糖储备相比,内源脂肪是一种相对无限的能源。人体脂肪一般储备于脂肪组织、肌肉组织和肝组织中。脂肪在能量稳态中具有负调控作用。脂肪组织中的脂肪主要以甘油三酯的形式存在。当机体需要能量时,就会以脂肪酸的形式释放能量为机体供能。甘油三酯由脂肪酶催化水解为甘油和脂肪酸,这个过程称为脂肪水解（lipolysis）。甘油三酯的贮存和释放是一个动态的内部平衡过程。

放牧条件下山羊激素敏感性甘油三酯脂肪酶基因的表达

为探明放牧条件下山羊组织中激素敏感性甘油三酯脂肪酶(HSL)mRNA的分布规律,筛选出HSL mRNA表达的最主要组织,为进一步研究山羊肉质与HSL基因的关系奠定基础,使用实时荧光定量RT-PCR法检测在雷公山山区放牧的黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊各4只山羊的肝、肾、心、肺、背最长肌、半膜肌、皮下脂肪组织中HSL mRNA的表达水平。结果表明:5种放牧山羊HSL基因的组织表达谱各有特点,皮下脂肪和心脏中HSL mRNA水平较高,肺、肾、背最长肌和半膜肌次之,肝内最低。在放牧条件下5种山羊皮下脂肪和心脏中HSL mRNA表达丰度较大,是检测mRNA变化的最适靶组织。

烟酸对大鼠激素敏感性脂肪酶活性及相关指标的影响

文章旨在研究不同剂量烟酸对大鼠采食、体重增长、体脂肪沉积率、血清脂质含量、生长激素(GH)、胰岛素(INS)和激素敏感性脂肪酶(HSL)活性的影响。选取体重200～220 g雄性SD大鼠20只,随机分为4组,分别为:对照组(Ⅰ组)、50 mg/kg(烟酸/kg饲料,下同)组(Ⅱ组)、100 mg/kg组(Ⅲ组)和150 mg/kg组(Ⅳ组)。每周称体重1次,记录饲料消耗量。于试验第6 w末断头处死动物(处死前使动物空腹12 h),采集血液样本,分离睾周与肾周脂肪组织,采样并测定体脂沉积率,分别测定其血清TG、TC、LDL和HDL含量以及脂肪组织中HSL活性。结果表明:与对照组相比较,50 mg/kg烟酸提高了大鼠平均日增重(P<0.05)、日均采食量和体脂沉积率(P<0.05)。烟酸对大鼠血清TC、TG、HDL、GH和INS含量无显著影响(P>0.05),50 mg/kg烟酸显著降低大鼠血清LDL含量(P<0.05)。50 mg/kg烟酸和100 mg/kg烟酸显著降低大鼠脂肪组织HSL活性(P<0.05)。结果表明,大鼠饲粮中添加烟酸可提高日增重和体脂沉积率,并可显著降低脂肪组织HSL活性,对血脂指标有一定的调节作用,以50 mg/kg的添加效果较为明显。

激素敏感性脂肪酶HSL对生殖系统的整合调控

激素敏感性脂肪酶被认为是经典的脂肪分解限速酶,可特异水解甘油三酯,受儿茶酚胺等激素调控。近年来研究表明:HSL作用底物不仅有甘油三酯,还包括甘油二酯、甘油一酯、胆固醇酯等。然而,脂肪酶在生殖系统的功能并不清楚,基因敲除小鼠为证实HSL广泛存在于生殖系统提供良好模型,提示其可能在生殖系统生理及病理生理过程发挥重要调节作用,本文将着重介绍生殖系统中HSL基因与蛋白质结构并总结其在生殖系统的功能。

脂肪细胞因子对胰岛β细胞中脂质含量及激素敏感性脂肪酶活性和表达的研究

目的观察高脂饮食对GK大鼠胰岛中甘油三脂含量及激素敏感性脂肪酶(HSL)的表达和活性的影响,以期了解HSL在胰岛β细胞脂质代谢中的作用。方法给GK大鼠高脂饮食12周静脉采血测定甘油三脂(TG)、总胆固醇、游离脂肪酸并留取胰腺行胰岛中TG含量及HSL活性测定并分析。结果高脂饮食组大鼠胰岛β细胞脂质含量、HSL的表达和活性明显高于正常对照组和普食组均P<0.05。结论高脂饮食所致的游离脂肪酸增高不仅使胰岛β细胞内脂质含量增加,而且HSL的表达和活性也增强。提示:胰岛β细胞内TG和HSL之间可能存在一种代偿机制。

陆川猪激素敏感性脂肪酶基因的克隆及序列分析

为了获得广西陆川猪激素敏感性脂肪酶(HSL)基因编码区序列(CDS),试验从11月龄陆川猪背最长肌组织中提取总RNA,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分段扩增出HSL基因CDS。结果表明:成功分段克隆出陆川猪HSL基因CDS,拼接后长度为2 295 bp,与Gen Bank数据库中公布的国内地方猪种梅山猪的同源性为99.9%,与外来猪种长白猪的同源性为99.7%,并发现其1 044位点存在C→T,其碱基T是陆川猪所特有,尚未导致氨基酸突变。利用生物软件构建系统进化树显示,与广西陆川猪遗传距离最近的是梅山猪,它们聚为同一支,最远的是人。陆川猪HSL基因的二级结构包含α-螺旋、β-折叠。

断乳后不同饲料构成对大鼠体重、体脂含量及激素敏感性脂肪酶基因表达的影响

目的研究断乳后不同饲料构成对高脂膳食大鼠体脂含量及脂肪组织中激素敏感性脂肪酶(HSL)基因表达的影响。方法新生Wistar雄性大鼠24天断乳,按体重随机分为A、B、C、D四组,分别给予高碳水化合物构成的基础饲料、高蛋白质构成饲料、高不饱和脂肪酸和高饱和脂肪酸构成饲料喂养3周。然后均转为基础饲料喂养2周后,按体重将A组随机分为A1、A2两组。A1组继续喂饲基础饲料作为对照组,A2和B、C、D四组给予高脂饲料喂养6周,结束实验;A2组则为高碳水化合物组。动态观察大鼠的体重、体脂含量、血糖变化及白色脂肪组织HSLmRNA水平。结果实验末期,断乳后喂饲高不饱和脂肪酸构成饲料的C组,体重、体脂含量和血糖均显著低于高碳水化合物组A2(P<0·05);断乳后喂饲高蛋白质的B组体重和体脂含量明显低于A2组(P<0·05),但血糖水平高于A2(P>0·05);断乳后摄取高饱和脂肪酸饲料的D组,尽管体重明显低于A2(P<0·05),但血糖和体脂含量与A2组无差异(P>0·05)。动态观察表明,断乳后喂饲高不饱和脂肪酸的C组大鼠,白色脂肪组织HSL基因表达水平持续升高。结论断乳后喂饲高不饱和脂肪酸饲料不仅可以降低高脂膳食大鼠的体重、体脂含量,还可明显改善血糖异常,抑制肥胖形成;对基因表达的调控可能参与早期饮食对后续肥胖的程序性影响。

遵义地区人群激素敏感脂肪酶基因i6多态性分布

目的探讨遵义地区人群HSLi6多态性分布情况。方法采用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,检测247例中国遵义地区人群HSLi6多态性,并分析其在人群中的分布情况。结果HSLi6检测出6种等位基因片段、11种基因型。其多态信息含量大于0.7,其中等位基因6、7基因频率分布最广。结论HSLi6在遵义地区人群中具有多态分布,为HSL作为糖脂代谢研究候选基因提供了相关依据。

小鼠激素敏感性脂肪酶基因启动子报告质粒的构建

目的拟构建激素敏感性脂肪酶(HSL)基因启动子报告质粒。方法将以C57BL/6小鼠基因组DNA为模板扩增的小鼠HSL基因启动子序列,插入pGL4.10-basic荧光素酶报告质粒多克隆位点区域,再经PCR、限制性酶切和测序分析筛选出目标质粒pGL4.10-basic-HSL,采用荧光素酶活性分析评价质粒的转录活性。结果启动子插入片段长度正确,序列与数据库一致;目标报告质粒转入293T细胞后,在过氧化物酶体增殖物激活受体γ作用下具有转录活性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建HSL基因启动子报告质粒。

饥饿胁迫对大黄鱼激素敏感性脂肪酶和乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达及酶活性的影响

激素敏感性脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)是脂代谢的关键酶,肌肉和肝脏是鱼类脂代谢的主要场所。为研究饥饿过程中这两种酶的作用,本实验采用实时荧光定量PCR技术以及ELISA技术检测了在35 d饥饿过程中这两种酶在大黄鱼肌肉和肝组织中mRNA表达水平和酶活性的变化。结果显示,饥饿胁迫显著降低大黄鱼肌肉和肝组织中脂肪含量,以及脂肪合成关键酶ACC mRNA表达水平(P<0.05);显著提高脂肪分解关键酶HSL mRNA表达水平(P<0.05)。饥饿胁迫对肌肉和肝组织中HSL和ACC酶活性均有显著影响(P<0.05),肌肉和肝组织HSL(相关系数r分别为0.598 2和0.539 6)以及肌肉组织ACC酶活性(r=0.677 7)与对应mRNA表达水平呈中度正相关(0.5<r<0.8),但ACC酶活性在肝组织与其对应的mRNA表达量呈负相关(r=-0.374 0),提示饥饿胁迫对大黄鱼HSL和ACC的表达存在翻译前和翻译后两种水平的调控。本研究结果可为研究饥饿胁迫对大黄鱼脂类代谢分子层面的影响机制提供依据。

激素敏感性脂肪酶与胰岛素分泌

激素敏感性脂肪酶 (HSL)是脂肪酸代谢的关键酶 ,除了脂肪组织外 ,在多种组织也有表达。最近研究发现胰岛 β细胞中有HSL的表达 ,其表达和脂解活性也受激素、葡萄糖、脂质水平的影响 ,并且HSL可能在葡萄糖刺激的胰岛素分泌中发挥着重要的作用。

内脏脂肪堆积与内脏脂肪酶活性及胰岛素抵抗的关系

目的探讨胆囊三角脂肪堆积与其脂肪组织中脂肪酶活性及胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选择择期行腹腔镜胆囊切除术患者55例,根据术中观察胆囊三角脂肪堆积程度分为脂肪堆积组28例、正常组27例。计算两组腰臀比(WHR);检测其空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),以及脂肪组织中的甘油三酯脂酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)mRNA表达与ATGL、HSL蛋白表达;分析各检测指标的相关性。结果与正常组比较,脂肪堆积组的WHR、FINS、FFA均升高,ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达均下降(P<0.05或<0.01)。ATGL、HSL蛋白表达均与FINS和FFA呈负相关(P均<0.05)。脂肪组织中的ATGL与HSL蛋白表达呈高度正相关(r=0.708,P<0.01)。结论胆囊三角脂肪堆积与其脂肪组织中的ATGL、HSL蛋白表达及IR有关,WHR可作为临床预测胆囊三角脂肪堆积程度的指标。

n-3高不饱和脂肪酸对黑鲷幼鱼生长及脂肪代谢的影响

研究了饲料中不同水平n-3 HUFA(0.79%,0.83%,0.85%,0.88%,0.92%,0.94%;DHA/EPA=2.8/1)对黑鲷幼鱼生长及脂肪代谢的影响。结果显示:(1)黑鲷幼鱼肝体指数(HSI)及腹脂率(IPF ratio)随饲料中n-3 HUFA含量的增加而减小,且于0.92%和0.94%组时显著低于其他各组;脂肪细胞直径呈减小趋势,其中0.94%组显著小于0.85%组;肌肉脂肪含量受n-3 HUFA的影响显著,于0.88%组时达到最低。各组全鱼水份和脂肪含量差异不显著(P>0.05)。肝脏、肌肉及腹腔脂肪组织饱和脂肪酸(∑SFA)和C16∶0含量均随饲料n-3HUFA水平增加呈下降趋势,而∑n-3 HUFA呈显著上升趋势。各组织中DHA/EPA不受饲料脂肪酸组成的影响。以增重率为参考指标,二次回归分析结果表明,黑鲷幼鱼[(8.08±0.09)g]获得最佳增重时对饲料中n-3 HUFA的需要量为0.87%DM;(2)黑鲷幼鱼肝脏脂肪酸合成酶(FAS)活性及基因表达水平均在n-3 HUFA>0.92%时有显著下降(P<0.05);腹腔脂肪激素敏感脂肪酶(HSL)活性及基因表达水平均随饲料中n-3 HUFA的添加呈升高趋势(P<0.05),且高含量n-3 HUFA(0.94%)可使HSL活性增加近一倍。结果表明,饲料中n-3HUFA通过同步调控脂肪合成与分解两个过程影响黑鲷幼鱼脂肪代谢。