脂肪酸结合蛋白3对足细胞脂肪代谢的影响

目的:观察脂肪酸结合蛋白3(FABP3)过度增加对足细胞脂肪代谢的影响。方法:慢病毒载体转染小鼠永生化足细胞系(HSMPs)以构建稳定过表达FABP3的细胞系。将FABP3-siRNA转染至HSMPs中沉默FABP3,筛选干扰效率最大的FABP3-siRNA片段进行后续干扰实验。实验分组:(1)正常足细胞组;(2)NC-siRNA足细胞组;(3)FABP3-siRNA足细胞组;(4)NC足细胞组;(5)FABP3过表达足细胞组;(6)正常足细胞+棕榈酸(PA)组;(7)NC-siRNA足细胞+PA组;(8)FABP3-siRNA足细胞+PA组;(9)NC足细胞+PA组;(10)FABP3过表达足细胞+PA组。比色法测定细胞内TG和游离脂肪酸的含量。定量PCR法检测各组细胞中过氧化物酶增殖激活受体α(PPARα)、酰基辅酶A氧化酶3(ACOX3)mRNA的表达。Western Blot法检测PPARα、ACOX3蛋白表达水平。结果:与正常足细胞组相比,FABP3过表达足细胞组细胞内三酰甘油(TG)和游离脂肪酸水平增加(P<0.05),而FABP3-siRNA足细胞组TG和游离脂肪酸水平下降(P<0.05)。不论在正常环境还是PA环境下,与正常足细胞组相比,FABP3过表达足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达均下调(P<0.05),而ACOX3 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);FABP3-siRNA足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达均上调(P<0.05),而ACOX3 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。与FABP3过表达足细胞组相比,FABP3-siRNA足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达上调(P<0.05),ACOX3 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);加入PA后,FABP3过表达足细胞+PA组和FABP3-siRNA足细胞+PA组之间PPARαmRNA和蛋白表达、ACOX3 mRNA和蛋白表达统计学差异显著(P<0.01)。结论:FABP3过度增加可导致足细胞脂肪代谢紊乱,抑制FABP3过度增加可纠正足细胞脂肪代谢紊乱状态。该研究结果提示抑制FABP3表达可能对代谢因素如糖尿病、肥胖、高脂血症所致的足细胞损伤有一定防御和治疗作用。

油酸和硬脂酸对奶牛乳腺上皮细胞中脂肪酸结合蛋白3表达和脂滴分泌的影响

为确定外源添加长链脂肪酸油酸和硬脂酸对奶牛乳腺上皮细胞中脂肪酸结合蛋白3(FABP3)表达的影响,本试验采用荧光定量RT-PCR检测乳脂合成相关基因的表达情况,确定油酸和硬脂酸的最佳浓度和培养时间分别为75μmol/L 12h和100μmol/L 36h。采用Western blotting和免疫荧光法检测添加油酸和硬脂酸后FABP3表达和脂滴分泌的情况,为进一步揭示FABP3在乳脂合成信号转导通路中的作用提供理论依据。

脂肪酸结合蛋白3在乳脂合成信号转导通路中的研究进展

脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding protein 3,FABP3)是脂肪酸结合蛋白家族成员之一,广泛存在于心肌、骨骼肌和泌乳期乳腺等对脂肪酸有高度需求的组织中。它参与胞内脂肪酸的短暂存储和运输,使脂肪酸进入线粒体能量代谢体系,氧化分解并产生ATP,为组织提供能量。它与脂肪酸结合形成胞内外浓度差,促进细胞摄取脂肪酸。作者主要介绍了FABP3基因及蛋白质结构、生物学功能和临床应用,并对其在乳脂合成信号转导通路中的研究进展进行了综述。

脂肪酸结合蛋白3的基础与临床

脂肪酸结合蛋白3(FABP3)是分布最为广泛的脂肪酸结合蛋白。编码该蛋白的基因定位于染色体1p33-p32,由4个外显子和3个内含子组成;三级蛋白结构高度保守,形成折叠β桶(barrel)状。FABP3参与长链脂肪酸的摄取、转运及代谢调节,信号传递、基因转录以及细胞生长和增殖。已有研究表明,它作为重要的生物学标记,应用于临床多种疾病的诊断与评估,而编码该蛋白的基因多态性,与糖尿病和肿瘤等的发病关系密切。

脂肪酸结合蛋白3对缺氧后心肌细胞存活和凋亡的调节作用

目的·探讨脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding protein 3,FABP3)是否参与了缺氧后心肌细胞的存活及其可能的分子机制。方法·分离新生大鼠心肌细胞,使用重组人源FABP3刺激该细胞,利用锥虫蓝实验和MTT法检测缺氧状态下心肌细胞的存活和死亡情况;应用蛋白质印迹检测FABP3对凋亡相关蛋白PARP、caspase 3表达水平的影响;采用免疫荧光染色技术分析缺氧状态下细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位的变化。结果·使用重组人源FABP3刺激心肌细胞可显著增加心肌细胞的死亡数,缺氧后心肌细胞的存活率下降(P=0.021)。FABP3可上调cleaved PARP 和cleaved caspase 3的蛋白水平(P=0.006,P=0.002),增加细胞内ROS含量(P=0.038),同时降低线粒体膜电位(P=0.002)。结论·FABP3通过诱导细胞内ROS的产生和线粒体膜电位的降低,参与了缺氧后心肌细胞的存活和凋亡。

奶山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因启动子的克隆及活性分析

心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)是一种15 kDa的蛋白,涉及信号转导途径,参与长链脂肪酸的摄取及利用。本研究采用PCR技术扩增FABP3启动子序列,通过缺失分析构建了5个不同缺失片段荧光素酶报告基因载体,并转染奶山羊乳腺上皮细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测FABP3缺失片段启动子活性。结果表明:从奶山羊基因组中克隆得到2109 bp FABP3基因启动子序列(包括转录起始位点上游1985 bp),与牛(KJ649748.1)、猪(HM591296.1)和人(NG047049.1)的基因组序列同源性分别为90%、80%、75.08%。经转录因子在线软件预测分析发现,该启动子含有潜在的TATA框(TATA-box)、过氧化物酶增殖物激活受体反应元件(PPRE)、肝X受体反应元件(LXRE)、雌激素受体(ER)及两个环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的结合位点,分别位于-1632 bp和-189 bp。缺失突变研究发现,启动子片段-1801~+124活性最高,同时这一片段含有两个CREB结合位点,而当缺失至-80位点时,活性显著下降(P<0.05),且这一片段不包含CREB结合位点。表明CREB可能参与调控FABP3基因启动子的活性,为FABP3基因的转录调控研究提供理论依据。

心型脂肪酸结合蛋白对老年人全因死亡的预测价值

目的探索心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在老年人群全因死亡中的预测作用。方法纳入65岁以上不伴冠心病的老年体检人群568例,入组时均进行基线资料采集及血清H-FABP水平的测定,共随访7年,分析H-FABP与死亡及主要不良心血管事件之间的关系。结果随访期间,全因死亡31例,无心血管死亡,发生主要不良心血管事件33例。H-FABP对于全因死亡的预测效能高于尿素氮(BUN)、估算肾小球滤过率(eGFR)和血清白蛋白水平,并且H-FABP>3.57μg/L可能作为全因死亡的独立危险因素。生存分析结果显示越高的H-FABP水平意味着越高的死亡风险。结论H-FABP与老年人群的全因死亡相关。

SREBP1c-ACCα/FAS和SREBP1c-FABP3轴向调控HepG2胞内脂质合成与转运

SREBP1c是长链脂肪酸(LCFAs)从头合成及胞内转运的关键调控因子,探讨SREBP1c-ACCα/FAS和SREBP1c-FABPs轴向调控LCFAs合成与转运紊乱诱发NAFLD的分子机制。制备介导SREBP1c过表达腺病毒Ad-SREBP1c,侵染HepG2细胞后酶法测定胞内TG含量,RT-PCR及Western Blot法检测ACCα、FAS、FABP3和FABP4的表达量。结果显示:Ad-SREBP1c病毒滴度为1.6×10^(9)GFU/mL;侵染HepG2细胞24 h后介导SREBP1c mRNA及蛋白的表达量分别升高89.73倍和7.27倍(P<0.01),促进下游LCFAs合成基因ACCα和FAS分别升高1.55倍和3.42倍(P<0.01),蛋白表达量分别升高1.23倍(P<0.05)和1.43倍(P<0.01);FABP3 mRNA和蛋白表达量分别升高4.03和2.06倍(P<0.01),FABP4无显著变化;Ad-SREBP1c侵染HepG2细胞24 h和48 h胞内TG含量分别升高1.24倍(P<0.05)和2.41倍(P<0.01);SREBP1c-ACCα/FAS轴向调控LCFAs从头合成及SREBP1c-FABP3轴向介导胞内转运,可能是促使胞脂异位沉积导致NAFLD发生的关键机制之一。

冠心病患者ABCA1基因多态性及血清FABP3水平联合检测与冠状动脉血管病变的相关性研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette subfamily A member 1, ABCA1)基因多态性与血清脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding proteins 3, FABP3)联合检测在评估冠心病患者多支血管病变中的预测价值。方法选取2018年11月~2019年11月期间在北京大学深圳医院心内科住院治疗的237例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者作为研究对象,根据冠状动脉造影结果将其分为单支病变组101例和多支病变组136例,采用PCR方法检测患者ABCA1基因相应片段的多态性,采用单因素及多因素logistic回归分析筛选其独立危险因素,通过ROC曲线分析ABCA1基因多态性和FABP3对多支血管病变的预测价值。结果单因素分析发现,多支病变组患者血清FABP3水平高于单支病变组,差异具有统计学意义(P<0.05),而多支病变组患者ABCA1基因rs363717位点G的突变频率低于单支病变组,差异具有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析提示血清FABP3水平及ABCA1基因rs363717位点的A等位基因是冠心病的独立危险因素。结论 ABCA1基因rs363717位点检测联合血清FABP3对冠状动脉多支血管病变具有较高的阳性预测价值,多支血管病变与rs363717位点多态性及血清FABP3水平密切相关。

牛FABP3转基因小鼠的遗传及表达特性研究

旨在研究和分析牛FABP3基因在小鼠体内遗传和表达特性,对培育优质高产转基因肉牛新品种具有重要意义。本研究利用前期获得的4只FABP3转基因小鼠,通过制定的4组交配方案获得子代小鼠,并利用PCR、实时荧光定量PCR和组织原位表达技术对转基因牛FABP3基因小鼠的子代遗传特征,以及FABP3基因在G0代和G1代小鼠心、肝、肾、骨骼肌组织的表达情况进行了检测。RT-PCR检测结果表明,在G0代转基因小鼠中,牛FABP3基因能够表达;牛FABP3基因在转基因小鼠中可以遗传,G1代转基因小鼠平均阳性率达68.4%;相对定量PCR结果表明,转基因小鼠总FABP3基因在G1代小鼠心肌和骨骼肌中表达量相对于阴性个体有不同程度的增加;组织原位检测表明,在G0代个体中表达量较高,G1代个体中虽能看到绿色荧光,但略有降低。本研究表明,牛FABP3基因存在于小鼠基因组中,并能够被表达,且可以遗传给后代,这为后期进一步研究牛FABP3基因对小鼠骨骼肌脂肪含量的影响奠定坚实基础。

自拟益气温阳方治疗慢性心力衰竭的疗效及对心肌型脂肪酸结合蛋白的影响

目的观察自拟益气温阳方治疗慢性心力衰竭的临床疗效及对心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的影响。方法 88例慢性心力衰竭患者随机分为对照组和观察组各44例,对照组予西医常规对症支持治疗,观察组加服自拟益气温阳方,1个月为一疗程。行彩色超声多普勒检测左室收缩末期内径(LVEDD)、左室舒张末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF),检测脑自然肽氨基端前体蛋白(NT-proBNP)和H-FABP,比较临床疗效,记录不良反应。结果观察组临床疗效总有效率为86.4%,明显高于对照组的61.4%(P<0.05)。治疗后,两组LVEDD、LVESD、NT-proBNP、H-FABP降低,LVEF、6分钟步行距离(6MWT)增加(P<0.05);组间比较,观察组治疗后以上各指标均优于对照组(P<0.05)。两组均无明显不良反应出现。结论自拟益气温阳方治疗心气不足、阳虚水泛型慢性心力衰竭疗效肯定且安全性好,值得推广。

猪脂肪性状相关基因编码细胞因子IL-6和TNF的多态性分析

猪肥胖是一种多基因性状,其基因变异的研究鲜有报道。目前已发现的肥胖候选基因有3个,其中2个编码细胞因子如白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF),另外一个基因编码心脏脂肪酸结合蛋白(FABP3)。试验选取波兰大白猪191头,波兰长白猪239头,杂交系242头,均为经产母猪。结果检测到4个SNPs,其中3个为g.61T>C(GenBank登录号:EF450127)、g.6464C>T(GenBank登录号:X54859)、g.701T>C(GenBank登录号:X98558),分别位于IL-6、TNF、FABP3基因的启动子区;另外一个g.8653A>G(GenBank登录号:X54859)位于TNF基因的外显子4上。对体重约100kg经产母猪进行解剖,分析腹脂重、7个点的背膘厚、瘦肉率、肌内脂肪含量(IMF)、3日平均增重、饲料转化率等12个指标。结果发现,体脂性状与IL-6(g.61T>C,0.006≤P≤0.009)和TNF(g.6464C>T,0.002≤P≤0.005)启动子区SNPs间有相关性。本研究结果与IL-6和TNF的多态性与猪的肥胖变异间存在相关性的结论相一致。

血清NT-proBNP、H-FABP、VEGF-B对冠心病病情及心功能的预测价值

[目的]探讨N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、血管内皮生长因子-B(V EG F-B)预测冠心病病情及心功能的价值.[方法]选择两院收治的87例冠心病患者作为观察组,80例健康体检者作为对照组.比较观察组治疗前后及与对照组的NT-proBNP、H-FABP、VEGF-B水平,左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、心脏指数(CI)的差异,并分析观察组患者治疗前后的美国纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级变化.[结果]对照组的NT-proBNP、H-FABP、VEGF-B水平显著低于观察组治疗前及治疗后(P<0.05);观察组患者治疗后的NT-proBNP、H-FABP、VEGF-B水平显著低于治疗前(P<0.05).对照组的LVEDV、LVESV、LVEF水平显著高于观察组治疗前和治疗后(P<0.05);观察组治疗后的LVEDV、LVESV、LVEF水平显著高于治疗前(P<0.05);对照组的CO、CI显著高于观察组治疗前(P<0.05),观察组治疗后的CO显著高于治疗前(P<0.05).对照组与观察组治疗后的CO、CI水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).观察组患者治疗后的心功能级别显著高于治疗前(P<0.05).[结论]NT-proBNP、H-FABP、VEGF-B水平的变化可预测冠心病患者病情严重程度.

FABP3基因荧光载体构建及其蛋白的亚细胞定位

目的构建脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的荧光表达载体FABP3-pEGFP-N2,并应用绿荧光融合蛋白技术检测FABP3蛋白的亚细胞定位。方法 RT-PCR法获得FABP3基因编码框,克隆到pEGFP-N2载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染P19细胞后,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞内FABP3蛋白定位。结果成功克隆FABP3基因片段,并将其重组到pEGFP-N2载体中。荧光显微镜和激光共聚焦显微镜显示,FABP3蛋白主要分布于P19细胞的胞浆和胞核中。结论成功构建了FABP3-pEGFP-N2真核表达载体,FABP3在P19细胞的胞浆和胞核中呈弥漫分布特点。

FABP3过表达对斑马鱼ROS和线粒体ATP含量的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白3(FABP3)过表达对斑马鱼胚胎活性氧(ROS)及线粒体ATP含量的影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼作为空白对照(C组)。收集受精后24、48hpf斑马鱼胚胎,采用流式细胞术和化学发光法分别检测斑马鱼ROS和ATP含量。结果与C组相比,A组24hpf时斑马鱼ROS水平降低,ATP含量增加(P<0.05);而在48hpf时,两组间斑马鱼ROS水平和ATP含量无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼线粒体功能起保护作用。

FABP3对P19细胞增殖的影响及其生物信息学分析

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因过表达对P19细胞分化、增殖的影响及FABP3基因的生物信息学特征。方法构建FABP3过表达载体及相应的空载体,转染P19细胞,经0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化为心肌细胞,定量PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)和转录调控因子GATA4基因的表达,MTT法检测P19细胞增殖,应用在线数据库软件分析FABP3的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亚细胞定位等。结果与空载体相比,FABP3基因过表达能抑制cTnT、GATA4 mRNA表达及P19细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。生物信息学分析显示,FABP3基因mRNA全长1097 bp,开放阅读框长402 bp,编码133个氨基酸,相对分子质量为14 858 Da,蛋白主要位于胞浆。结论 FABP3基因过表达显著抑制心肌细胞分化、增殖,生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。

血清FABP3水平与冠状动脉病变及阿司匹林抵抗的关系

目的:测定冠心病患者血清脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding protein 3,FABP3)水平,探讨FABP3与冠心病患者冠状动脉(冠脉)病变严重程度及阿司匹林抵抗的关系。方法:选取2017-06-2017-12成都军区总医院心内科住院部患者80例,其中冠心病患者43例和对照组患者37例,根据病变支数分为单支病变、多支病变组;根据阿司匹林抵抗标准将冠心病患者分为阿司匹林敏感组和阿司匹林非敏感组。根据采用液相蛋白芯片检测血清FABP3水平,同时检测空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂各项指标。结果:冠心病组血清FABP3水平高于对照组,多支病变组较单支病变组FABP3水平升高(P<0.05)。阿司匹林敏感组血清FABP3水平显著高于阿司匹林非敏感组(P<0.01)。结论:血清FABP3水平一定程度上可反映冠脉病变严重程度。冠心病患者阿司匹林抵抗发生与FABP3水平密切相关。

FABP3过表达对斑马鱼胚胎心脏发育及线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育形态及线粒体DNA拷贝数影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼胚胎作为空白对照(C组)。收集受精后12、24、48、72hpf斑马鱼胚胎,利用体式显微镜观察其发育情况,并统计其死亡率;RT-PCR技术检测胚胎线粒体DNA拷贝数。结果 A组斑马鱼心脏在12、24、48、72hpf各时间点发育大体形态、死亡率与C组比较均无明显差异。A组24hpf时斑马鱼线粒体DNA的拷贝数高于C组(P<0.05);而在48、72hpf时,两组间斑马鱼线粒体DNA拷贝数无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育的形态无明显影响,对线粒体功能起保护作用。

FCCP对FABP3基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响

目的探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)对脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响。方法构建FABP3表达沉默载体(A组)及相应的空载体(B组),包装病毒后感染P19细胞,建立稳定转染FABP3沉默的P19细胞株,采用实时定量PCR检测干扰效率。给予FCCP 2.5μmol/L(C组)、5μmol/L(D组)干预FABP3沉默的P19细胞,采用荧光素酶化学发光法检测细胞ATP含量,流式细胞术观察线粒体膜电位的变化。结果 B组FABP3基因表达量较A组下调(0.50±0.08vs.2.23±0.42)(P<0.05)。与A、B组相比,C、D组细胞ATP生成减少(2.47±0.58、1.05±0.13vs.0.09±0.03、0.12±0.02)(P<0.05),而细胞线粒体膜电位升高(358.36±12.23、389.66±12.13vs.437.35±9.27、473.21±19.65)(P<0.05)。结论FABP3基因在维持P19细胞线粒体功能中发挥重要作用。

黔北麻羊FABP3基因多态性及其与生长性状的相关性研究

旨在探究脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因在黔北麻羊中的遗传多态性,进一步揭示FABP3基因与黔北麻羊生长性状间的关联性,为今后运用分子标记辅助育种方法提高黔北麻羊的生长性状提供理论依据。本研究以120只6月龄黔北麻羊为试验对象,采用PCR产物直接测序技术检测FABP3基因全部外显子区的遗传多态性,并与体重、体高、体斜长、胸围、管围等生长性状进行关联性分析。结果:在黔北麻羊FABP3基因第5外显子和3′非翻译区筛选出2个SNPs位点,分别为g.13665051C>T和g.13664737G>A,其中g.13665051C>T位点为同义突变,产生3种基因型:CC、CT和TT,g.13664737G>A位点产生3种基因型:GG、AG和AA,卡方(χ^(2))检验结果显示,这2个SNPs位点处于中度多态且在黔北麻羊群体中均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。关联分析显示,g.13665051C>T位点中CT基因型个体的体高、体斜长、胸宽和管围显著高于CC和TT基因型个体(P<0.05);CT基因型个体的胸深、胸围显著高于TT基因型个体(P<0.05),g.13664737G>A位点中不同基因型的生长性状指标均未达到差异显著(P>0.05)。因此,推测黔北麻羊FABP3基因外显子5的g.13665051C>T突变位点可能是影响个体生长性状的重要位点。