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阳离子脂质体-DNA复合物与脂质-鱼精蛋白-DNA复合物体外细胞转染率比较 被引量:5
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作者 孙逊 田聆 +3 位作者 聂宇 张志荣 路娇 魏于全 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期191-195,共5页
采用薄膜-挤压法制备空白阳离子脂质体后,再分别制得阳离子脂质体-DNA复合物和脂质-聚阳离子-DNA复合物(Lipid-polycation-DNA lipopolyplexes,LPD);用凝胶阻滞实验,确定阳离子脂质体与质粒DNA的配比;用透射电镜观察阳离子脂质体-DNA复... 采用薄膜-挤压法制备空白阳离子脂质体后,再分别制得阳离子脂质体-DNA复合物和脂质-聚阳离子-DNA复合物(Lipid-polycation-DNA lipopolyplexes,LPD);用凝胶阻滞实验,确定阳离子脂质体与质粒DNA的配比;用透射电镜观察阳离子脂质体-DNA复合物和LPD的形态,用激光粒度仪测定它们的粒径和zeta电位;用酶标仪测定它们对张氏(Chang)肝细胞、HepG2肝癌细胞的转染率。结果表明阳离子脂质体-DNA复合物和LPD的形态均近似于球体,但LPD的粒径明显较小;LPD对张氏(Chang)肝细胞和HepG2肝癌细胞的转染率均高于阳离子脂质体-DNA复合物。LPD是基因治疗的临床应用中一种更具前景的载体系统。 展开更多
关键词 阳离子脂质体-dna复合物 脂质-鱼精蛋白-dna复合物 转染率
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半乳糖化脂质体-聚阳离子-DNA复合物的肝靶向性研究 被引量:2
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作者 路姣 孙逊 +2 位作者 海俐 吴勇 张志荣 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期239-241,共3页
目的研究半乳糖苷修饰的脂质体-聚阳离子-DNA复合物(Gal-LPD)在体外的肝细胞靶向性。方法合成胆甾五半乳糖苷(Gal-chol),并用薄膜-超声分散法制备空白阳离子脂质体,再与鱼精蛋白-DNA复合物形成Gal-LPD;用激光粒度仪及电位分析仪测... 目的研究半乳糖苷修饰的脂质体-聚阳离子-DNA复合物(Gal-LPD)在体外的肝细胞靶向性。方法合成胆甾五半乳糖苷(Gal-chol),并用薄膜-超声分散法制备空白阳离子脂质体,再与鱼精蛋白-DNA复合物形成Gal-LPD;用激光粒度仪及电位分析仪测定其粒径和电位;以lacZ质粒DNA作为报告基因,用HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞考察LPD的转染效率;用MTT法测定其细胞的毒性。结果Gal-LPD的粒径为200 nm;Zeta电位随阳离子成分DDAB-DNA比例的不同而在20-55 mV间变化;与未用半乳糖修饰的LPD0相比,Gal-LPD在HepG2细胞中的转染率提高了2.4倍,但在A549细胞中的转染率却有所下降,而且半乳糖能竞争抑制Gal-LPD在HepG2细胞中的转基因效率;Gal-LPD无明显的细胞毒性。结论Gal-LPD在HepG2细胞中有较高的转基因效率,具有体外的肝细胞靶向性。 展开更多
关键词 脂质体-聚阳离子-dna复合物 胆甾五半乳糖苷 肝靶向
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脂质体-聚乙烯亚胺-DNA三元复合物的构建及其对细胞的体外转染 被引量:2
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作者 李鹏 邹燕 +2 位作者 刘东华 孙晓利 张娜 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-5,共5页
目的研究非病毒基因载体脂质体-聚乙烯亚胺(PEI)-DNA三元复合物(TC)的制备方法,评价其体外细胞学性质。方法采用乙醇注入法制备空白阴离子脂质体,与PEI/DNA复合物37℃孵育30 min后,得到TC,考察其理化性质、抗核酸酶降解能力、血浆稳定... 目的研究非病毒基因载体脂质体-聚乙烯亚胺(PEI)-DNA三元复合物(TC)的制备方法,评价其体外细胞学性质。方法采用乙醇注入法制备空白阴离子脂质体,与PEI/DNA复合物37℃孵育30 min后,得到TC,考察其理化性质、抗核酸酶降解能力、血浆稳定性、细胞毒性及在卵巢癌细胞(Hela)中的转染效率。结果制备的TC呈类球形,大小较均匀,平均粒径为234.5 nm,Zeta电位为-20.72 mV;TC能在血浆中稳定存在4 h而不发生聚集;与核酸酶作用2 h后,其中的DNA几乎无降解;其细胞毒性较低,在无血清和含血清培养基中均能成功的转染Hela细胞,在含血清培养基中其转染效率明显高于PEI/DNA复合物。结论 TC是一种制备工艺简单、血浆稳定性好、转染率较高、极具应用潜力的非病毒纳米基因载体。 展开更多
关键词 非病毒载体系统 脂质体-聚乙烯亚胺-dna三元复合物 稳定性 转染效率
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阳离子脂质体用于基因治疗的研究进展
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作者 李辉 郭庆样 《自然杂志》 1998年第5期275-278,T001,共5页
阳离子脂质体作为基因载体与DNA通过正负电荷相互作用形成复合体,保护并输送DNA进入细胞,从而达到基因治疗的目的.目前,较为流行的阳离子脂质体-DNA复台体模型是“细面条”模型.脂质体的结构(头部、连接体、连接键及疏水尾部)、组成、... 阳离子脂质体作为基因载体与DNA通过正负电荷相互作用形成复合体,保护并输送DNA进入细胞,从而达到基因治疗的目的.目前,较为流行的阳离子脂质体-DNA复台体模型是“细面条”模型.脂质体的结构(头部、连接体、连接键及疏水尾部)、组成、制备方法等因素影响基因转移的效率和基因表达的程度.尽管阳离子脂质体作为基因载体还存在转染效率低、缺乏特异性等特点,但在化学和生物医学工作者的共同努力下,这些问题必将被攻破.阳离子脂质体用于基因治疗前景广阔. 展开更多
关键词 阳离子脂质体 载体 脂质体-dna复合体 转染 基因治疗
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阳性脂质体介导的转染法的研究 被引量:4
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作者 巴雅斯古楞 冯书堂 +1 位作者 牟玉莲 道尔吉 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第11期32-34,共3页
阳性脂质体介导的转染法是一种新的高效转染技术,以转染效率高,对外源核酸的大小无限制并可在体内和体外进行转染等优点已逐渐成为转染外源核酸进入真核细胞的重要方法。作者结合自己的试验结果及分析就阳性脂质体的组成、脂质体-DNA复... 阳性脂质体介导的转染法是一种新的高效转染技术,以转染效率高,对外源核酸的大小无限制并可在体内和体外进行转染等优点已逐渐成为转染外源核酸进入真核细胞的重要方法。作者结合自己的试验结果及分析就阳性脂质体的组成、脂质体-DNA复合物(L ipop lex)的形成原理、基因转染的机制及影响转染效率的因素等作一综述。 展开更多
关键词 阳性脂质体 基因转染 阳性脂质体-dna复合物
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用作基因载体的阳离子脂质体及其相关材料与制备技术 被引量:2
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作者 周育丹 李娟 《药学进展》 CAS 2009年第7期297-304,共8页
综述近年来阳离子脂质体在基因转染中的应用及其相关材料和制备技术。基因疗法面临的技术问题之一是寻找合适的基因载体,阳离子脂质体作为一种非病毒载体,具有无免疫原性、可自然降解等优点,在肺部、眼部疾病以及癌症的治疗中极具应用... 综述近年来阳离子脂质体在基因转染中的应用及其相关材料和制备技术。基因疗法面临的技术问题之一是寻找合适的基因载体,阳离子脂质体作为一种非病毒载体,具有无免疫原性、可自然降解等优点,在肺部、眼部疾病以及癌症的治疗中极具应用价值。随着研究的不断深入,新型脂质体材料相继出现、制备工艺也不断更新,阳离子脂质体的理化性质和转染效率均得到了极大的改善,推动了基因疗法和基因转染研究的发展。 展开更多
关键词 基因载体 阳离子脂质体 脂质体-dna复合物 基因转染 材料与制备技术
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脂质体-鱼精蛋白-DNA复合物的制备及对树突状细胞的成熟诱导 被引量:1
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作者 李攀 陈思穆 +2 位作者 龚涛 张志荣 孙逊 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期246-248,共3页
目的研究脂质体-鱼精蛋白-DNA复合物(LPD)的制备方法及对树突状细胞(DC2.4)的成熟诱导作用。方法薄膜-超声分散法制备空白的阳离子脂质体,再与鱼精蛋白-DNA复合物室温孵育形成LPD;测定其粒径和电位。流式细胞仪检测鼠源树突状细胞系DC2.... 目的研究脂质体-鱼精蛋白-DNA复合物(LPD)的制备方法及对树突状细胞(DC2.4)的成熟诱导作用。方法薄膜-超声分散法制备空白的阳离子脂质体,再与鱼精蛋白-DNA复合物室温孵育形成LPD;测定其粒径和电位。流式细胞仪检测鼠源树突状细胞系DC2.4的甘露糖受体表达水平;用DC2.4表面标记分子CD80、CD40、CD86和MHC-2的表达水平,考查LPD对树突状细胞的成熟诱导作用。结果 LPD的最佳比例为DDAB-鱼精蛋白-DNA(2∶1.5∶1);LPD粒径为84.28±0.56 nm,Zeta电位为27.33±1.23 mV。通过FITC-ManBSA的结合作用检测到DC2.4表面有83%的甘露糖受体表达。LPD明显上调DC2.4表面标记分子的表达水平(P<0.05)。结论 LPD制备工艺简单,是一个良好的疫苗佐剂。 展开更多
关键词 脂质体-鱼精蛋白-dna复合物 树突状细胞 成熟诱导
原文传递
核酸质粒免疫后的基因定位 被引量:1
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作者 钟辉 李平 +1 位作者 张艳红 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2000年第2期118-120,共3页
核酸疫苗免疫的一个安全性问题是核酸分子免疫接种后的去向。为探讨不同免疫途径及形式的核酸免疫后的基因表达部位 ,我们用克隆于pCMV载体的大肠杆菌 β 半乳糖苷酶作为模型系统 ,不同途径免疫注射后 ,通过染色后的颜色来观察报道基因... 核酸疫苗免疫的一个安全性问题是核酸分子免疫接种后的去向。为探讨不同免疫途径及形式的核酸免疫后的基因表达部位 ,我们用克隆于pCMV载体的大肠杆菌 β 半乳糖苷酶作为模型系统 ,不同途径免疫注射后 ,通过染色后的颜色来观察报道基因的表达水平以及分布 ,从结果来看 ,肌肉、腹腔、鼻腔注射裸DNA或脂质体 DNA 2 4h后 ,蛋白可以在不同的组织中表达 ,表达水平与注射途径以及免疫方式有关。连续观察 ,在核酸注射第 5d后 ,没有再检测到 β 半乳糖苷酶的表达。 展开更多
关键词 核酸免疫 Β-半乳糖苷酶 脂质体-dna
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肿瘤靶向NGR/LPD复合物对人乳腺癌裸鼠移植瘤作用的研究
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作者 王晓娟 张振中 +2 位作者 邵彦江 权松霞 李惠翔 《医学研究杂志》 2010年第8期30-34,141,共6页
目的观察肿瘤靶向NGR/LPD复合物对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法抑瘤实验设有空白对照组、反义核酸组、正义NGR/LPD组、PEI/ASODN组、LPD组、NGR/LPD组。其中,PEI/ASODN组、LPD组及NGR/LPD3组分别设置高低浓度组(100μl,200μl)... 目的观察肿瘤靶向NGR/LPD复合物对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法抑瘤实验设有空白对照组、反义核酸组、正义NGR/LPD组、PEI/ASODN组、LPD组、NGR/LPD组。其中,PEI/ASODN组、LPD组及NGR/LPD3组分别设置高低浓度组(100μl,200μl)作对照考察剂量-效应相关性。通过激光共聚焦显微镜观察药物在裸鼠体内的分布情况。RT-PCR检测hTERTmRNA表达水平,免疫组化检测hTERT蛋白表达的变化。TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果体内分布实验表明,NGR/LPD复合物具有肿瘤靶向性,未经NGR修饰的ASODN、LPD及PEI/ASODN则极少分布在肿瘤组织中。NGR/LPD组的瘤体生长最为缓慢,其最大抑瘤率与其他各组相比具有显著差异(P<0.05),hTERTmRNA和端粒酶活性表达明显低于各对照组(P<0.05),hTERT蛋白表达量下降,肿瘤细胞的凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05)。结论 NGR/LPD在体内有很好的肿瘤靶向性和抑制肿瘤细胞生长的作用。 展开更多
关键词 肿瘤靶向治疗 脂质体-聚阳离子-dna复合物 端粒酶反转录酶(hTERT) MCF-7细胞 裸鼠
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Optimization on cationic liposome-mediated cell transfection of plasmid DNA 被引量:1
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作者 Mingang Ying Changhua Zhuo Weidong Zang 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2011年第5期290-292,共3页
Objective:The development of gene carriers for efficient gene delivery into cells has attracted growing attention in recent years.The aim of this study was to achieve a better outcome of AAV-293 cells transfection by ... Objective:The development of gene carriers for efficient gene delivery into cells has attracted growing attention in recent years.The aim of this study was to achieve a better outcome of AAV-293 cells transfection by plasmid DNA.Methods:We studied the optimal condition for higher efficiency of cationic lipid-mediated cell transfection.Four experimental groups were set.Plasmid DNA and liposome were mixed in each groups at different ratios(μg:μL),1:2.5,1:3.5,1:4.0 and 1:5.0,respectively.LacZ gene functioned as reporter gene,measuring the transfection efficiency of the four groups using the method of X-gal staining.Results:When the ratio was 1:3.5,the cell transfection rate was the highest.While the ratio of 1:2.5 recommended by product manual achieve the lowest transfection rate.Their difference had statistical significance.Conclusion:In order to obtain a higher transfection efficiency,optimization on conditions of the ratio of plasmid DNA to liposome is necessary in cell transfection. 展开更多
关键词 cell transfection cationic lipid plasmid DNA cell culture transfection efficiency
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