基于AMPK/SIRT1通路探讨延胡索乙素对非酒精性脂肪性肝病体外模型脂质毒性的治疗作用

目的:探讨延胡索乙素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)体外模型脂质毒性的治疗作用。方法:采用油酸(sodium oleate,OA)∶棕榈酸(sodium palmitate,PA)=2∶1的PO联合诱导人肝癌细胞BEL-7402建立NAFLD体外脂质毒性模型并给予延胡索乙素进行干预。将细胞分为正常对照组、模型组、延胡索乙素组(75、100μmol/L)。采用油红O染色法观察细胞内脂滴;CCK-8实验检测细胞活力;试剂盒检测LDH释放量;酶标法检测细胞内TC、TG含量;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;RT-qPCR检测FASN、IL-1、IL-6 mRNA表达;Western Blot检测p-AMPK、AMPK、SIRT1、FAS、HIF-1α、p-JNK、JNK、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:选用PO(800∶400μmol/L)诱导BEL-7402细胞建立NAFLD体外脂质毒性模型。与正常对照组比较,模型组BEL-7402细胞脂质沉积、凋亡水平、LDH、TC、TG显著升高,细胞活力显著降低,FASN、IL-1、IL-6 mRNA表达显著升高,SIRT1、Bcl-2蛋白表达及p-AMPK/AMPK水平显著降低,FAS、HIF-1α、Bax、Caspase-3蛋白表达及p-JNK/JNK水平显著升高(P<0.05~P<0.001)。与模型组比较,延胡索乙素组细胞脂质沉积、凋亡、LDH、TC、TG显著降低,细胞活力显著升高,FASN、IL-1、IL-6 mRNA表达显著降低,SIRT1、Bcl-2蛋白表达及p-AMPK/AMPK水平显著升高,FAS、HIF-1α、Bax、Caspase-3蛋白表达及p-JNK/JNK水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:延胡索乙素可能是通过激活AMPK/SIRT1通路,降低脂质沉积和脂质毒性,进而减轻脂质毒性引起的肝细胞凋亡。

基于脂质肾毒性学说探析慢性肾脏病“湿邪内蕴”的现代生物学机制及“从湿论治”的潜在靶点

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是由多种病因引起肾脏结构损伤和功能障碍的临床综合征。CKD起病隐匿、病程缠绵,“湿”既是病理产物,又可作为致病因素,还能夹杂风、水、热、瘀、痰、浊、毒等一种或多种实邪加重CKD的病情,“湿邪内蕴”在CKD发生发展中起到重要作用,临床“从湿论治”CKD也取得了较好的疗效。自“脂质肾毒性”学说提出以来,越来越多的现代生物学研究逐步揭示了脂代谢在CKD进展中的关键作用与机制。笔者通过对“脂代谢”与“湿”的特点进行梳理,认为脂代谢紊乱可看作是CKD中“湿邪内蕴”的重要微观表现,脂代谢重编程通过影响机体免疫、炎症、水液代谢等方面从而呈现“风湿”“水湿”“湿热”等证,同时“调控脂代谢”亦是“从湿论治”CKD的潜在靶点。本文基于脂质肾毒性学说探析CKD中“湿邪内蕴”的现代科学内涵,并从调控脂代谢角度解析CKD“从湿论治”的生物学机制,希冀为临床中医治疗CKD提供理论依据与新的思路,发挥中医既病防变的优势。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养致大鼠脂质肾毒性中纤维化、炎症和氧化应激的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中转化生长因子(TGF)-β1、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6及NADPH氧化酶(Nox2)的变化,探讨高果糖喂养致大鼠脂质肾毒性中纤维化、炎症和氧化应激的作用及鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组、CDCA组,各16只。8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;TGF-β1、PAI-I、TNF-α、IL-6及Nox2基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重(KW/BW),血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 h UMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);TGF-β1、PAI-I、TNF-α、IL-6和Nox2基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01),CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸(UA)血症CDCA和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织纤维化、炎症因子和氧化应激增强,进而导致肾脏损伤。CDCA通过下调纤维化、炎症因子及氧化应激指标的表达,减轻肾损伤。

中药复方制剂对肾大部切除大鼠脂质肾毒性的影响

目的 :研究中药复方制剂对肾大部切除大鼠脂质肾毒性的影响。方法 :采用 5 /6肾大部切除模型 ,并随机分成假手术组、肾大部切除组、包醛氧淀粉组、肾衰宁组及中药复方制剂高、中、低剂量组。结果 :中药复方制剂能降低总胆固醇、尿蛋白、尿素氮 (BUN)、血肌酐 (Scr) ,并能使体重增加。结论 :中药复方制剂能降低肾大部切除大鼠脂质肾毒性 ,改善肾功能。

脂质肾毒性机制的研究进展

血脂紊乱可损伤多种器官,肾脏是受累器官之一,脂质诱导产生肾脏损伤的机制包括自噬功能缺陷、氧化应激、内质网应激、炎症反应及表观遗传修饰等,本文就其研究进展做以综述。

高脂饮食诱导的高胆固醇血症对雄性Wistar大鼠肾脏的毒性作用

目的 研究高胆固醇血症对雄性Wistar大鼠肾脏的毒性作用。方法 用 5 %胆固醇饲料喂养雄性Wistar大鼠 ,制备高胆固醇动物模型 ,分别于实验第 30、6 0和 90d测定肾功能、2 4h尿蛋白、肾皮质胆固醇 (Ch)及各磷脂含量 ,并进行病理形态及组织定量分析。结果 在实验周期内实验组 (E组 )大鼠血浆肌酐水平无显著变化 ;第 90d ,E组 2 4h尿微量白蛋白、肾皮质Ch、磷脂酰胆碱 (PC)及磷脂酰乙醇胺 (PE)显著高于正常对照组(C组 ) ;病理形态及组织定量分析显示肾小球系膜细胞增生、炎性细胞浸润、系膜基质增多、毛细血管塌陷、上皮细胞足突融合 ,肾小球体积增大。IgG直接免疫荧光阴性 ,肾小球内无电子致密物沉积。相关分析显示肾小球体积、肾皮质Ch含量及 2 4h尿微量白蛋白排泄率等与血浆总胆固醇 (TCh)及低密度脂蛋白 (LDL)浓度呈显著正相关关系。

糖尿病肾病肾小管上皮细胞脂质代谢紊乱的研究进展

随着人们生活水平的提高,糖尿病的患病率呈现一个上升趋势,在发展中国家尤为明显。糖尿病肾病作为糖尿病的血管并发症也随之呈现上升趋势,继而导致医疗费用增高。在糖尿病肾病患者中常常并发高脂血症,并且糖尿病肾病患者患肾病理中出现肾小球、肾小管脂质的沉积。肾小管上皮细胞以脂肪酸氧化作为能量来源,研究表明糖尿病肾病中脂质代谢的紊乱引起肾病的发展,导致肾脏的进行性纤维化。既往的研究着重于对肾小球的变化,但越来越多的研究表明,肾小管上皮细胞的改变在肾脏疾病中与其进展呈正相关。因此,探索糖尿病肾病患者肾脏脂质代谢紊乱原因至关重要。本文就糖尿病肾病脂质代谢紊乱方面,主要从肾小管上皮细胞对脂质的摄取、生成、氧化代谢方面进行综述。

脂质代谢紊乱与足细胞损伤研究进展

脂质肾毒性被认为是慢性肾脏疾病(CKD)的病因之一。脂质代谢紊乱引起脂质异位沉积于肾脏足细胞中,参与CKD发生和进展的病理生理过程,并导致足细胞的胰岛素信号异常、线粒体功能障碍、内质网应激和凋亡。因此,纠正肾脏脂质代谢紊乱是CKD的一个重要治疗目标。本文回顾了脂质肾毒性的研究进展以便更好地理解血脂异常在CKD发病中起到的作用。

高脂饮食诱导大鼠肾损伤及其氧化应激水平的研究

目的:观察高脂饮食诱导健康Wistar大鼠的脂质肾毒性损伤及其氧化应激水平的变化,探讨氧化应激机制在其中的作用。方法:健康Wistar雄性大鼠16只,随机分为普通饲料组与高脂饲料组。普通饲料含热能308.98kcal/100g,高脂饲料在普通饲料基础上,添加20%猪板油,10%白砂糖,0.1%胆盐(w/w),含热能475.67kcal/100g。于实验第14周测定24h尿微量白蛋白、血脂、血糖并取肾组织检测羰基化蛋白和丙二醛(MDA)含量,并对肾脏病理形态学改变进行分析。结果:在14周时,高脂饲料组大鼠24h尿微量白蛋白、血脂以及肾组织羰基化蛋白和MDA含量明显高于普通饲料组(均P<0.01);病理形态学分析显示有肾小球球囊扩张、肾小球基底膜增厚、肾小球外系膜基质增生及肾小球局灶性节段性硬化;但2组大鼠空腹血糖、体质量及血清肌酐水平与普通饲料组相比差异无显著性(均P>0.05)。结论:高脂饮食诱导的高脂血症可导致健康大鼠的脂质肾毒性损伤,氧化应激很可能在其中发挥重要的作用。

PKB/Akt在高脂诱导鼠肾脏损害中的作用

目的:通过建立高脂血症大鼠模型,探讨单纯高脂对肾脏的损伤机制以及胰岛素传导通路中的关键酶PKB/Akt(丝氨酸/苏氨酸激酶)在高脂所致肾脏损害中的变化和意义。方法:高脂高胆固醇喂养Wistar雄性大鼠,建立胰岛素抵抗模型。分别在4周、8周、12周测定大鼠的肾功,包括血尿素蛋(BUN),肌酐(CREA);16周时测定甘油三酯(TG),胆固醇(TC),以及血糖(FBS)和胰岛素(FINS)。8周时行胰岛素增敏剂文迪雅(3mg/kg)灌胃干预四周,并行肾脏病理检查,应用免疫组化法监测PKB/Akt在肾脏的表达。结果:高脂喂饲大鼠4周后,进食量开始减少,体重增加减慢;血BUN、血CREA在4周时已升高,至8周时增加更明显(p<0.001)。文迪雅灌胃四周后肾功改善,但仍高于正常组(p<0.05)。血TG和血TC较正常组升高显著,统计学差异显著(p<0.05)。血胰岛素升高,但胰岛素敏感性降低,胰岛素抵抗指数增加显著,提示胰岛素抵抗形成。肾脏免疫组化PKB/Akt的表达呈现为在肾小球和肾小管分布不均,出现PKB/Akt在损伤较重的肾小球不表达,而在损伤较轻的肾小管表达减弱的现象。结论:饮食诱导的高脂血症可导致健康大鼠产生脂质肾毒性损害以及肾功的降低,并可产生胰岛素抵抗。胰岛素传导通路的损害在肾小球和肾小管表达不同,说明其可能是产生肾脏损伤及胰岛素抵抗的又一原因。胰岛素增敏剂可改善胰岛素抵抗及肾功。

高果糖饮食对大鼠肾脏的毒性作用

目的观察高果糖饮食诱导的高三酰甘油血症对大鼠肾组织病理形态的影响,探讨脂质肾毒性的作用机制。方法将32只大鼠分为正常对照组(n=16)、高果糖组(n=16),8、16周时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖、血脂及24 h尿微量白蛋白;检测大鼠肾皮质三酰甘油含量;采用免疫组化分析Ⅳ型胶原及α-平滑肌动蛋白表达和定位,并观察肾脏病理变化。电镜观察肾脏基底膜变化。结果 8、16周时,高果糖组血中三酰甘油和极低密度脂蛋白,以及肾组织中三酰甘油和24 h尿微量白蛋白均较对照组明显升高(P<0.05);肾脏病理改变加重,基底膜增厚。16周时肾组织Ⅳ型胶原和α-SMA分别为0.427±0.017和0.240±0.014,均显著高于对照组的0.325±0.015和0.115±0.012(P<0.01)。结论高果糖饮食可诱导大鼠高三酰甘油血症,并使肾组织三酰甘油水平增加导致肾脏损伤。

他汀类调脂药物在肾脏病防治中的作用

血脂异常与肾脏病关系密切，它既是许多原发或继发性肾脏病的常见临床表现，本身又参与了肾脏病的发生和发展。早在1982年，Moorhead及其同事就提出了“脂质肾毒性”学说，他们认为高脂血症是肾小球硬化发生、发展的独立致病因素。血脂异常不但是慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者罹患心血管疾病的一个独立危险因素，

高脂血症在肾小球损伤中的作用机制研究进展

自1982年Moorhead提出“脂质肾毒性”的概念以来，高脂血症与肾脏疾病关系得到广泛而深入的研究，高脂血症既是许多原发或继发性肾脏病的常见临床表现，其本身又参与肾脏病的发生和发展。许多研究均证实，高脂血症能够导致肾小球硬化的发生，加速肾衰竭进程，现就高脂血症在肾小球损伤中的作用机制作一综述。

足细胞胆固醇代谢与脂质肾毒性的研究进展

"脂质肾毒性"假说将脂质代谢引入慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的研究领域。脂质的重要组分胆固醇在病理状态下可异位沉积于肾脏及足细胞中,参与CKD发生和进展的病理生理过程。诸多研究已揭示足细胞胆固醇代谢异常的机制及其在足细胞功能改变和肾脏损害中的作用。本文通过总结足细胞胆固醇稳态的调节途径、足细胞胆固醇代谢与CKD的关系,阐述了胆固醇代谢紊乱导致足细胞损伤的新机制,并探讨了针对足细胞胆固醇代谢紊乱治疗的新策略。