高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理变化

目的研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同时间段的动脉粥样硬化的病理进展,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法采用6周龄40只载脂蛋白E基因敲除小鼠,20只给予高脂膳食饲料,20只给予普通饮食,分别于15周龄、19周龄、24周龄、28周龄、36周龄5个时间段各取4只麻醉处死做病理检测。结果随着时间进展,载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化程度逐渐加重,经历了从脂质条纹到粥样斑块形成典型的动脉粥样硬化病理过程;高脂饮食组比普通饮食组的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理改变严重。结论载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的可靠模型,高脂饮食可以加速载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的病理进程。

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

观察血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响。 16只 6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为高脂血症组 (n =8)和血脂康组 (n =8) ,相同遗传背景的同龄正常C5 7BL/ 6J小鼠为正常对照组 (n =8)。血脂康组每只灌服血脂康 4mg/d ,高脂血症组、正常对照组每只灌服生理盐水 0 .4mL/d。连续灌胃 14周后下腔静脉取血测血脂 ,再用 10 %福尔马林灌注后 ,取主动脉进行形态学观察及图像分析。结果发现 ,高脂血症组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,但血脂康组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平与高脂血症组相比则明显下降 (P <0 .0 5 )。图像分析结果发现 ,高脂血症组动脉粥样硬化病变显著 ,与正常对照组相比斑块总面积明显增加 (P <0 .0 5 ) ;光镜下多为粥样硬化期 ,管壁厚薄不均 ,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变和由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶 ;血脂康组病变较高脂血症组明显减轻 ,血脂康组与高脂血症组相比斑块总面积明显减小 (P <0 .0 5 ) ,主要为早期粥样硬化 ,管壁厚薄较均匀 ,未见明显脂纹脂斑及粥样斑块期病灶 ;正常对照组为正常动脉壁 ,厚薄均匀 ,无动脉粥样硬化病灶。结果提示 。

解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清超敏C反应蛋白的影响

目的观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE(-/-)mice]小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲料),同时设13周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(12只,给予普通饲料)。19周后随机抽取高脂饲料ApoE(-/-)小鼠2只确认易损斑块形成后,剩余96只随机分为8组(模型组、解毒组、活血组、解毒活血配伍高、中、低剂量组、洛伐他汀组和血脂康组),每组12只。造模成功后每天给予药物干预,解毒组予虎杖提取物26·6mg/kg;活血组予芎芍胶囊110mg/kg;配伍高剂量组予虎杖提取物53·2mg/kg,芎芍胶囊220mg/kg;配伍中剂量组给予虎杖提取物26·6mg/kg,芎芍胶囊110mg/kg;配伍低剂量组给予虎杖提取物13·3mg/kg,芎芍胶囊55mg/kg;洛伐他汀组给予洛伐他汀3·3mg/kg;血脂康组给予血脂康0·2g/kg;以上药物根据剂量蒸馏水溶解,混匀后灌胃,每次0·4mL。模型组、普通饲料组、C57BL/6J小鼠对照组均灌服生理盐水0·4mL。用药17周后,下腔静脉取血,全自动酶标仪检测血清hs-CRP浓度。结果模型组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组和普饲组(P<0·05,P<0·01);各给药组中,洛伐他汀组、解毒组和配伍高剂量组hs-CRP水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0·01);配伍高剂量组hs-CRP水平低于洛伐他汀组、血脂康组、单纯解毒或活血组及配伍中、低剂量组;解毒组hs-CRP水平低于活血组(P<0·01)。结论解毒活血配伍方药可降低ApoE(-/-)小鼠血清hs-CRP水平。

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用

目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26．6 mg／(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg／(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53．2 mg／(kg·d),芎芍胶囊220 mg／(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26．6 mg／(kg·d),芎芍胶囊110 mg／(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13．3 mg／(kg·d),芎芍胶囊55 mg／(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3．3 mg／(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0．01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0．01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。

甘草酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质代谢及动脉粥样硬化斑块的影响

目的探讨甘草酸对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化(As)斑块的影响及可能机制。方法雌性Apo E-/-小鼠18只,随机分为对照组和甘草酸组,高脂喂养12周中,甘草酸组给予甘草酸[100 mg/(kg·d)]灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每4周监测小鼠体重并采取小鼠禁食后眼球后静脉血,酶法测量血脂、血糖水平及血清中对氧磷酶1(PON1)活性,小鼠安乐死后取主动脉窦部作冰冻切片油红O染色、胸腹主动脉段作剖面分析脂质斑块面积。实时荧光PCR检测肝组织中基因表达水平,Western blot检测肝组织中相关蛋白的表达水平。结果高脂喂养中小鼠体重增加、血脂紊乱加重。与对照组比较,甘草酸组小鼠体重增幅、血浆甘油三酯及血糖水平均无显著差异,但血清总胆固醇水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,甘草酸降低主动脉窦及主动脉胸腹部斑块面积可达22%及21%(P<0.01和P<0.05)。实时荧光PCR结果显示甘草酸能显著上调肝脏脂质转运相关的B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平;其次,甘草酸可促进小鼠肝脏抗氧化酶PON1表达而升高血清中PON1活性(P<0.01),并显著提高肝细胞内甲硫氨酸亚砜还原酶A(Msr A)的表达水平显示其抗氧化能力。结论甘草酸能有效阻抑Apo E-/-小鼠As的发展,其机制可能涉及对肝脏胆固醇代谢调节及抗氧化功能的改善。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P<0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P<0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。

有氧运动对高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察有氧运动训练对高同型半胱氨酸血症(HHcy)小鼠血浆同型半胱氨酸水平(Hcy)的影响,探讨有氧运动是否能够延缓HHcy致动脉粥样硬化。方法 6周龄雌性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为三组:对照组、HHcy组和HHcy+有氧运动组。饮用水中加入Hcy制作HHcy模型。HHcy+有氧运动组在1周适应性训练后进行8周跑台训练(0°,15 m/min,60 min/d,每周训练5天)。采用酶法检测血浆Hcy和血脂水平。主动脉根部切片,油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块面积。结果 HHcy组血浆Hcy水平与对照组相比明显增高(20.88±5.79μmol/L比7.80±1.10μmol/L,P=0.001),HHcy+有氧运动组血浆Hcy水平较HHcy组明显下降(14.01±2.30μmol/L比20.88±5.79μmol/L,P=0.016)。三组之间体重增长、饮水量及血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯水平无显著性差异。与对照组相比,HHcy组动脉粥样硬化斑块面积[(9.24±9.02)×10-4 mm2比(15.55±4.64)×10-4 mm2,P=0.034]及斑块负荷(12.20%±12.09%比19.86%±6.30%,P=0.047)明显增加,HHcy+有氧运动组较HHcy组斑块面积[(15.55±4.64)×10-4mm2比(8.62±7.55)×10-4mm2,P=0.024]及斑块负荷(19.86%±6.30%比10.62%±9.06%,P=0.021)明显降低。结论有氧运动可以降低HHcyApoE-/-小鼠血浆Hcy水平,延缓动脉粥样硬化进展,该作用独立于血脂水平的改变。

艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除小鼠学习记忆功能与海马β淀粉样蛋白沉淀的影响

目的：观察艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除（ apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-）小鼠学习记忆能力与海马β淀粉样蛋白（β-Amyloid）沉淀的影响。方法将13只8周龄C57BL/6小鼠作为空白对照组,27只同龄ApoE-/-小鼠随机分为ApoE-/-模型组、艾烟组、香烟组。香烟与艾烟组小鼠分别暴露于5~15 mg/m3的香烟与艾烟环境。各组小鼠每天干预20分钟,每周6天,共干预12周。于第13周进行行为学测试,之后处死动物、取材,对其脑组织海马中Aβ沉淀进行刚果红染色。结果与模型组对比,空白对照组、艾烟组、香烟组小鼠均表现出学习潜伏期缩短,记忆潜伏期增长,记忆错误次数减少,差别有统计学意义（ P〈0．05）。模型组小鼠在视野范围内有明显的粉红色弥散样Aβ沉淀,空白对照组明显少于模型组（P〈0．05）。艾烟组与香烟组在相同海马区域CA3中淀粉样蛋白沉淀均有不同程度的减少,艾烟组中Aβ沉淀较模型组显著降低（P〈0．05）,较香烟组亦有减少（P〈0．05）。结论艾烟能够发挥ApoE-/-小鼠的海马CA3区保护作用,减少Aβ沉淀进而改善ApoE-/-小鼠学习记忆能力。

南蛇藤素对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉壁C反应蛋白及组织因子表达的影响

目的探讨南蛇藤素对高脂饲养载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化病变形成的早期动脉壁内C反应蛋白和组织因子表达的影响。方法8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠12只,随机分为南蛇藤素干预组或二甲基亚砜溶剂对照组,每组各6只。均给予高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予南蛇藤素2mg/(kg·d)或相当剂量的二甲基亚砜腹腔注射。麻醉处死小鼠后,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片;以HE染色观察形态学变化,免疫组织化学法检测主动脉壁内C反应蛋白和组织因子的表达水平,以Image Pro Plus6.0软件进行图像分析。结果南蛇藤素干预组主动脉粥样硬化斑块面积明显小于对照组,分别为4947±1277μm2和8403±2535μm2(P<0.05);南蛇藤素组主动脉粥样斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);南蛇藤素组动脉壁C反应蛋白表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0152±0.0052与0.0256±0.0026(P<0.05);动脉粥样硬化斑块内组织因子表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0326±0.0132与0.0763±0.0347(P<0.05)。结论南蛇藤素可能通过抑制载脂蛋白E基因敲除小鼠炎症反应和动脉壁中C反应蛋白的表达而发挥抗动脉粥样的作用;还可能通过减少粥样斑块中组织因子的产生,而进一步起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

丹酚酸B对高脂高糖联合介导的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的观察丹酚酸B对高脂高糖联合介导的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及可能的发生机制。方法选取50只8周龄雌性载脂蛋白E基因敲除小鼠,腹腔注射链脲佐菌素200 mg/kg联合高脂饲料喂养12周,将血糖水平>11.1 mol/L的40只载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、丹酚酸B高剂量组、丹酚酸B中剂量组和洛伐他汀组,每组10只。其中丹酚酸B高剂量组灌服丹酚酸B 160 mg/(kg.d),丹酚酸B中剂量组灌服丹酚酸B 80 mg/(kg.d),洛伐他汀组灌服洛伐他汀2.3 mg/(kg.d),模型组灌服等量蒸馏水,连续灌胃8周。实验期满后,取小鼠血样测空腹血糖和血脂水平;取小鼠主动脉,分别制备主动脉冰冻切片和石蜡包埋切片,进行苏丹Ⅲ染色、MASSON染色和免疫荧光化学染色,观察斑块内脂质中心面积和纤维帽厚度及斑块糜烂发生率和斑块内新生血管数目。结果丹酚酸B高剂量组、洛伐他汀组与模型组比较空腹血糖和总胆固醇水平明显降低(P<0.05);丹酚酸B中剂量组、高剂量组及洛伐他汀组与模型组比较甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇水平明显升高(P<0.05)。丹酚酸B中剂量组、高剂量组与模型组比较脂质中心面积占斑块面积百分比、斑块内新生血管数目及斑块糜烂发生率明显降低(P<0.01),纤维帽平均厚度明显增高(P<0.01)。结论丹酚酸B能够提高糖尿病动脉粥样硬化斑块的稳定性,该作用可能是通过增加平均纤维帽厚度,降低斑块内脂质含量、斑块糜烂发生率和斑块内血管新生等方式来实现的。

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将ApoE^(-/-)小鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、鸢尾素组,每组10只,分别给予普通饮食+生理盐水、高脂饮食+生理盐水、高脂饮食+鸢尾素,饲养至12周后处死,处死前测体重,用化学法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。采用HE染色和整体油红O染色分析主动脉粥样斑块面积大小,实时荧光定量(qRT-PCR)检测主动脉CD36、NF-κB p65的mRNA表达,Western blot检测主动脉CD36、NF-κB p65、SOD的蛋白表达。结果动脉粥样硬化模型组主动脉斑块面积明显高于正常对照组,内膜明显增厚,而鸢尾素组较动脉粥样硬化模型组斑块面积减少,内膜增厚程度下降。与正常对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平升高,NF-κB p65、CD36mRNA和蛋白表达增加,而血清SOD活性、HDLC水平减低(P<0.05)。与动脉粥样硬化模型组比较,鸢尾素组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平降低,NF-κB p65、CD36 mRNA和蛋白表达下调,而血清SOD活性、HDLC水平升高(P<0.05)。结论鸢尾素能减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的发生发展,这可能与其降低小鼠体重和血脂、抑制炎症反应、抗氧化应激有关。

西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及脂质代谢相关基因周脂素和CD36表达的影响

目的观察西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠斑块成分及脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36表达的影响,探讨西洋参茎叶总皂苷稳定动脉粥样硬化斑块的作用及可能机制。方法33只6-8周龄小鼠载脂蛋白E基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周后,待其形成成熟的动脉粥样硬化斑块后,随机分为3组：模型组、西洋参茎叶总皂苷组、辛伐他汀组（阳性对照组）,每组11只。继续高脂喂养,并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周,处死动物,检测血脂,取心脏和主动脉,每只小鼠均取主动脉根部的4个切面,分别行HE染色和Movat染色,观察并计算各组小鼠主动脉粥样斑块内脂质核心大小,脂质成分与胶原成分比值。实时荧光定量PCR法检测主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达。结果给药13周后,与模型组比较西洋参茎叶总皂苷组小鼠主动脉斑块内脂质核心面积以及脂质成分与胶原成分比值明显减小（P〈0.01）,血清高密度脂蛋白显著升高（P〈0.01）。而主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达与模型组比较均显著降低（P〈0.05）。结论在临床推荐剂量上,西洋参茎叶总皂苷可通过改善载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块内部成分,尤其是减少斑块内脂质含量来起到稳定动脉硬化斑块的作用,其机制可能与抑制脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36 mRNA的表达有关。

苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制。方法选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组)。喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达。结果高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P<0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P>0.05)。苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07μ?比45.23±11.2μ?)比高脂组显著减少。苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P<0.05)。结论苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子和尿激酶型纤溶酶原激活物在载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块中的表达

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)与尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块中的表达,并探讨两者的相互关系。方法研究对象采用ApoE-/-小鼠,共喂养18周,分别于6周、10周、14周和18周4个时间点处死小鼠行HE染色切片观察动脉粥样硬化斑块形态;并采用RT-PCR及Western blot检测主动脉粥样硬化斑块内EMMPRIN和uPA的表达。结果成功建立动脉粥样硬化模型;在主动脉粥样硬化斑块中检测到EMMPRIN和uPA表达均增高,与普通饮食组比较有统计学意义(P<0.05)。EMMPRIN和uPA表达随喂养时间延长而增高。结论 EMMPRIN和uPA在ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块中随着斑块病变程度的严重性增加表达增高,两者可能共同参与粥样硬化斑块的发生发展过程。

YKL-40 RNA干扰对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究YKL-40 RNA干扰(RNAi)对载脂蛋白E基因敲除小鼠(apoE^-/-小鼠)动脉粥样硬化(AS)的影响。方法72只apoE^-/-小鼠高脂饮食并采用左颈总动脉缩窄性套管法诱导AS形成。8周后apoE^-/-小鼠随机分为对照组,病毒阴性对照(NC)组和观察组,并分别转染生理盐水、阴性对照病毒、YKL-40 RNA干扰慢病毒。转染6周后颈动脉斑块制作切片并进行HE和油红O染色,然后对斑块组分进行分析;采用ELISA法检测血浆单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平。结果慢病毒转染6周后,与对照组及NC组相比,观察组血浆YKL-40浓度明显降低(P<0.05);且观察组小鼠血浆炎症因子表达水平明显降低(P<0.05)。YKL-40 RNAi可增加颈动脉斑块纤维帽厚度,降低斑块脂质含量并减少斑块面积,进而增加斑块稳定性。本研究中RNAi的有益作用独立于降脂作用之外。结论YKL-40 RNAi可降低炎症基因表达并增加斑块的稳定性,且这种作用独立于降脂作用之外。

脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉核因子κB和基质金属蛋白酶9表达的调控

目的观察脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉核因子κB、基质金属蛋白酶9mRNA表达水平的调控作用。方法6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为高脂血症组(模型组)、洛伐他汀组及脉心康组,相同遗传背景的同龄正常C57BL6J小鼠为正常对照组。原位杂交观察各组主动脉核因子κB和基质金属蛋白酶9mRNA表达的强度。结果各给药组与模型组比较,核因子κBmRNA、基质金属蛋白酶9mRNA阳性细胞表达率均明显降低(P<0.01)。光镜下发现正常对照组主动脉壁内皮细胞、平滑肌细胞胞质内核因子κBmRNA、基质金属蛋白酶9mRNA阳性表达细胞极少见;模型组主动脉壁内皮细胞、平滑肌细胞胞质内阳性表达的棕褐色颗粒较多见,且棕褐色颗粒染色均较深;脉心康组主动脉壁可见内皮细胞、平滑肌细胞胞质内阳性表达的棕褐色颗粒,但远较模型组少,棕褐色颗粒染色深浅较均匀。结论脉心康可降低载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉核因子κB、基质金属蛋白酶9mRNA表达,发挥抗动脉粥样硬化、稳定斑块的作用。

Compound48/80对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉套环诱导斑块的影响

目的采用肥大细胞脱颗粒剂———Compound 48/80作用于颈总动脉套环的载脂蛋白E基因敲除小鼠,以探讨肥大细胞脱颗粒对动脉粥样硬化斑块的影响及其可能作用机制。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂高胆固醇饲料喂养,行右颈总动脉套环术后分为实验组和对照组,分别腹腔注射Compound 48/80或D-hank’s。第4次注射后30 min,安乐死,取材。全自动生物化学分析仪测定血清中脂质含量,比色法测定血清中类胰蛋白酶活性,苏木素—伊红染色观察颈总动脉病理改变,甲苯胺蓝肥大细胞染色,免疫组织化学检测平滑肌肌动蛋白和巨噬细胞特异性抗原在斑块内的表达。结果Compound 48/80对血清脂质水平无明显影响。Compound 48/80明显刺激肥大细胞脱颗粒(80.6%±17.8%比13.5%±4.1%,P<0.01),升高血清中类胰蛋白酶活性(0.57±0.13 u/L比0.36±0.10 u/L,P<0.05)。套环能加速颈总动脉斑块形成(未套环侧颈总动脉斑块面积均为0,套环侧颈总动脉均有斑块形成),Compound 48/80增大套环侧颈总动脉斑块最大横截面积(58 500±7 500μm2比8 600±2 800μm2,P<0.01),并使管腔最大狭窄程度加重(81%±15%比41%±12%,P<0.05)。Compound 48/80使颈总动脉斑块内α平滑肌肌动蛋白表达量增加(1 219±364 iu比522±137 iu,P<0.05)和巨噬细胞特异性抗原表达量增加(426±133 iu比169±38 iu,P<0.05)。结论套环能加速载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉斑块形成。Compound 48/80使套环侧颈总动脉斑块最大横截面积和颈总动脉最大狭窄程度增加,其机制可能与其刺激肥大细胞脱颗粒促使平滑肌细胞增殖和巨噬细胞聚集有关。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中血小板因子4和Toll样受体2的表达

目的观察高脂饲养的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块表达Toll样受体2和血小板因子4的情况,探讨血小板因子4对内皮细胞Toll样受体2表达的影响。方法高脂饲料喂养载脂蛋白E基因敲除小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。安乐死处死动物,原位灌流固定,取主动脉于10%中性缓冲福尔马林中固定,石蜡包埋连续切片,HE染色观察动脉粥样硬化斑块形态,免疫组织化学检测斑块中Toll样受体2和血小板因子4的表达。结果载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂水平明显增高,主动脉HE染色可见态动脉粥样硬化病变。在载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉富含脂质斑块中Toll样受体2表达上调,其中血管内皮细胞、巨噬细胞表达Toll样受体2明显增多。载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块中也发现有血小板因子4表达,主要在内皮细胞和动脉粥样硬化斑块肩部。结论1.载脂蛋白E基因敲除小鼠粥样斑块中Toll样受体2表达上调,并且Toll样受体2主要表达在粥样斑块的内皮细胞和巨噬细胞上。2.载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中可见血小板因子4表达。