阿托伐他汀通过内质网应激调节乙醇作用下AC16心肌细胞超微结构及脂质合成代谢

目的探讨阿托伐他汀通过内质网应激(ERS)对乙醇作用下AC16心肌细胞超微结构及脂质合成代谢的影响及机制。方法建立乙醇作用下AC16心肌细胞ERS模型,并通过Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,确认ERS模型建立成功。使用不同浓度(1、10、100μmol/L)阿托伐他汀处理乙醇作用下AC16心肌细胞,采用Western blotting检测GRP78蛋白的表达,电镜观察心肌细胞超微结构,检测脂质合成代谢关键蛋白固醇调节原件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、甘油三酯含量变化。结果成功建立乙醇作用下AC16心肌细胞ERS模型。相对于乙醇组,1、10、100μmol/L阿托伐他汀组GRP78、SREBP-1c和甘油三酯含量均显著降低。乙醇组细胞形态异常、细胞内线粒体数量明显减少、线粒体增大、线粒体嵴结构紊乱,随着阿托伐他汀干预浓度增加,细胞形态及线粒体结构逐渐趋于正常,其中100μmol/L阿托伐他汀组可见大量线粒体,呈椭圆形,线粒体嵴结构整齐,同正常组。结论阿托伐他汀可抑制乙醇作用下ERS相关因子GRP78的表达,改善酒精性心肌病细胞模型细胞体态、线粒体等超微结构及脂代谢情况。

脂质纳米粒递送靶向Cyp2e1基因的小干扰RNA可减轻小鼠亚急性酒精性肝损伤

目的:研究脂质纳米粒(LNP)递送靶向Cyp2e1基因的小干扰RNA(siRNA)减轻小鼠亚急性酒精性肝损伤的作用及机制。方法:通过微流控技术将靶向Cyp2e1基因的siRNA封装在LNP中得si-Cyp2e1 LNP,并进行表征。筛选si-Cyp2e1 LNP给药的最佳剂量,将40只C57BL/6N雌鼠随机分为空白对照组、模型对照组、si-Cyp2e1 LNP组、LNP对照组和美他多辛组,经10 d的乙醇喂养及最后3 d的乙醇灌胃处理,构建亚急性酒精性肝损伤小鼠模型。测定各组血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛、活性氧、谷胱甘肽、三酰甘油和总胆固醇含量,计算肝脏指数;光学显微镜观察小鼠肝组织病理学变化。实时逆转录聚合酶链反应检测各组小鼠体内氧化应激、脂质合成和炎症相关基因表达的变化情况。结果:与模型对照组比较,si-Cyp2e1 LNP组肝脏指数降低,血清ALT、AST活性降低,肝组织丙二醛、活性氧、三酰甘油和总胆固醇含量下降,SOD活性升高,谷胱甘肽含量增加(均P<0.01)。苏木精-伊红染色结果显示模型对照组肝细胞排列紊乱,细胞质稀疏,有大量的脂肪空泡和坏死,而si-Cyp2e1 LNP组肝细胞大小均匀,排列整齐,肝组织形态结构正常;油红O染色结果显示si-Cyp2e1 LNP组相比模型对照组肝脏脂肪含量减少,未见脂肪滴积聚;抗F4/80单克隆抗体荧光免疫组织化学结果显示si-Cyp2e1LNP组相比模型对照组累积光密度比值降低(P<0.01),无明显炎症反应。与模型对照组比较,si-Cyp2e1 LNP组活性氧形成相关催化基因P47phox、P67phox和Gp91phox的表达减少(均P<0.01),而抗氧化酶相关基因Sod1、Gsh-rd和Gsh-px的表达增加(均P<0.01);脂质代谢相关基因Pgc-1α、Cpt1的mRNA表达增加(均P<0.01),脂质合成相关基因Srebp1c、Acc和Fasn的mRNA表达减少(均P<0.01);肝脏炎症相关基因Tgf-β、Tnf-α和Il-6的表达减少(均P<0.01)。结论:si-Cyp2e1 LNP主要通过降低活性氧水平,增加抗氧化活性,阻断氧化应激途径,减少乙醇诱发的脂肪变性和炎症,保护肝脏免受乙醇引起的损伤,为亚急性酒精性肝损伤提供了一种新的靶向治疗方法。

泽泻降血脂研究概况

泽泻利水渗湿,泄热,化浊降脂,具有显著降脂作用。泽泻水提取物、醇提取物均具有降脂作用,主要为泽泻醇类物质在降脂过程中作用关键,以泽泻醇A最为主要;可能与基因干预、氧化还原、改善微循环及外周阻力,抑制三酰甘油吸收等有关。涉及泽泻方剂众多,降脂研究以出自《金匮要略》的泽泻汤(泽泻五两,白术二两)最为广泛,降脂作用与组方及药物配伍比例等均有关。泽泻汤水煎剂可抑制实验小鼠Hmgcr、Srebf2等基因表达,调节胆固醇合成与代谢基因表达,抑制胆固醇合成,从而降低TC、TG水平,起到降脂作用。泽泻与白术配比动物实验5:2比例降血脂效果最明显,2:1次之;亦有临床报告1:1配比疗效优于5:2。单味泽泻水煎剂和复方煎剂均能影响胆固醇代谢与基因表达,泽泻汤降脂优于单纯泽泻水提取物,单味白术水煎剂对胆固醇代谢基因表达无影响,白术可加强泽泻降脂功效,临床治疗常根据具体病情辨证加减,效果显著。未来可深入挖掘泽泻及相关复方治疗高血脂症等代谢疾病的独特优势,探索作用机制。

Leptin过表达对猪前脂肪细胞脂滴形成的研究

研究Leptin过表达对猪前脂肪细胞脂滴形成的影响,旨为进一步研究Leptin与脂质代谢相关的分子机制奠定理论基础。选取Leptin过表达与野生型猪皮下脂肪组织,在无菌条件下分离前脂肪细胞进行传代培养并诱导分化形成脂滴,通过油红O和Bodipy染色后观察脂滴面积并分析脂质的含量,利用Q-PCR检测脂滴形成相关基因mRNA的表达水平。诱导4 d后可分化形成脂滴,油红O和Bodipy染色的结果显示,Leptin过表达猪前脂肪细胞脂滴数量和甘油三酯含量显著低于野生型(P<0.05);且脂质合成相关基因PPARγ、SCAP、SREPB1和PLIN2的表达水平显著低于野生型(P<0.01)。结果表明,过表达Leptin可促使猪前脂肪细胞中PPARγ、SREPB1、SCAP、PLIN2基因的表达下调,进而抑制脂滴形成。

运动对2,3,7,8-TCDD持续染毒大鼠肝脏LXRa蛋白、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达的影响

研究运动对2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-TCDD)持续染毒大鼠肝脏脂质合成代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)m RNA及转录因子肝X受体a(LXRa)蛋白表达的影响,探讨环境污染物引发代谢性疾病的发病机制,为运动锻炼防控环境健康风险提供理论支持。将24只8周龄雄性大鼠随机分为对照组(C组)、染毒组(T组)、运动染毒组(ET组)。T、ET组腹腔注射首剂量6.4μg·kg-1(以单位体重计)的2,3,7,8-TCDD,之后每隔1周给予上述剂量的21%持续染毒,连续7周。ET组尾部负重(5%体重)进行游泳运动,每周5 d,每次30 min。8周后处死动物,计算肝脏相对重量,检测肝脏甘油三酯(TG)含量,实时荧光定量PCR检测肝脏ACC1、FAS、SCD1 m RNA表达,免疫印迹法(Western Blot)检测肝脏LXRa蛋白表达。结果显示8周2,3,7,8-TCDD持续染毒可显著增加肝脏脂质合成代谢关键酶ACC1、FAS、SCD1 m RNA及转录因子LXRa蛋白表达,8周游泳运动可显著降低染毒大鼠ACC1、FAS、SCD1 m RNA及LXRa蛋白表达。上述结果表明2,3,7,8-TCDD可以引起大鼠肝脏LXRa蛋白表达增高,进而LXRa通过调控靶基因ACC1、FAS、SCD1 m RNA的表达,造成脂质代谢紊乱,肝脏甘油三酯沉积,而有氧运动降低了肝脏中脂质的沉积,提示运动干预可以改善二噁英类污染物造成的肝脏脂质代谢紊乱。