肝核受体激动剂T0901317对大鼠骨骼肌细胞脂肪酸转运酶基因表达影响的实验研究

目的探讨肝核受体(LXRs)激动剂T0901317对正常SD大鼠骨骼肌细胞中脂肪酸较运酶(FAT/CD36)基因mRNA表达的影响。方法将原代培养的5只SD大鼠骨骼肌细胞分为T0901317 1μmol/L作用组、0.5μmol/L作用组和未作用(阴性对照)组,采用SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组SD大鼠骨骼肌细胞FAT/CD36基因mRNA表达水平,并进行比较分析。结果1μmol/L、0.5μmol/L作用组与阴性对照组比较,差异无显著性意义(P=0.116)。结论LXRs激动剂T0901317对SD大鼠骨骼肌细胞中FAT/CD36基因mRNA的表达水平没有明显作用,提示T0901317在促进SD大鼠骨骼肌细胞内脂肪酸的堆积作用尚无确切的证据。

黄芪多糖对糖尿病大鼠血游离脂肪酸水平的影响及其机制

目的 探讨黄芪多糖对糖尿病大鼠血游离脂肪酸水平的影响及其机制.方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠40只,完全随机分成4组,每组10只：空白对照组、糖尿病组[高热量饮食＋小剂量链脲佐霉素（35 mg/kg）尾静脉注射后糖尿病造模成功继续高热量饮食]、黄芪多糖对照组[黄芪多糖400 mg/（kg·d）灌胃]和黄芪多糖干预组[糖尿病造模成功＋高热量饮食＋黄芪多糖400 mg/（kg·d）灌胃].给药5周后观察动物一般情况,检测血糖、血清游离脂肪酸和胰岛素水平.取肝脏组织,采用蛋白质印迹法测各组磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、总腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、细胞膜脂肪酸转运酶/CD36（FAT/CD36）、肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）蛋白表达水平.结果 糖尿病组动物血清游离脂肪酸、血糖水平及体质量明显高于空白对照组、黄芪多糖对照组与黄芪多糖干预组[分别为（0.54 ±0.13） mmol/L比（0.24±0.12）、（0.22 ±0.10）、（0.35±0.11） mmol/L,（20.5±3.2） mmol/L比（7.0±0.7）、（7.3±0.5）、（11.1±2.3）mmol/L,（223 ±3）g比（202 ±4）、（201 ±3）、（205 ±3）g,均P＜0.05].黄芪多糖干预组血清游离脂肪酸和血糖水平低于糖尿病组（P＜0.05）,而各组胰岛素水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）.糖尿病组动物肝脏p-AMPK、CPT1、细胞膜脂肪酸转运酶FAT/CD36蛋白表达明显低于其他3组（P＜0.05）.而各组总AMPK及FAT/CD36表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 黄芪多糖可以通过非胰岛素途径活化AMPK降低糖尿病大鼠游离脂肪酸水平,改善胰岛素抵抗.

西罗莫司抑制脂肪酸摄取改善小鼠肝脏脂质积聚

目的:研究西罗莫司对小鼠肝脏脂质积聚的影响及机制初探。方法:6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为3组:A组为普通饮食组(n=12),B组为高脂饮食组(n=9),C组为高脂饮食加隔天注射西罗莫司组(n=7),喂养14周。全自动生化分析仪检测血清生化指标。酶联免疫吸附法和酶偶联比色法分别检测肝脏游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)和甘油三酯(triglyceride,TG)的含量。Western blot检测脂肪酸转运酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)蛋白的表达水平。荧光显微镜观察原代肝细胞对荧光标记FFA的动态摄取。结果:与A组相比,B组小鼠体质量(q=6.68,P=0.000),血清TG(q=4.88,P=0.045),高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)(q=6.311,P=0.002),谷草转氨酶(aspirate aminotransferase,AST)(q=8.84,P=0.001)水平明显增高,肝脏组织TG(q=14.4,P=0.000),FFA(q=18.0,P=0.000)也明显增高。C组小鼠较B组体质量(q=7.99,P=0.000),血清TG(q=4.636,P=0.050),AST(q=5.16,P=0.016)及肝脏TG(q=8.91,P=0.000)和FFA(q=14.1,P=0.000)都显著降低。Western blot结果显示C组小鼠肝脏CD36的蛋白表达水平较B组明显降低。FFA动态摄取实验通过定量荧光强度显示西罗莫司能明显抑制肝细胞对FFA的摄取速度(各时间点P均<0.05)。结论:西罗莫司能抑制肝细胞对外源性FFA的摄取,减轻肝脏脂质积聚,其作用机制可能与CD36相关。

FAT/CD36在高脂喂养小鼠脂肪组织炎症中的作用

目的:探讨脂肪酸转运酶/白细胞分化抗原36(fatty acid translocase/CD36,FAT/CD36)在高脂饮食诱导的小鼠脂肪组织炎症中的作用。方法:将6周龄雄性C57BL/6J小鼠分别随机分为普通饮食组和高脂饮食组,喂养14周后,ELISA测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,应用荧光实时定量PCR和Western blotting检测脂肪组织中FAT/CD36及炎症/趋化因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1)mRNA和蛋白的表达,免疫组织化学染色检测脂肪组织巨噬细胞浸润,比较高脂喂养14周的野生型小鼠和CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症反应情况。结果:与普通饮食组相比,高脂饮食能增强C57BL/6J小鼠脂肪组织的FAT/CD36及炎症/趋化因子的表达,促进巨噬细胞在脂肪组织的浸润。与高脂饮食喂养的野生型小鼠相比,CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症因子、趋化因子表达明显降低,脂肪组织巨噬细胞浸润减少。结论:高脂饮食通过上调脂肪组织FAT/CD36的表达激活了脂肪组织炎症。

肾脏细胞CD36在炎症因子诱导的脂肪酸摄取及脂质沉积中的作用

慢性炎症和脂质代谢紊乱是慢性肾病的重要特征,炎症因子影响肾脏细胞脂质代谢的作用机制尚不清楚,该研究旨在探讨炎症因子是否通过上调脂肪酸转运酶CD36的表达促进肾脏细胞脂肪酸摄取及脂质沉积。通过给予HMCs及HK2细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素6(interleukin-6,IL-6)刺激处理24 h,应用qRT-PCR检测CD36的表达量,酶法检测HK2细胞内的甘油三酯(triglycercide,TG)水平。构建CD36过表达的细胞模型,使用荧光标记脂肪酸,观测细胞对外源性脂肪酸的摄取速率。然后利用小RNA干扰技术,构建CD36低表达的细胞模型,检测CD36低表达时细胞脂肪酸摄取速率及胞内甘油三酯、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量,葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及内质网跨膜激酶(IRE1)的m RNA表达量。结果显示,炎性因子TNF-α和IL-6促进HMCs及HK2细胞TG的累积增加,并刺激细胞CD36的表达;CD36过表达促进HMCs及HK2细胞对FFA的摄取。当CD36表达被干扰后,炎性因子诱导的肾脏细胞TG及FFA的累积增加、FFA的摄取速率、细胞内GRP78、IRE-1的m RNA表达量及ROS含量均受到了抑制。该项研究表明,在HMCs及HK2细胞中,炎症因子可能通过促进CD36表达,导致细胞对FFA摄取增多,进而引起细胞脂质积聚;干预CD36能够改善炎性因子引起的脂质积聚、内质网应激以及细胞损伤,提示CD36可作为慢性肾脏疾病的潜在治疗靶点。

Roles of Long-chain Acyl Coenzyme A Synthetase in Absorption and Transport of Fatty Acid

Long-chain acyl coenzyme A synthetase(ACSL) is a member of the synthetase family encoded by a multigene family;it plays an important role in the absorption and transport of fatty acid.Here we review the roles of ACSL in the regulating absorption and transport of fatty acid,as well as the connection between ACSL and some metabolic diseases.