一种新的肾小球肾炎——脂蛋白性肾炎

肾活检的组织学诊断已开展了20余年,再加上荧光抗体、电镜等方法,使各种肾脏疾病都能明确诊断。目前常用的分类是WHO的组织学分类,但作者遇到一种与之不同的新的肾小球肾炎,从其组织染色特征认为是脂质蓄积症的一种。

铁超载调控氧化性低密度脂蛋白诱导泡沫细胞促动脉粥样硬化活化的作用

目的探讨铁超载对泡沫细胞促动脉粥样硬化(AS)活化的影响。方法RAW264.7和MOVAS细胞株扩增培养,分为正常对照(media)组、oxLDL组、oxLDL+柠檬酸铁铵(oxLDL+FC)组、oxLDL+柠檬酸铁铵+去铁胺(oxLDL+FC+DFO)组,分别以氧化性低密度脂蛋白(oxLDL)、柠檬酸铁胺(FC)、去铁胺(DFO)刺激。普鲁士蓝和油红O染色检测铁沉积和泡沫细胞生成。CCK-8测定细胞存活率,DHE探针观察活性氧自由基(ROS)生成,ELISA测定还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4),丙二醛(MDA)含量。RT-qPCR检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA),平滑肌22a(smooth muscle 22 alpha,SM22a)、骨桥蛋白(OPN),白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达。结果与oxLDL组相比,oxLDL+FC组细胞胆固醇逆向转运分子ABCA1和ABCG1表达降低,细胞泡沫化加重,死亡率上升,且ROS和MDA的表达增加,GPX4表达降低,巨噬细胞M1型标志物及平滑肌细胞合成型标志物升高,炎症因子IL-1β、TNF-α的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁超载能促进泡沫细胞生成,使其向促动脉粥样硬化表型转化,加重脂质过氧化及炎症反应。

新生儿期起病伴血性腹水的Ⅰ型高脂蛋白血症1例

患儿,男,生后32 d,因便血2 d,发热1 d入院。入院后抽动静脉血进行检查,血液标本均呈粉色。血生化检查显示甘油三酯、总胆固醇水平升高。家系全基因组测序显示患儿为LPL基因复合杂合变异,变异分别来自父亲和母亲。患儿明确诊断为脂蛋白脂肪酶缺乏相关的高脂蛋白血症。因患儿有便血、发热、血性腹水等症状,考虑急性胰腺炎,予禁食、血浆置换、全血换血治疗。基因结果回报明确诊断后予低脂饮食,补充脂溶性维生素、微量元素等治疗,调整喂养方案,住院4周后病情好转出院。随访甘油三酯、总胆固醇下降。随访至1岁,患儿生长及精神运动发育均正常。该文重点介绍新生儿期起病伴有血性腹水可疑急性胰腺炎相关症状的家族性高脂蛋白血症的多学科诊疗。

西红花苷对氧化性低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨西红花苷对氧化性低密度脂蛋白(Ox-LDL)致内皮细胞损伤的保护作用。方法:在体外培养牛主动脉内皮细胞中,加入不同剂量的西红花苷培养12h后,再加入50μg·mL^(-1)的Ox-LDL继续培养24h,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)的含量,测定细胞中一氧化氮合酶(NOS)的活性;利用流式细胞仪观察其对Ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡的影响。结果:西红花苷(10^(-8),10^(-7),10^(-6)mol·L^(-1))可剂量依赖性地抑制LDH活性及外漏(P<0.01)。提高细胞内NOS的活性(P<0.01),使细胞分泌的NO含量升高(P<0.01);西红花苷对Ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。结论:西红花苷对Ox-LDL致内皮细胞损伤有保护作用。

胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响

目的探讨胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。方法采用高效液相分析法检测细胞内胆固醇含量;用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果用ox-LDL处理RAW264.7细胞48h后,细胞内胆固醇明显增加,同时细胞的凋亡率也随之明显增加;而用胆固醇流出刺激物高密度脂蛋白3和β-环糊精处理细胞后,细胞内胆固醇流出显著增加,细胞内总胆固醇明显减少,细胞凋亡率也下降明显。而用胆固醇流出阻断物BFA后,细胞内胆固醇流出明显下降,高密度脂蛋白对细胞的保护作用被明显的削弱。结论促细胞内胆固醇流出能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的凋亡。

氧化性低密度脂蛋白对人单个核细胞Toll样受体表达及炎症介质的影响

目的:探讨氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)对单个核细胞Toll样受体1～10(TLR1～10)表达的影响及对炎症因子TNF-α、IL-6的调控作用。方法:用逆转录-聚合酶链反应检测健康人单个核细胞中TLR1～10 mRNA的组成型表达;用实时定量-聚合酶链反应检测ox-LDL刺激单个核细胞后,TLR1～10mRNA表达的变化;结合抗体阻断实验,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中TNF-α和IL-6的含量。结果:人单个核细胞有TLR1～10 mRNA的组成型表达,ox-LDL刺激可上调人单个核细胞TLR2、TLR4 mRNA的表达。经ox-LDL刺激后,单个核细胞分泌TNF-α、IL-6上升,受体阻断剂阻断TLR2、TLR4后,可以减少ox-LDL诱导的TNF-α、IL-6分泌。结论:ox-LDL可能是TLRs的内源性配体,ox-LDL可通过TLR信号通路调节单个核细胞炎性细胞因子的生成。

急性缺血性脑卒中患者血清生长分化因子-15、钙调蛋白、氧化性低密度脂蛋白水平检测的临床意义

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)血清生长分化因子-15(GDF-15)、钙调蛋白(CAM)与氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)的水平变化及临床意义。方法选择2016年1月至2018年12月粤北人民医院收治的AIS患者148例作为研究组,根据患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分结果将患者分为轻中度组(NIHSS≤15分,n=82)和重度组(NIHSS>15,n=66);根据头颅MRI计算的脑梗死面积将其分为腔隙性梗死组(n=49)、中等面积脑梗死组(n=67)、大面积脑梗死组(n=32)根据患者出院3个月改良Rankin量表(MRS)结果将患者分为预后良好组(MRS≤2分,n=87)和预后不良组(3分≤MRS<5分,n=61),另选取同期医院体检健康人80例作为对照组,比较各组血清GDF-15、CAM与ox-LDL水平,采用受试者工作特征曲线评估其对患者预后的预测价值。结果研究组血清GDF-15、CAM与ox-LDL水平明显高于对照组(P<0.05)。重度组患者血清GDF-15、CAM与ox-LDL水平明显高于轻中度组患者。中等面积脑梗死组、大面积脑梗死组患者血清GDF-15、CAM、ox-LDL水平高于腔隙性梗死组,且大面积脑梗死组高于中等面积脑梗死组(P<0.05)。预后不良组患者血清GDF-15、CAM与ox-LDL水平明显高于预后良好组患者,数据有统计学意义(P<0.05)。血清GDF-15、CAM、ox-LDL对AIS预后均有一定的预测价值,联合检测预测AIS预后的AUC可达0.877(0.814,0.940),灵敏度、特异性分别为0.89、0.86,准确性为0.85。结论AIS患者血清GDF-15、CAM、ox-LDL水平异常升高,并与病情严重程度及预后密切相关,早期联合检测可作为评估病情及预测预后的重要指标。

小檗碱对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞促炎细胞因子和活性氧的影响

目的:研究小檗碱对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症细胞因子和活性氧的影响及其可能分子机制的探讨。方法:分别用不同浓度的小檗碱处理小鼠RAW 264.7巨噬细胞,6 h后,分别用酶连免疫法检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α和白介素-1β生成;荧光分光光度计检测细胞内活性氧;定量逆转录聚合酶连反应和流式细胞术分析巨噬细胞Toll样受体4信使RNA和蛋白表达。结果:相对于空白组,氧化型低密度脂蛋白显著地促进巨噬细胞生成肿瘤坏死因子-α和白介素-1β,产生活性氧,上调Toll样受体4信使RNA和蛋白表达(P<0.05);进一步发现小檗碱剂量依赖地抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子-α和白介素-1β生成;减轻氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞活性氧产生;下调氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞Toll样受体4表达。结论:小檗碱能有效地抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞促炎细胞因子和活性氧的生成,其作用机制可能是通过下调Toll样受体4表达。

兰州地区家族性高脂蛋白血症家系特点分析

目的调查兰州地区家族性高脂蛋白血症家系,了解该地区家族性高脂蛋白血症家系的特点。方法调查资料来自该课题的前期研究,筛选符合标准的高脂蛋白血症家系,收集入选家系成员调查表、体检及实验室数据,分析家族性高脂蛋白血症家系的特点。结果筛选出家族性高脂蛋白血症家系39个,共计280个家系成员。核心家系15个,单亲家系11个,父母双亡家系13个;家族性高胆固醇家系6个,家族性高三酰甘油血症家系9个,家族性混合型高脂血症家系24个。39个家系中子一代人数占全部家系所有成员的比例为63.2%,父辈所占比例为14.3%,子二代所占比例为22.5%。结论最常见的家族性高脂蛋白血症是家族性混合型高脂血症家系;血脂异常者中以子一代成员为主;核心家系数量少,不完整的非核心家系所占比例增加。

氧化性低密度脂蛋白与卒中危险因素的相关关系

目的 研究卒中患者氧化性低密度脂蛋白(简称OXLDL)与其主要危险因素的相关关系。方法 应用ELISA双抗体夹心法对70例卒中患者血浆OXLDL含量进行了测定,同时测定血脂、载脂蛋白、血糖水平并详细记录病史。结果 脑梗死组、脑出血组血浆OXLDL含量均明显增高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);OXLDL与吸烟史、高血压病史、胆固醇、血糖、APOB、APOB/APOA、LDL、呈显著性正相关(P<0.05);OXLDL与APOA、HDL呈显著性负相关(P<0.05);OXLDL与患者性别、年龄、饮酒、甘油三酯水平无显著性相关(P>0.05)。结论 OXLDL与卒中的多种危险因素有密切的关系。可作为预防卒中的临床生化指标之一。

姜黄素对氧化性低密度脂蛋白诱导的内皮细胞迁移能力的影响

目的:研究姜黄素(Curcumin)对氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的内皮细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),不同浓度的ox-LDL处理HUVECs 24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率。实验分为正常对照组、ox-LDL组、Crcumin预处理+ox-LDL组。激光共聚焦检测氧自由基(reactive oxygen species,ROS);酶标仪法测一氧化氮(nitric oxide,NO);Westren blot测定一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、磷酸化一氧化氮合酶(ser1177位点)(phosphorylated e NOSS1177,p-e NOSS1177)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化蛋白激酶B(Ser473位点)(phosphorylated Akt S473,p-Akt S473)表达水平;细胞迁移实验检测HUVECs迁移能力。结果:高浓度的ox-LDL促进HUVECs凋亡(P=0.010)。与对照组比较,ox-LDL促进ROS生成(P=0.001),降低NO含量(P=0.000),下调p-Akt S473、p-e NOSS1177蛋白表达(P=0.000,P=0.000),抑制了HUVECs迁移能力(P<0.05);与ox-LDL组比较,Curcumin预处理能够显著地降低ROS水平(P<0.05),增加p-Akt S473、p-e NOSS1177蛋白表达(P<0.05,P<0.05),提高NO水平(P<0.05),并且增加细胞迁移能力(P<0.05)。结论:姜黄素抑制ox-LDL诱导的ROS生成,可能通过Akt/e NOS/NO通路改善了内皮细胞的迁移能力。

黄芩素对氧化性低密度脂蛋白所致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究黄芩素对氧化性低密度脂蛋白所致内皮细胞损伤的保护作用,为临床研究提供参考。方法选用3种不同浓度(50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml)ox-LDL分别处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)12 h、24 h和48h,筛选ox-LDL诱导内皮细胞损伤的最佳浓度和时间。HUVEC经不同浓度黄芩素(1μM、10μM和100μM)预处理1 h后,再加入终浓度100μg/ml的ox-LDL处理24 h,运用MTT比色法检测细胞活力,用NO检测试剂盒测定细胞上清液中NO浓度,用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定细胞上清中LDH浓度。结果 100μg/ml ox-LDL处理HUVEC 24 h时抑制细胞活力作用最明显,用于后续实验。MTT实验结果显示,与对照组比较,ox-LDL组细胞活力显著降低(P<0.05);与ox-LDL组比较,黄芩素组细胞活力显著增强(P<0.05)。NO浓度测定结果显示,与对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中NO浓度显著降低,加入不同浓度的黄芩素可缓解ox-LDL抑制HUVEC释放NO的作用(P<0.05)。LDH浓度测定结果显示,与对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中LDH浓度显著升高,加入不同浓度黄芩素可缓解ox-LDL促进HUVEC释放LDH的作用(P<0.05)。结论黄芩素对氧化性低密度脂蛋白所致内皮细胞损伤具有保护作用。

家族性脂蛋白脂酶缺乏症脂蛋白脂酶基因未报道变异及功能学分析

目的:探讨功能学研究在明确高脂血症致病基因未报道变异致病性判读中的有效性。方法:收集患儿及其父母的外周血DNA,利用全外显子组测序(WES)发现致病基因并进行一代测序验证,通过美国医学遗传学会的变异位点解读指南对检测到的变异位点进行分析;针对未报道的变异,分别构建野生型和携带有未报道变异位点的突变型基因的真核表达载体,转染COS-7细胞后,检测两组细胞中脂蛋白脂酶(LPL)的表达、分泌及酶活性。结果:该患者核心家系的WES结果提示,患者LPL基因存在复合杂合变异c.590G>A(p.R197H)和c.940G>A(p.G314S)。通过变异位点解读指南评估LPL c.590G>A(p.R197H)为可能致病变异。未报道变异LPL c.940G>A(p.G314S)的功能学实验表明,体外过表达LPL-G314S突变体蛋白,其胞浆内LPL蛋白表达量与野生型相比差异无统计学意义,但分泌量显著减少;LPL酶活性检测显示,LPL-G314S突变体的细胞裂解液和细胞培养液中LPL酶活性均比野生型显著降低。综合证据提示该未报道变异为致病性变异。结合患儿临床表现和遗传诊断结果最终诊断为家族性脂蛋白脂酶缺乏症。结论:功能学实验增强了未报道变异位点致病性判读的证据级别,为遗传诊断和临床确诊提供重要依据。

短暂性脑缺血发作患者血清ox-LDL、sdLDL-C水平及其临床意义

目的 探究短暂性脑缺血发作(TIA)患者血清氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)、小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)水平及其临床意义。方法 选取2021年4月至2022年9月延安大学附属医院收治的216例短暂性脑缺血发作(TIA)患者设为观察组,根据ABCD-3评分将观察组患者分为低危组(n=77)、中危组(n=93)和高危组(n=46),另选同期入院的健康体检者150名为对照组。对比两组以及观察组不同ABCD-3评分患者血清ox-LDL、sdLDL-C水平;采用Pearson相关系数分析血清ox-LDL、sdLDL-C水平与ABCD3评分的相关性;发病后随访患者1年,根据是否发生缺血性脑卒中(AIS)将观察组患者分为AIS组(n=43)和非AIS组(n=173),比较两组血清ox-LDL、sdLDL-C水平;采用受试者工作曲线分析血清ox-LDL、sdLDL-C水平对TIA患者进展为AIS的预测价值。结果 观察组血清血清ox-LDL、sdLDL-C水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清ox-LDL、sdLDL-C水平:低危组<中危组<高危组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关系数分析显示,TIA患者血清ox-LDL、sdLDL-C水平与ABCD-3评分呈显著正相关(P<0.05);AIS组血清ox-LDL、sdLDL-C水平显著高于非AIS组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清ox-LDL、sdLDL-C水平单独及联合预测TIA患者进展为AIS的敏感度为0.791、0.814、0.954,特异度为0.751、0.636、0.624,AUC为0.789、0.792、0.872。结论 TIA患者血清ox-LDL、sdLDL-C水平均呈高表达,且与患者病情显著相关,二指标对TIA患者进展为AIS具有较高的预测价值。

双重血浆滤过治疗家族性脂蛋白肾病的护理

目的探讨双重血浆滤过(DFPP)治疗家族性脂蛋白肾病(LPG)的护理方法。方法对3例家族性脂蛋白肾病患者行DFPP治疗,共治疗16例次,在治疗前后对患者实施以保证治疗安全、提高治疗效果为目的的整体护理。结果3例患者均顺利完成DFPP治疗,未出现低血压、过敏反应等并发症。经治疗后患者尿蛋白减少,血浆白蛋白升高,尿蛋白转阴,血脂水平降至正常。结论双重血浆滤过治疗家族性脂蛋白肾病效果明显,合理有效的护理措施是治疗得以顺利进行的保障。

小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

目的:研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法:用75mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间.清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞,然后给予75mg/Lox-LDL处理24h.Western blot法检测清道夫受体AI和小凹蛋白的表达.高效液相色谱法检测细胞内胆固醇的含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况.结果:经75mg/Lox-LDL处理巨噬细胞不同时间,ox-LDL呈时间依赖性促进清道夫受体AI的表达,而呈时间依赖性抑制小凹蛋白的表达.用清道夫受体AI反义寡核苷酸抑制清道夫受体AI的表达,小凹蛋白的表达明显增加.该组细胞内胆固醇含量为(119±7)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.P38MAPK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达,而增加小凹蛋白的表达.SB202190处理组细胞内胆固醇含量为(173±14)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.结论:小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.

银杏叶提取物对脂多糖介导的血管内皮细胞低密度脂蛋白受体LOX-1表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物(GBE50)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor,LOX-1)表达的影响。[方法]应用LPS刺激体外培养的HUVECs 24h。RT-PCR方法检测(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor mRNA,LOX-1 mRNA)表达水平;采用蛋白质印迹分析检测LOX-1蛋白表达水平。[结果]LPS(1μg/mL)上调LOX-1 mRNA和蛋白表达水平,GBE50(40μg/mL)轻度抑制LPS介导的LOX-1 mRNA(P<0.005)和蛋白表达增加(但没有统计学意义,P>0.05),GBE50(80μg/mL)及NF-κB抑制剂CAPE(20μg/mL)明显抑制LOX-1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01)。[结论]GBE50可能通过抑制LOX-1表达,在防治动脉粥样硬化中发挥作用。

3'-大豆苷元磺酸钠对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究3'-大豆苷元磺酸钠(DSS)对氧化低密度脂蛋白诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养脐静脉内皮细胞,将细胞分为空白对照组、氧化损伤对照组(ox-LDL)、氧化损伤加入维生素E对照组(VE+ox-LDL)、氧化损伤加入DSS低、中、高浓度组(DSS-L、DSS-M及DSS-H组)。将ox-LDL作用于预先加入VE及不同浓度DSS预处理24 h的内皮细胞,继续培养24h,MTT法检测细胞活力,比色法检测丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的含量,检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果预先加入VE、中高浓度的DSS可提升损伤的内皮细胞的活力,可显著降低损伤内皮细胞的MDA及NO的释放,可显著提升损伤细胞的LDH、NOS、SOD和GSH-Px的活性,但低浓度的DSS对上述指标影响不大。结论DSS可减轻ox-LDL对血管皮细胞的氧化损伤,起到一定的抗氧化保护作用。