脂肪间充质干细胞膜片移植促进创面愈合的可行性

背景:脂肪间充质干细胞因其能旁分泌多种生长因子、获取方便、具有免疫调节等作用,常被用于组织修复和功能重建。食管内镜黏膜下剥离后狭窄的预防和治疗是困扰医生和患者的难题。脂肪间充质干细胞结合新型组织工程技术——细胞膜片,具有促进创面修复、预防食管狭窄发生的潜能和应用价值。目的:探讨脂肪间充质干细胞膜片的生物学特征,分析其预防食管内镜黏膜下剥离后狭窄的可行性。方法:(1)将使用温度敏感培养皿制备的绿色荧光蛋白标记的脂肪间充质干细胞膜片设为实验组,常规贴壁脂肪间充质干细胞为对照组,通过ELISA、反转录实时PCR及Western blot比较2组血管内皮生长因子、转化生长因子β1、肝细胞生长因子含量;(2)取裸鼠制备皮肤人工溃疡,随机分为贴膜组与模型组,贴膜组立即在皮肤创面处贴附绿色荧光蛋白标记的脂肪间充质干细胞膜片。结果与结论:(1)脂肪间充质干细胞膜片中细胞含量较高,细胞外基质丰富,细胞与细胞之间连接存在;膜片组血管内皮生长因子、转化生长因子β1、肝细胞生长因子表达水平均高于对照组;(2)裸鼠背部脂肪间充质干细胞膜片移植成功,且贴膜组愈合速度快于模型组;(3)实验结果提示脂肪间充质干细胞结合细胞膜片技术预防食管内镜黏膜下剥离后狭窄具有可行性,但仍需大量的基础及临床研究进一步证实。

大鼠脂肪间充质干细胞膜片的生物学特点研究

目的:探讨利用大鼠脂肪间充质干细胞体外构建细胞膜片方法,并分析细胞膜片的生物学特点。方法:从出生7d大鼠体内提取脂肪组织并获得纯化的脂肪间充质干细胞(ADSCs,adipose-derived mesenchymal stem cell),将ADSCs体外构建细胞膜片,待膜片成熟后采用倒置显微镜和HE染色对膜片进行形态学检测,实时定量PCR检测细胞COL-1、FN、FGF、VEGF的基因表达水平,Western Blot检测COL-1、FN、FGF、VEGF的蛋白表达情况。结果:纯化的ADSCs体外诱导培养10d后获得白色膜状细胞膜片,镜下观察见细胞复层生长,染色显示细胞间紧密连接并分泌大量细胞外基质(ECM,extracellular matrix)。Real Time-PCR结果表明细胞膜片组COL-1、FN、FGF、VEGF mRNA表达水平高于正常培养的ADSCs组。Western Blot蛋白学检测与基因检测趋势一致。结论:体外培养大鼠脂肪间充质干细胞能构建细胞膜片,膜片的COL-1、FN、FGF、VEGF表达水平显著高于对照组。

脂肪间充质干细胞双向诱导上皮/平滑肌细胞膜片修复兔尿道缺损

目的探究利用脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)向上皮/平滑肌细胞诱导培养细胞膜片重建兔缺损尿道的可行性和效果。方法将18只2~3月龄雄性新西兰兔随机分成ADSCs诱导复合膜片仿生尿道组和单纯无细胞SIS对照组,每组各9只。原代提取ADSCs体外扩增向上皮细胞和平滑肌细胞诱导并在UpCell培养皿中培养成上皮细胞膜片和平滑肌细胞膜片,两种细胞膜片叠加包裹8F医用硅胶管制备长2 cm复合仿生尿道置皮下脂肪培养3周后取出。建立新西兰兔长段(2 cm)尿道缺损模型,分别将ADSCs诱导复合细胞仿生尿道、单纯无细胞SIS仿生材料置于兔尿道缺损部位行全段端端吻合术修复重构尿道,术后14 d移去8F医用硅胶管,分别于术后1、6个月进行尿道造影、大体观察和组织学观察,进行尿道重构效果评估。结果1个月后,尿道造影显示无细胞SIS材料组存在不同程度的尿道管腔狭窄,有明显的瘢痕增生和挛缩,而ADSCs诱导复合细胞仿生尿道组可保持通畅,黏膜平整,与正常尿道黏膜界限不清。ADSCs诱导复合细胞仿生尿道7只正常排尿畅通,2只出现尿瘘,无细胞SIS材料组4只正常排尿,3只尿道狭窄,2只出现尿瘘。组织学观察发现,6个月后ADSCs诱导复合膜片仿生尿道修复段已形成稳定的上皮细胞层多层组织结构,细胞层下可见明显的毛细血管样结构形成。结论ADSCs诱导双复合膜片仿生尿道可修复兔长段(2 cm)尿道缺损的重构。

兔脂肪间充质干细胞膜片促进关节软骨损伤修复

[目的]探讨兔脂肪间充质干细胞膜片对兔关节软骨损伤的修复作用。[方法]体外分离培养兔脂肪间充质干细胞,通过多系分化对细胞进行鉴定。通过化学方法构建兔脂肪间充质干细胞膜片(添加50μg/ml抗坏血酸),膜片构建成功后对其进行检测:分别在倒置相差显微镜下观察膜片的结构,大体观以及扫描电镜观察。制备兔膝关节骨软骨缺损模型(直径为3.5mm,深度为3 mm),然后将实验分为两组:对照组和细胞膜片组。术后3个月取标本进行检测,观察软骨的修复情况。[结果]原代兔脂肪间充质干细胞呈短梭形、三角形贴壁生长,经过传代培养后细胞逐渐呈涡旋状生长,第3代兔脂肪间充质干细胞具有多系分化能力;兔脂肪间充质干细胞膜片具有多层结构,细胞分泌大量的细胞外基质,将细胞镶嵌在其中。术后3个月取标本观察检测提示:细胞膜片组骨软骨缺损处可见大量新生的软骨组织再生,新生的软骨组织形态和颜色均接近于正常软骨;而对照组几乎没有新生软骨的形成。O’Driscoll评分结果也显示细胞膜片组的评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]兔脂肪间充质干细胞膜片能够促进兔关节软骨的再生,为临床软骨损伤的修复提供了新的思路。

牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好早期成骨效果:基于动物模型研究

目的评估牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架的骨缺损再生修复效果。方法培养牙槽骨骨髓间充质干细胞(Al-BMSCs)膜片和长骨骨髓间充质干细胞(Lon-BMSCs)膜片,熔融沉积成型技术制作PCL/HA支架。取新西兰大白兔共9只,建立双侧下颌骨缺损模型,按植入材料将其分为PCL/HA支架组(A组)、Lon-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(B组)、Al-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(C组),3组共得到18个样本,6个/组。术后4周处死动物,取下颌骨组织,行大体观察、锥形束CT分析、HE染色和Masson染色,对各组成骨情况进行分析。结果锥形束CT结果显示C组骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于A组和B组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。HE和Masson染色显示C组成骨最为活跃,有较多的新生骨和血管形成。结论牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好的早期成骨效果,为颌面部骨缺损再生修复提供了一种新的策略。

Wnt信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞膜片成软骨响应中的作用

目的:研究经典(Wnt/β-catenin,Wnt)信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)膜片成软骨响应中的作用。方法:体外分离、培养兔BMSCs,经鉴定后用含有抗坏血酸的培养基构建BMSCs细胞膜片,并将其随机分2组;对照组在常规条件下培养4 d,实验组施以120 KPa静态压力,1 h/d、连续4 d。然后通过Western Blot检测经典Wnt信号通路相关蛋白的表达水平;Real-time PCR检测Wnt信号通路相关基因和成软骨基因的表达水平。结果:兔BMSCs传代后生长状态稳定,呈梭形;成骨成脂分化诱导实验结果阳性;Western Blot检测显示,实验组β-catenin和p-GSK3β蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05);Real-time PCR检测显示,实验组经典Wnt信号通路相关基因β-catenin、p-GSK3βmRNA以及成软骨相关基因Col-Ⅱ、Sox-9、Aggrecan mRNA的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路介导兔BMSCs膜片在一定的压力刺激下的成软骨响应过程。

骨髓间充质干细胞膜片复合磷酸三钙陶瓷构建工程化骨组织的体内成骨研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合磷酸三钙支架材料构建组织工程骨的可行性。方法:将兔骨髓间充质干细胞高密度接种于普通培养皿,在成骨诱导条件下连续培养2周,获得细胞膜片,修剪成长方形,并由一端卷起包裹圆柱状的磷酸三钙材料。静置孵育24h后将构建物移植到裸鼠背部皮下。术后6周取材,进行大体观察、组织学检查、组织定量学分析。结果:所获骨髓间充质干细胞膜片有多层细胞组成,保留了细胞外基质。实验组在材料表面及其孔隙内有较多的骨质形成;单一材料组空隙内为纤维组织,未见骨或软骨样组织;单一膜片组见片状编织骨形成。结论:骨髓间充质干细胞膜片在体内具有良好的成骨能力,可作为细胞释放载体与磷酸三钙支架复合构建骨组织。本研究为骨组织工程构建提供了新的方法。

脂肪间充质干细胞膜片的构建及其组织学特征

研究探讨脂肪间充质干细胞膜片构建条件及组织学特征。方法:取脂肪组织,酶消化法获取细胞,取生长状态良好的第3代贴壁成长的细胞,分别行细胞成脂、成骨诱导分化并鉴定,免疫荧光染色法检测hADSCs表面蛋白,细胞增殖实验检测细胞的增殖能力。配制抗坏血酸浓度为0(g/ml、25(g/ml、50(g/ml、75(g/ml、100(g/ml的成膜培养基,培养脂肪间充质干细胞膜片,将培养成功的单层脂肪间充质干细胞膜片折叠,形成多层肪间充质干细胞膜片,再培养48h,HE染色观察细胞膜片的组织学特征,测量细胞膜片厚度。结果:(1)成功分离细胞并培养,第三代贴壁生长的细胞经免疫荧光染色法检测hADSCs表面标记蛋白,表达CD44、CD90、CD105,不表达CD34,经成脂、成骨诱导并鉴定后,细胞具有向脂肪细胞、骨细胞分化的能力,可确认细胞为脂肪间充质干细胞。经细胞增实验,绘制细胞增殖曲线呈“S”形。(2)成功培养单层脂肪间充质干细胞膜片,抗坏血酸浓度为50(g/ml的成膜培养基形成脂肪间充质干细胞膜片效果更佳,细胞培养第14天于培养板底部可见一层透明白色膜状物,第18天细胞膜片边缘可见褶皱,21天细胞膜片边缘翘起浮于培养基中,具有弹性。HE染色可见细胞膜片均匀,细胞核蓝染,细胞边界不清晰,细胞之间存在大量细胞外基质。ADSCs-CS折叠、培养48h后,细胞膜片仍保持弹性,HE染色后2层、4层细胞膜片均未见细胞坏死。结论:抗坏血酸能促进细胞膜片形成,其浓度为50(g/ml时,效果较好。多层细胞膜片各层之间存在紧密连接,各层细胞膜片未融合。

骨髓间充质干细胞膜片复合珊瑚支架构建管状组织工程骨的实验研究

目的:应用细胞膜片复合管状珊瑚材料,移植自体体内,构建具备特定形态的组织工程骨。方法:构建兔来源骨髓间充质干细胞膜片,与珊瑚支架复合,静置孵育24h后,移植动物自体背部皮下,以单纯珊瑚植入作对照组。术后4周、8周分别取材,行大体观察、扫描电镜及组织学分析其成骨能力。结果:体内培养4周和8周后,证实实验组有新骨形成;而单纯材料组空隙内为纤维组织,未见骨样组织。结论:骨髓间充质干细胞膜片与珊瑚支架材料复合,在自体体内可构建管状组织工程骨。

骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究

目的:探索骨髓间充质干细胞膜片的体外构建简便方法,并评估其成骨分化潜能。方法:将兔骨髓间充质干细胞高密度接种,在成骨诱导条件下连续培养形成细胞膜片。通过组织学、碱性磷酸酶活性定量检测、透射电镜和扫描电镜等方法,检测细胞膜片的特性。结果:高密度连续培养及成骨诱导后形成骨髓间充质干细胞膜片。HE染色证实膜片是一种由多层细胞和细胞外基质组成的聚集体;茜素红染色呈阳性;碱性磷酸酶定量分析含量较高;扫描电镜及透射电镜检查均见基质中大量的矿化结节聚集。结论:通过体外简单的连续培养和成骨诱导后,可形成具有良好成骨能力的骨髓间充质干细胞膜片。

可注射间充质干细胞膜片修复兔颅骨极限缺损的实验研究

目的:评价使用可注射骨髓间充质干细胞(marrow stromal cells,MSCs)膜片修复兔颅骨极限缺损的成骨能力。方法:将体外分离培养扩增的兔MSCs,使用成骨诱导培养液连续培养2周,形成细胞膜片。采用16只大白兔构建兔颅骨极限缺损模型,随机分为两组,每组8只。实验组,颅骨缺损处注射MSCs膜片;对照组,颅骨缺损处不植入任何材料,分别于术后8周和l2周取材,通过大体观察、X线摄片及组织学检查分析其修复颅骨缺损的效果。结果:体外构建的MSCs膜片为细胞-细胞外基质聚合体,茜素红染色见膜片中细胞外基质内有钙化结节沉积,扫描电镜可见膜片内丰富的胶原纤维和矿化结节聚集。细胞膜片植入兔颅骨缺损,8周时形成组织工程骨,12周时缺损得到完全的骨修复,而对照组仅见纤维组织形成。结论:成骨性MSCs膜片具有良好的骨修复能力。

大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建及其特性

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建和基本生物学特性。方法:从GFP-SD荧光大鼠体内提取原代骨髓并培养骨髓间充质干细胞(BMMSCs),鉴定后用于体外构建BMMSCs细胞膜片,用荧光显微镜、倒置显微镜和HE染色对膜片进行形态学检测,并提取膜片RNA用于RT-PCR实验,检测相关促愈合因子的表达情况。结果:BMMSCs成功分离、培养和鉴定。体外诱导培养2周后获得白色膜状细胞膜片,并可用机械力刮下。显微观察显示细胞呈长梭形重叠生长,染色显示细胞间紧密连接并分泌大量细胞外基质(ECM)。RT-PCR结果显示,膜片细胞与正常培养的BMMSCs相比,高表达TGF-β、FGF、VEGF和ColⅠ等细胞因子和蛋白,但在诱导1周和2周时的表达量无显著差异。结论:本方法能够较为稳定的在体外构建BMMSCs膜片,该膜片显著高表达TGF-β等促愈合因子。

牙龈间充质干细胞与牙周膜干细胞膜片牙周再生能力的实验研究

目的对比牙龈间充质干细胞(GMSCs)与牙周膜干细胞(PDLSCs)膜片的牙周再生能力。方法制备能够稳定表达增强绿色荧光蛋白(eGFP)的GMSCs和PDLSCs膜片及雄性比格犬牙周炎Ⅲ度根分叉病变模型4只(均选择双侧下全面第2、3、4前磨牙作为手术牙位制备模型),分别将GMSCs、PDLSCs膜片移植入模型作为GMSCs组和PDLSCs组,不植入膜片作为空白对照组。8周后处死动物,评价2种膜片对牙周缺损的修复能力。结果 HE染色组织形态学分析、免疫组织化学分析、天狼星红染色结果均显示GMSCs和PDLSCs能够有效促进牙周组织再生,效果明显好于空白对照组(P<0.05)。但2种膜片再生能力对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GMSCs与PDLSCs膜片均具备良好的牙周再生能力。

骨髓间充质干细胞膜片技术及应用的研究进展

骨髓间充质干细胞易于获得,贴壁生长,具备优良的成膜特性,是现代组织工程学中理想的种子细胞。由于具有良好的分化能力,骨髓间充质干细胞膜片被广泛地应用于组织再生工程。常用的骨髓间充质干细胞膜片包括单层细胞膜片、共培养细胞膜片、多层细胞膜片、三维培养细胞膜片、细胞膜片片段等。本文就近年来利用骨髓间充质干细胞构建细胞膜片的方法及其应用做如下综述。

TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞膜片成软骨分化

目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masson染色观察细胞形态、大体结构及组织学改变,阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色和RT-qPCR检测成软骨标志物ColⅡ和蛋白聚糖(PG)的mRNA表达及蛋白合成情况。结果:TGF-β3诱导成软骨分化14 d,镜下间充质干细胞生长良好,可用镊子钳夹起膜片状结构,可卷缩成团再展开成膜。HE染色显示细胞质及细胞外基质成分均被染成粉红色,其胞核为蓝色,细胞间呈分层状排列结构。Masson染色可见胞核染成蓝黑色,其细胞质染成粉红色,周围包绕着大量染成蓝色的胶原成分。阿利新蓝染色与ColⅡ免疫组化染色均为阳性,对照组阴性。实验组高表达软骨细胞特异性ColⅡ和PG的mRNA(P<0.05)。结论:抗坏血酸诱导构建的干细胞膜片经TGF-β3诱导,能成功向软骨分化及构建软骨细胞膜片。

骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的体内成骨

背景:马鹿角粉是一种生物相容性及机械性能良好的组织工程骨材料。采用细胞膜片技术、3D打印技术构建组织工程骨,可实现极限骨缺损的个性化治疗。目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇骨支架修复羊下颌骨极限缺损的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培养羊骨髓间充质干细胞,采用细胞膜片技术及3D打印技术构建骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨。取12只新疆阿勒泰大尾羊,随机分为术后1,2,3个月组,每组4只,于双侧下颌骨制备20 mm×3 mm×5 mm骨缺损,每组2只羊一侧植入细胞膜片复合3D打印鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵,每组另外2只羊,一侧植入细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵。植入1,2,3个月末处死实验动物,取下颌骨标本进行大体观察、锥形束CT、组织学观察及RT-PCR检测相关成骨指标。结果与结论:①锥形束CT观察:第1,2个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区呈稀薄云雾状,支架吸收较多,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组吸收相对较少;第3个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组有大量的新骨形成,密度接近周围骨质,但细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区未长满,骨密度较低。细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显,均没有新骨生成;②组织学观察:第3个月末,与其他两组相比,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组支架材料吸收较多,可见骨小梁排列规则及成熟板状骨,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组也有少量新骨形成,细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显;③RT-PCR检测:细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA表达水平均高于其他两组,在第3个月时成骨基因的表达量达到最高;④结果表明,骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨能够修复羊下颌骨极限骨缺损,可满足羊颌骨实验性缺损的修复重建。

碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨及成血管分化

背景:目前,细胞膜片技术已被推广应用于牙周膜、角膜、心脏、软骨、食管等多种组织器官修复。现阶段碱性成纤维生长因子对骨髓间充质干细胞膜片增殖、成骨分化的影响和作用机制还尚未可知,如何将生长因子与组织工程细胞膜片技术相整合,最终将其用于组织工程修复具有重要意义。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨分化过程中成血管相关因子的表达变化。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞,采用维生素C连续诱导法构建骨髓间充质干细胞膜片,然后分组进行成骨诱导分化,对照组加入成骨诱导液培养,碱性成纤维细胞生长因子组在成骨诱导液中加入20μg/L碱性成纤维细胞生长因子。成骨诱导分化7,14 d进行茜素红染色,成骨诱导分化10 d采用荧光定量PCR法检测成血管相关基因的表达量。结果与结论:茜素红染色结果显示碱性成纤维细胞生长因子组与对照组相比钙化结节明显,荧光定量PCR结果显示碱性成纤维细胞生长因子组转化生长因子β1的mRNA表达明显高于对照组,血管内皮生长因子、血管生成素1、血小板衍生因子BB的表达量明显低于对照组。结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞膜片在碱性成纤维细胞生长因子诱导下表现出较高的成骨分化潜能,并在成骨晚期可提高转化生长因子β1的表达水平。

人骨髓间充质干细胞复合人脐静脉内皮细胞构建预血管化成骨细胞膜片

背景:如何使工程化骨组织移植后能够成活并发挥功能,前提条件是必须含有充足有效的血液供应,而这也正是工程化组织应用于临床的主要障碍之一。目的:探索新的体外构建血管网络的方法以解决工程化骨组织预血管化的问题。方法:人骨髓间充质干细胞以9×10^4/cm^2高密度接种,经成骨诱导连续培养14 d形成细胞膜片,镜下观察细胞形貌,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。然后将培养的人脐静脉内皮细胞以5×10^4/cm^2密度接种到上述细胞膜片上,继续培养至7 d。通过镜下观察、CD31免疫荧光染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色评估血管网形成情况及膜片特性。结果与结论:①经连续培养可获得完整的成骨诱导细胞膜片,茜素红染色和碱性磷酸酶染色呈阳性;②倒置相差显微镜观察发现人脐静脉内皮细胞接种在成骨诱导细胞膜片上逐渐重排,CD31染色显示进行性管腔形成;③接种人脐静脉内皮细胞后构建的预血管化成骨诱导细胞膜片Ⅰ型胶原染色阳性;④结果表明,经成骨诱导后可形成具有成骨特性的细胞膜片,将人脐静脉内皮细胞培养在该膜片上可体外形成预血管化成骨细胞膜片,为优化构建预血管化的骨组织提供了新的理论指导。

血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片的构建

背景:研究发现充足的血供是骨组织修复与再生必不可少的条件。目的:应用血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞构建出复合细胞膜片。方法:体外分离培养SD大鼠血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞,将两种细胞直接共培养,经成膜诱导10 d后构建出复合细胞膜片并对获得的膜片进行大体、倒置显微镜及苏木精-伊红染色观察。将血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞分别应用荧光标记液标记后,观察膜片诱导过程中两种细胞的分布及交流情况。对复合细胞膜片进行碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色,观察其成骨分化能力。结果与结论:血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞直接共培养成膜诱导10 d后可成功获得复合细胞膜片,两种细胞在成膜诱导过程中存在细胞间接触。获得的膜片由多层细胞及细胞外基质构成,经碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色结果证实该膜片具有较强的成骨分化能力,为进一步将血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片应用于骨缺损的修复提供了条件。

骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨移植修复牙槽嵴裂

背景:临床上使用自体髂骨移植方法修复牙槽嵴裂,常常不能获得稳定的治疗效果,移植骨吸收率因人而异,受到许多因素的影响。目的:观察骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨松质骨块移植修复牙槽嵴裂术后的骨吸收情况。方法:制备实验犬双侧牙槽嵴裂模型,采用自体对照的办法,在实验犬上颌骨两侧的裂隙分别植入骨髓间充质干细胞膜片复合犬自体髂骨骨块(实验组)和单纯犬自体髂骨骨块(对照组)。通过颌骨CT及micro CT对植骨区的骨吸收率、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁分离度、骨密度进行比较。结果与结论:术后3,6个月时实验组的骨吸收率明显低于对照组,差异有非常显著性意义(P<0.01);术后6个月实验组骨体积分数、骨密度均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),实验组骨小梁分离度低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),而骨小梁厚度两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞膜片复合髂骨骨移植可减少植骨术后骨吸收率,同时可以促进新骨的生成。