CLN5基因复合杂合突变致青少年型神经元腊样脂褐质沉积症的临床特征及基因分析

目的报道及分析CLN5基因复合杂合突变致青少年型神经元腊样脂褐质沉积症(JNCL)患者的临床特征和基因突变类型。方法观察分析1例JNCL病人的临床表现、影像学、脑电图改变,进行全外显子组基因测序,并对其家庭成员进行相关基因检测和临床检查。结果患者于6岁开始视力减退及智力倒退,9岁出现肌阵挛发作、行走不稳。头颅MRI显示小脑明显萎缩,大脑皮质和脑干轻度萎缩。视频脑电图显示弥漫性2.5~3.5 Hz慢活动及颞区尖波。全外显子测序发现患者CLN5等位基因上1个来源于父亲的错义突变:exon2 c.376T>C,以及1个来源于母亲的无义突变:exon3 c.595 C>T。患儿父亲及弟弟均有c.376 T>C突变,两人体查均发现水平性及旋转性眼震,该位点突变目前尚未见报道。结论 CLN5基因c.376T>C和c.595C>T的复合杂合突变可以引起JNCL临床症状、影像学和脑电图改变。对于NCL可疑病例应该对患者及家族成员及早进行相关基因测序明确其基因型,并实施生育指导。

成年型神经元蜡样质脂褐质沉积症的临床和病理特征

目的 报道 2例成年型神经元蜡样质脂褐质沉积症 ( ANCL )临床特点和病理改变。方法 综合分析临床资料和病理结果。结果 患者临床表现为智能障碍、肌阵挛、运动障碍、行为异常及锥体外系症状。电镜下可见神经元及胶质细胞胞浆内有大量脂褐素体沉积。结论 根据起病年龄、临床表现及超微结构特征可诊断为成年型神经元蜡样质脂褐质沉积症 ,脑活检电镜检查是确诊本病的可靠方法。

脂质沉积症骨骼肌纤维的电镜观察

观察脂质沉积症骨骼肌纤维的超微病理变化特征。活检肌组织取自一例16岁少女,透射电镜制样观察。镜下显示病变的肌纤维内堆积有大量脂滴,肌节模糊,肌丝紊乱,Z线断裂,线粒体嵴变态成网管状,胞质内同时伴有糖原颗粒增多,提示脂质的不正常沉积可导致肌纤维内超微结构的病理改变。

神经元蜡样质脂褐质沉积症─比较脑、周围神经及肌活检的诊断价值

本文对４例青少年型ＮＣＬ的脑、周围神经及肌活检进行了超微结构的对比研究。４例脑皮层神经元和胶质细胞胞浆内，可见大量脂褐素体和指纹体，而在周围神经及肌组织内，均未见具有诊断意义的沉积物，与以往文献报道不尽一致。指出周围神经及肌活检，诊断ＮＣＬ的价值尚需进一步观察。

神经元蜡样脂褐质沉积症3例临床及基因变异分析

目的探讨神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)的临床和基因变异特征。方法回顾分析3例NCL患儿的临床资料和基因检测结果。结果3例女性患儿,多表现为认知和运动倒退、不同程度的癫痫发作、视力受累。全外显子测序发现,例1的PPT1基因存在c.124+1G>A及c.413C>T复合杂合变异,其中c.124+1G>A遗传自父亲,c.413C>T遗传自母亲;例2及其哥哥PPT1基因存在c.181C>T及c.536+1G>A复合杂合变异,其中c.181C>T遗传自父亲,c.536+1G>A遗传自母亲;例3的CLN8基因存在c.768G>T及c.209G>T复合杂合变异,其中c.768G>T遗传自父亲,c.209G>T遗传自母亲。c.768G>T和c.209G>T是既往未见报道的新的变异位点。结论基因检测有助NCL的诊断及遗传咨询;PPT1基因变异可呈现不同的临床表现,即使是同一家系具有相同变异位点的个体临床表现也各不相同。

一例青少年型神经元蜡样脂褐质沉积症的基因诊断

目的对一例青少年型神经元蜡样脂褐质沉积症(JNCL)的患者进行临床诊断和遗传学分析,为阐明JNCL遗传机制提供线索和方向。方法对患者进行临床诊断和家系分析,提取患者及其父母DNA,通过全外显子组测序(WES)技术对患者进行基因突变分析,同时对患者及其父母进行Sanger测序验证、突变致病性分析和蛋白序列同源性比对。结果 CLN3存在c.1001G>A(p.Arg334His)和c.154T>C(p.Tyr52His)复合杂合突变,分别遗传其父亲和母亲,突变致病性分析均为有害和致病,蛋白序列同源性比对中同源区域均为高度保守。结论患者可能是由CLN3复合杂合突变导致的青少年型神经元蜡样脂褐质沉积症,其中c.154T>C(p.Tyr52His)位点突变尚未见报道。全外显子组测序技术可作为发现JNCL的诊断手段,可为临床表型复杂的疾病确诊提供依据。

婴儿型神经元腊样质脂褐质沉积症的临床特点(附1例报告)

目的探讨婴儿型神经元腊样质脂褐质沉积症(INCL)的临床特点。方法回顾性分析1例INCL患者的临床资料。结果本例为2岁男童,婴儿期起病,以精神运动发育落后,并出现倒退为主要症状。1岁6个月头颅MRI示:脑萎缩、脑室周围白质减少、胼胝体变薄。2岁头颅MRI:脑萎缩样改变,较1岁6个月MRI进展。棕榈酰蛋白质硫酯酶1(PPT1)基因检测到致病的复合杂合突变:c. 550G> A(p. E184K)和c.362+5G> A。结论婴儿期出现认知、运动落后甚至倒退患儿可能提示INCL,头颅MRI检查若发现脑萎缩更需警惕,确诊通过基因检测。

儿童期神经元蜡样质脂褐质沉积症7型的临床特点及康复训练成效分析:1例报告

神经元蜡样质脂褐质沉积症(neuronal ceroid lipofuscinosis,NCL)是一种罕见的、预后普遍较差的遗传性神经退行性疾病,病理表现为在神经细胞和其他细胞内有黄色自发荧光特性的脂色素沉积,导致以大脑皮质和视网膜为主的神经细胞脱失[1-3]。MFSD8基因突变导致的常染色体隐性遗传性NCL7型(CLN7)多于儿童期发病,目前临床上没有有效的治疗方案[1-3]。

基因疗法有望用于治疗神经元蜡样脂褐质沉积症

美国Weill Comell医学院的基因疗法专家Ronald Crystal及其同事的研究表明，使用基因疗法治疗可延缓神经元蜡样脂褐质沉积症（LINCL）的病情进展。这一研究成果2008年5月14日刊登在Human Gene Therapy杂志上。

加味二至丸通过抑制铁死亡减轻高脂血症小鼠肝脏脂质沉积

目的:观察加味二至丸对高脂血症模型小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组和加味二至丸组,每组10只,另取10只相同背景的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,正常对照组给予普通饲料喂养。造模12周后按分组分别给予相应的药物灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。药物干预10周以后取小鼠血清及肝组织,全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE染色和油红O染色观察小鼠肝组织形态及脂质沉积;试剂盒检测肝组织及血清中还原型谷胱甘肽(GSH)水平及肝组织中的铁含量;RT-qPCR及Western blot检测肝组织中铁死亡相关因子GPx4、SLC7A11、p53、NOX1、COX2和FTH1的mRNA及蛋白表达。结果:与模型组相比,加味二至丸组小鼠血清TC、TG和LDL-C明显降低,HDL-C含量明显升高(P<0.05);血清及肝组织GSH水平明显升高(P<0.05),肝脏铁沉积明显缓解(P<0.05);肝组织脂滴变小且脂肪变性程度明显减轻;加味二至丸组小鼠肝组织p53、COX2和NOX1的mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05),SCL7A11、GPx4和FTH1的mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:加味二至丸可以减轻高脂血症模型小鼠肝脏脂质沉积,可能与抑制肝脏铁死亡途径相关。

风柜斗草提取物通过调控脂质代谢改善小鼠肝脂质沉积症

旨在探究风柜斗草提取物(Sarcopyramis napalensis Wall extract,SNE)对蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的肝脏脂质沉积的作用与机制。本研究将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只,设置MCS组(MCD饲料的对照饲料组)、MCS+风柜斗草提取物组(400 mg·(kg·bw)^(-1))、MCD组、MCD+风柜斗草提取物低、中、高剂量组(100、200、400 mg·(kg·bw)^(-1)),造模及药物干预6周。进行肝组织切片HE染色、天狼猩红染色,检测血清碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平及丙二醛(MDA)含量以评估肝脂质沉积、肝纤维化以及肝抗氧化情况。使用Western blot技术检测腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白的激活情况,使用qRT-PCR技术检测固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1c)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、脂肪酸转运蛋白-3(FATP-3)、脂肪酸转运蛋白-4(FATP-4)、细胞间黏附分子-l(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-l(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA表达水平,同时采用LC-MS/MS技术进行肝组织非靶向脂质组学分析。结果表明,给予200、400 mg·(kg·bw)^(-1)剂量的风柜斗草提取物时均可显著改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性,减少炎症簇以及肝纤维化程度。给予风柜斗草提取物100、200、400 mg·(kg·bw)^(-1)时均可显著降低MCD饲料饲喂的小鼠血清中ALT和AKP的活力以及肝组织中MDA的含量,显著提高小鼠肝中GSH-Px的活力。Western blot及qRT-PCR检测结果显示,风柜斗草提取物显著激活MCD饲料饲喂的小鼠肝组织AMPK;显著抑制MCD饲料饲喂的小鼠肝组织SREBP-1c、L-FABP、FATP-3、FATP-4、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、TIMP-2的mRNA表达水平。肝脂质组学检测结果显示,风柜斗草提取物显著降低MCD饲料饲喂的小鼠肝中甘油三酯(TG)、磷脂酰甘油(PG)以及神经酰胺(Cer)的相对含量;显著提高鞘磷脂(SM)以及辅酶Q9相对含量。结果提示,风柜斗草提取物可通过AMPK/SREBP-1c途径抑制TG合成,以及通过抑制FATP与L-FABP表达来减少肝对脂肪酸的摄取,从而改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性;通过提高MCD饲料饲喂的小鼠肝组织中SM和辅酶Q9相对含量以及降低Cer相对含量,改善肝细胞氧化应激损伤情况,进而改善MCD饮食诱导的小鼠肝炎症和纤维化,最终达到改善肝脂质沉积症的作用。

CLN1型神经元蜡样脂褐质沉积症伴遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征1例患儿的分析

目的分析1例神经元蜡样脂褐质沉积症1型(CLN1)合并遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征(HHCS)患儿的临床及遗传学特征。方法以2020年11月郑州大学第一附属医院收治的1例患儿作为研究对象。收集患儿的临床资料,对其进行基因检测,并结合文献回顾分析其临床和遗传变异的特点,为早期识别提供思路。结果患儿男,3岁,以视力损害、进行性认知和运动功能倒退、癫痫发作为主要表现。磁共振成像提示双侧大脑半球脑沟加深、髓鞘发育明显落后。棕榈酰蛋白硫酯酶活力偏低(8.4 nmol/g/min,正常参考值:132.2~301.4 nmol/g/min),血清铁蛋白升高(2417.70 ng/mL,正常参考值:30~400 ng/mL)。眼底成像示视网膜色素变性。全外显子测序发现患儿PPT1基因存在c.280A>C及c.124-124+3delG复杂杂合突变,分别遗传自父亲和母亲,二者既往均未见报道。此外,其FTL基因存在c.-160A>G杂合变异,遗传自父亲。结合患儿的临床表型和遗传变异,诊断其为CLN1和HHCS。结论PPT1基因的c.280A>C和c.124-124+3delG复合杂合变异及FTL基因的c.-160A>C变异可能是患儿的遗传学病因。临床对于视力损害进展较快的CLN1患儿,应进一步完善眼科检查并详细询问家族史,对高度怀疑合并HHCS的患儿应尽早通过基因检测确诊。

基于干细胞的胶质细胞源性神经营养因子和睫状神经营养因子对CLN7型神经元蜡样脂褐质沉积症小鼠模型视网膜退行性病变的治疗研究

目的观察CLN7型神经元蜡样脂褐质沉积症小鼠模型视网膜变性的形态学和功能学改变,以及基于神经干细胞(NSC)的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和(或)睫状神经营养因子(CNTF)对小鼠光感受器细胞的治疗效果。方法鼠龄14 d的CLN7型小鼠100只随机分为实验组、对照组,分别为80、20只。鼠龄14 d的C57BL/6J小鼠20只设定为野生型组(WT组)。对照组、WT组小鼠不作任何处理,于2、4、6月龄时,采用免疫组织化学染色观察视网膜视锥细胞、视杆-双极细胞、视锥-双极细胞分布和数量变化;采用视网膜电图(ERG)检查记录暗视a、b波及明视b波振幅。实验组小鼠随机选取单侧眼为实验眼,玻璃体腔分别注射2μl CNTF-NSC、GDNF-NSC、CNTF-NSC和GDNF-NSC 1:1细胞混合物(GDNF/CNTFNSC),并据此再分为CNTF-NSC组、GDNF-NSC组、GDNF/CNTF-NSC组;对侧眼玻璃体腔注射不含神经营养因子(NTF)的NSC 2μl作为自身对照组。实验组不同治疗亚组于小鼠2、4月龄时,采用免疫组织化学染色观察光感受器细胞的数量;采用ERG检查记录暗视a、b波及明视b波振幅;小鼠4月龄时,观察移植的NSC分化情况和NTF表达。两组间比较采用双因素方差分析。结果与WT组比较,小鼠2、4、6月龄时,对照组小鼠周边区视网膜视锥细胞密度(F=285.10),中央区、周边区视网膜视杆-双极细胞密度(F=823.20、346.20)、视锥-双极细胞密度(F=356.30、210.60)以及暗视a、b波振幅(F=1911.00、387.10)均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);小鼠4、6月龄时,对照组小鼠中央区视网膜视锥细胞密度(F=127.30)及明视b波振幅(F=51.13)均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显微镜观察发现,实验组小鼠玻璃体内移植的NSC优先分化为星形胶质细胞,并稳定高水平表达CNTF和GDNF。实验组不同治疗亚组与其自身对照组在不同月龄时视网膜光感受器细胞核行数比较:CNTF-NSC组,2月龄:整个、中央区、周边区差异有统计学意义(F=31.73、75.06、75.06,P<0.05);4月龄:整个、周边区差异有统计学意义(F=12.27、12.27,P<0.05)。GDNF/CNTF-NSC组,2、4月龄:整个(F=27.26、27.26)、周边区(F=16.01、13.55)差异有统计学意义(P<0.05)。GDNF-NSC组,不同月龄整个、中央区、周边区差异均无统计学意义(F=0.00、0.01、0.02,P>0.05)。结论随年龄增长,CLN7型小鼠表现出渐进性加重的退行性变化,这种变化在光感受器细胞和双极细胞的形态结构及功能上是一致的。基于NSC玻璃体内递送的CNTF和GDNF/CNTF均对光感受器细胞有保护作用,但联合使用GDNF/CNTF并未展现出比各自单独使用时更显著的协同保护效果。GDNF对CLN7型小鼠视网膜的形态和功能均没有治疗效果。

中性脂肪沉积症伴肌病患者的外周血细胞形态特点并文献复习

背景中性脂肪沉积症伴肌病(NLSDM)起病隐匿、症状缺乏特异性,由于患者临床表现不同,可能就诊于神经科、心血管疾病科等多个科室,容易导致漏诊和误诊。其明确诊断有赖于基因检测,但多数患者由于不能及时明确诊断而延误治疗。此类患者外周血白细胞具有典型的形态学特征,可提示临床医生及时完善基因检测以明确诊断。目的探讨NLSDM患者的外周血细胞形态特点。方法选取2021年6—8月北京大学第一医院收治的3例NLSDM患者为研究对象,收集患者外周血并制备血涂片,分别采用瑞-姬氏染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)、髓过氧化物酶染色(MPO)和糖原染色(PAS)观察血细胞形态特点。结果瑞-姬氏染色:中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞及单核细胞胞质中均可见数个大小不一的圆形空泡。NAP染色:NLSDM患者的中性粒细胞胞质中呈阴性反应,与正常人和感染患者差异明显,感染患者阳性率和积分值均明显增高;MPO染色:NLSDM患者的中性粒细胞胞质中呈阳性反应,与正常人的中性粒细胞阳性程度接近,但弱于感染患者(阳性颗粒粗大并覆盖在细胞核上,导致细胞核结构不清);PAS:NLSDM患者、正常人及感染患者的中性粒细胞阳性反应程度均未见明显差异。结论NLSDM患者外周血多种白细胞胞质中均可见大小不等的空泡,而中性粒细胞空泡与感染时的中毒性改变不同,通过NAP可对其初步鉴别,这种形态学异常是NLSDM的特征性改变。

睾酮对雄性高脂血症大鼠血浆脂质代谢的影响

目的研究血浆雄激素水平变化对高脂血症大鼠血浆脂质代谢的影响。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为低脂组、对照组、去势组 (切除双侧睾丸及副睾 )、治疗组 (环戊丙酸睾酮 2 .5mg/kg ,每周 2次肌注 ) ;实验时间12周。结果 :睾酮对血浆总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)浓度影响不明显 ,但可升高血浆HDL水平 ,降低血浆LDL +VLDL水平 ,促进血浆脂质过氧化物代谢过程 ,使血浆脂质过氧化物 (LPO)浓度升高 ,降低肝脏TC、TG含量 ,促进主动脉脂质沉积。结论 :睾酮可能通过对血浆脂质代谢的影响促进高脂血症大鼠主动脉脂质沉积。

PNPLA2基因新发纯合移码突变导致中性脂肪沉积症伴肌病1例报告

中性脂肪沉积症(neutral lipid storage disease,NLSD)为一种常染色体隐性遗传的脂质沉积性肌病,包括中性脂肪沉积症伴鱼鳞病(neutral lipid storage disease with iehthyosis,NLSDI)和中性脂肪沉积症伴肌病(neutral lipid storage disease with myopathy,NLSDM)。前者在我国尚未见报道。后者是由PNPLA2(patatin-like phospholipase domain-containing protein 2,PNPLA2)基因突变致脂肪甘油三酯水解酶(adipose tridyceride lipase,ATGL)功能缺陷而导致的代谢性肌病,该病于2007年由法国的Fischer等[1]首次报道。截至2016年,国内外累计报道经基因检测证实的NLSDM病例不超过50例,其中中国患者仅数例[2]。