NO-1886对过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶和肿瘤坏死因子α基因表达的影响

为了探讨脂蛋白脂肪酶活化剂NO 1886对高脂高糖饮食喂养贵州小香猪过氧化物体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子α表达的影响 ,选择雄性贵州小香猪 15头 ,随机分为 3组。正常对照组喂普通饲料 ;高脂高糖组喂高脂高蔗糖饲料 ;治疗组喂高脂高蔗糖饲料 4个月后加 1%NO 1886治疗。 8个月后处死动物 ,采用Trizol提取组织总RNA ,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果发现 ,正常对照组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达较低。高脂高糖组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达增强 ,NO 1886使高脂高糖喂养增强肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α表达的作用减弱 ;在脂肪组织 ,治疗组脂蛋白脂肪酶的表达水平最高 ,分别比正常对照组和高脂高糖组高 2 7%和 2 0 % ;NO 1886抑制高脂高糖喂养小香猪脂肪组织肿瘤坏死因子α的表达。结果提示 ,NO 1886能促进小香猪脂肪组织脂蛋白脂肪酶的表达 ,显著抑制脂肪组织肿瘤坏死因子α基因表达 ,高调脂肪组织过氧化体增殖物激活型受体γ ,减弱肝脏和肌肉过氧化体增殖物激活型受体α的表达 ,是NO 1886有效降低血浆游离脂肪酸和肿瘤坏死因子α水平可能的机制。

大口黑鲈肿瘤坏死因子-α诱导蛋白2基因克隆及免疫相关基因表达

【目的】克隆大口黑鲈(Micropterus salmoides)肿瘤坏死因子-α诱导蛋白2(Tumor necrosis factor-alpha induced protein 2,TNFAIP2)基因,命名为MsTNFAIP2,探究MsTNFAIP2在大口黑鲈免疫应答中的作用。【方法】根据转录组中MsTNFAIP2编码序列(CDS)设计引物并克隆该基因;利用DNAMAN等软件和SMART等预测并分析MsTNFAIP2氨基酸序列理化性质和结构;用实时荧光定量PCR分析在鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)和脂多糖刺激前后MsTNFAIP2及TNF-α、IL-1β、IL-10和IFN-γ的mRNA表达变化。【结果】成功克隆MsTNFAIP2 CDS序列,长度为1932 bp,共编码644个氨基酸,有一个Sec6超家族结构域;与鳜(Siniperca chuatsi)TNFAIP2氨基酸序列同源性最高,为74.84%;鱼诺卡氏菌和脂多糖刺激后,MsTNFAIP2及TNF-α、IL-1β、IL-10和IFN-γmRNA表达水平在头肾、脾脏和淋巴细胞中显著上调(P<0.05)。【结论】MsTNFAIP2参与了大口黑鲈免疫应答。

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS+100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。

小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子、脂肪因子及脂肪酸代谢的影响

目的：观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子、脂肪因子及脂肪酸代谢的影响，探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制。方法3T3-L1脂肪细胞经不同浓度小檗碱（0、5、10、20和40μmol/L）处理24 h后，采用qRT-PCR技术检测相关因子mRNA表达水平，包括白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、瘦素、脂联素和内脂素以及脂肪酸合酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪组织甘油三酯水解酶（ATGL）、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（AFABP）。同时用10μmol/L小檗碱分别处理脂肪细胞0、4、8、24、48 h后，以相同方法测定上述指标mRNA表达水平。结果10-40μmol/L小檗碱剂量组的脂肪细胞内IL-6、TNF-α、瘦素、FAS、ATGL、AFABP mRNA表达水平均低于0μmol/L组，内脂素mRNA高于0μmol/L组（P〈0.05），各组间脂联素mRNA表达无明显差异（P〉0.05）。8-48 h时间处理组细胞内IL-6、TNF-α、瘦素、AFABP、ATGL、FAS mRNA表达水平均低于0 h组，内脂素mRNA水平高于0 h组（P〈0.05）。脂联素mRNA表达水平仅在48 h处理组降低（P〈0.05）。各组间ACC mRNA表达无明显差异（P〉0.05）。结论小檗碱能影响3T3-L1脂肪细胞炎症因子、脂肪因子和关键脂肪酶及蛋白mRNA的表达，且呈时间、剂量依赖效应，这可能是其改善胰岛素抵抗的重要分子机制。

脂多糖刺激前后小鼠肺肝脾组织中Toll样等受体基因表达情况

目的 了解脂多糖 (L PS)对肺、肝、脾组织中与 L PS信号转导有关的受体的基因表达情况的影响。方法 L PS刺激前后取小鼠肺、肝、脾组织总 RNA,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量测定脂多糖结合蛋白 (L BP)、CD1 4、Toll样受体 2 (TL R2 )、TL R4和肿瘤坏死因子 α(TNFα)等基因的表达情况。结果 正常组织中 ,肺有 TL R2的表达 ,肝有 TL R2、CD1 4、L BP的表达 ,脾有 TL R2的表达 ;注射 L PS后的 5 h内 ,肺组织 TL R2、TL R4、CD1 4和 TNFα,肝组织 TL R2、CD1 4、L PB和 TNFα,脾组织 TL R2、TL R4、CD1 4和TNFα的基因表达均呈逐渐增加趋势。结论 正常情况下 TL R2等基因在不同组织中的表达有差异 ,L PS刺激 5 h内各基因的表达提高 ,从而提高机体对 L PS等病原体模式识别分子的反应性。

活血中药对ApoE基因缺陷小鼠血脂及动脉粥样硬化斑块炎症反应的影响

目的观察6种常用活血中药(赤芍、丹参、川芎、三七、桃仁和酒大黄) ,对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块炎症反应和血脂的影响。方法90只6～8周龄小鼠随机分成8组:赤芍组、丹参组、川芎组、三七组、桃仁组、酒大黄组、模型组和对照组(辛伐他汀)。予西方类型膳食喂养13周,待其形成成熟的动脉粥样硬化斑块后,给予药物治疗13周。检测小鼠血脂,处死动物并取出心脏及主动脉,免疫组织化学染色法观察小鼠主动脉根部CD6 8、单核细胞趋化蛋白- 1(MCP- 1)及肿瘤坏死因子α(TNF -α)的表达。结果中药各组均有一定的调脂作用;模型组CD6 8表达最为活跃,而丹参组、川芎组、三七组和对照组的CD6 8阳性表达细胞较少(P <0. 0 5 ) ;酒大黄组和对照组AS斑块内炎症因子MCP- 1、TNF -α表达较模型组明显减少(P <0 . 0 5 )。结论上述活血中药能够干预ApoE基因缺陷小鼠成熟斑块的进展,有一定稳定斑块的作用,其机制可能与调节脂质代谢和抑制炎症反应有关,不同活血药在常规剂量下其作用环节和强度上可能存在差异。

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖 (LPS)诱导RAW2 6 4 .7细胞肿瘤坏死因子α(TNF α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW2 6 4 .7细胞引起的激酶活性变化 ;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法研究LPS诱导的TNF α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW2 6 4 .7细胞可引起细胞外信号调节激酶 1(ERK1)、c Jun氨基末端激酶 1(JNK1)和p38MAPK的一过性激活 ;用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW2 6 4 .7均可不同程度地诱导TNF α启动子转录活性 ;而且 ,这些MAPK通路激活诱导的TNF α启动子转录活性表现出明显的协同效应 ;三种MAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF α启动子转录激活的抑制效应 ;RT PCR的结果证实 ,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF α启动子转录活性增加 ,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活 ;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF α基因表达的调控。

PIG7基因与Litaf/Simple蛋白

PIG7基因是与p53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密。该基因可能存在2种不同的转录本——Litaf与Simple,Litaf在LPS诱导TNF-α表达过程中起转录激活作用,Simple可能参与溶酶体介导的细胞内蛋白分选和降解过程。