黄芩甙对过氧化脂质生成的抑制作用

研究了从黄芩中提取得到的黄芩甙的抗氧化作用。ＮＩＨ小鼠ｐｏ２５，５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ黄芩甙，连续３ｄ，可以显著抑制ｉｐＦｅＣｌ２－ＡＤＰ－ＮＡＤＰＨ混合物诱导的过氧化脂质的生成，抑制率分别为７５％和８４％；体外试验，０．１，０．２和０．４ｍｍｏｌ／Ｌ的黄芩甙可以显著抑制由ＦｅＣｌ２－ＡＡ和ＡＤＰ－ＮＡＤＰＨ诱导的大鼠肝匀浆过氧化脂质的生成，且呈剂量依赖关系。提示黄芩甙有良好的抗氧化作用。

MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用

目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ3'-UTR报告基因质粒p MIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化。结果在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P<0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒p MIR/LXRβ的荧光素酶活性(P<0.05)。同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用。结论 miR-7可通过结合在LXRβ3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成。

猪PAANCR组织表达谱分析及其对脂质生成的影响

前期通过高通量测序比较去势和非去势猪皮下脂肪长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达差异,筛选到一个表达差异极显著的novel lncRNA——PAANCR,本试验旨在研究PAANCR在猪育肥不同阶段不同组织中的表达规律及其与脂质生成的关系。选用10头健康长×大二元杂交仔猪,在90和210 d各随机选取3头屠宰取样,使用实时荧光定量PCR方法检测PAANCR的表达谱,同时在3T3-L1细胞中使用siRNA干扰PAANCR的同源体lncRNA B130024G19Rik,通过油红O染色和实时荧光定量PCR分析其对脂肪沉积的作用。结果发现,PAANCR具有明显的组织特异性和发育特异性,其在肺脏、子宫、脾脏、肾脏和脂肪组织中表达量较高,而在肝脏、小肠和脑中的表达量随着年龄增长而增加,在肌肉组织中几乎不表达。同时,通过siRNA介导的干扰能够显著抑制PAANCR同源体的表达量,PAANCR同源体表达量降低后,关键成脂分化和脂质沉积调控基因表达量也随之减少。提示PAANCR可以作为调控猪脂质生成的候选因子,对于深入研究lncRNA参与调控猪脂质生成的分子机制具有重要意义。

猪miR-199a-5p对脂质生成的影响及其靶基因的预测和分析

本研究旨在分析miR-199a-5p对猪肌内脂肪细胞脂质生成的影响及作用机制。采集淮南猪不同育肥时期(育肥前期、中期和后期)的背最长肌和皮下脂肪组织,通过实时荧光定量PCR分析其表达变化趋势;合成miR-199a-5p的mimics,转染猪原代肌内脂肪细胞,诱导分化后通过油红O染色观察过表达miR-199a-5p对脂质生成的影响;结合之前筛选到的脂肪型和瘦肉型猪差异表达mRNAs、lncRNAs和circRNAs,使用miRanda软件筛选miR-199a-5p的靶分子,并用GO和KEGG富集分析法对这些mRNAs、lncRNAs的共表达基因和circRNAs的来源基因进行功能分析。结果显示,随着育肥进程,miR-199a-5p在背最长肌中表达量持续上调,而在皮下脂肪组织中表达量先下调后上调;过表达miR-199a-5p可抑制肌内脂肪细胞的脂质生成。共筛选到9个mRNAs、5个lncRNAs和1258个circRNAs包含miR-199a-5p结合位点,GO分析主要富集于内质网和肌动蛋白结合,KEGG分析发现主要富集于糖、脂质和蛋白质代谢。提示miR-199a-5p可能通过与lncRNAs和circRNAs互作间接调控靶基因,参与调控肌肉发育、脂质生成和代谢,可作为影响肉质性状的候选miRNA。

7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷通过SREBP1c通路缓解油酸诱导HepG2细胞脂质生成（英文）

本研究目的是为了探究7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷(OXL-1)对油酸诱导的HepG2细胞形成的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型中脂质生成的潜在抑制作用。油红染色显示OXL-1能显著降低油酸诱导的甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的脂质生成。基因芯片分析发现,与对照组相比,HepG2细胞经OXL-1处理后固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)、脂肪酸合酶(FAS)及乙酰辅酶a羧化酶α(ACCα)转录表达显著降低。相比较于对照组,OXL-1组甘油三脂减少56. 87%±9. 08%(P <0. 01),总胆固醇减少24. 96%±5. 45%(P <0. 01)。同时也使SREBP1c、FAS和ACCα蛋白质表达水平降低。OXL-1组相比OA组,其SREBP1c、FAS和ACCα的蛋白质表达分别下调52. 62%±6. 38%(P <0. 01)、51. 14%±8. 75%(P <0. 01)和19. 46%±3. 64%(P <0. 05)。结果说明,OXL-1可能经由SREBP1c、FAS和ACCα的转录和蛋白质水平的调控作用来阻止OA诱导的脂质蓄积。综上结果揭示,OXL-1可能在非酒精性脂肪肝病细胞模型中作为一种阻止脂质积累的新型化合物。

miR-378促进脂质生成相关靶基因鉴定

旨为验证miR-378在脂肪细胞中的功能,及其脂质相关靶基因的筛选和鉴定。利用miR-378类似物转染3T3-L1细胞,验证miR-378在脂肪细胞中的功能;根据靶标位点的保守性以及促脂功能确定miR-378潜在靶基因;采用microRNA pulldown技术验证miR-378与靶基因的靶标关系;运用双荧光素报告基因实验确定miR-378与靶基因的结合位点。结果发现,miR-378可以通过增加脂质合成和减少脂质分解两条途经来促进脂肪细胞中脂质生成,确定了miR-378与Runx1t1、Galnt3、和RAB10的靶标关系以及结合的靶位点。

乌腺金丝桃提取物对降低脂质生成与改善肥胖大鼠肝脂质沉积的作用

目的探讨乌腺金丝桃醇提物(HACE)对抑制大鼠肥胖和恢复肝功能状态的作用。方法本研究选用共40只SD雄性大鼠根据正常饮食和高脂饮食分为5组,每组共8只。其中高脂饮食诱导下的肥胖动物组分别采用蒸馏水、乌腺金丝桃提取物100、200 mg/kg和二甲双胍(Met)100 mg/kg进行灌胃干预。喂养8w后禁食过夜16h后称重并测量空腹血糖,麻醉解剖取血进行生化指标检测,收集肝脏、附睾脂肪、肾周脂肪和腹部脂肪,称重冻存。肝脏切去一叶置于甲醛中,进行H&E组织学染色分析。结果与正常组比较,模型组大鼠生化指标中血脂水平和肝损伤水平显著升高(P<0.01)。而与模型组大鼠相比,HACE组和Met组中的TC、TG、LDL-C、AST和ALT水平显著降低(P<0.01)。并且HACE组和Met组的Leptin水平显著降低(P<0.01),Adiponectin水平显著恢复(P<0.01)。此外,研究表明,与高脂饮食大鼠组相比较,HACE组和Met组的大鼠体重、肝重、脂肪含量的增长均得到有效抑制(P<0.01),肝脏内TGs、TC水平降低(P<0.01)。经H&E染色后的组织学观察结果发现,补充HACE后,肥胖导致的肝脏脂质沉积和囊泡增多现象得到了显著改善,表明HACE可有效改善血脂异常和肝功能损伤,抑制脂肪的形成。RT-PCR研究进一步的表明,HACE是通过降低脂质生成相关的转录因子及其下游基因的表达,进而抑制大鼠肥胖的发生。结论HACE可有效抑制肝脏脂质生成作用和甘油三酯的产生,保护肥胖大鼠肝功能的损伤,改善代谢紊乱及调控相关转录因子的转录途径,进而抑制肝脏脂肪变性。

电针激活SIRT1介导Wnt/β-catenin通路调控脂质生成改善肥胖的机制研究

目的:探讨电针通过激活沉默信息调节因子1(SIRT1)介导Wnt/β-catenin通路调控脂质生成改善肥胖的机制。方法:从75只Wistar雄性大鼠中随机挑选10只为正常组,采用标准饮食喂养;剩余大鼠采用高脂饮食构建肥胖大鼠模型,共喂养8周。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、电针组、电针联合抑制剂组、激活剂组,每组10只。电针组电针"关元""中脘""足三里""丰隆",连续波,频率2 Hz,电流强度约1 m A,每次留针20 min;电针联合抑制剂组尾静脉注射Sirtinol溶液,并予电针同步干预;激活剂组予白藜芦醇溶液灌胃,均隔日1次,每周3次,连续干预8周。记录各组大鼠干预前后体质量、Lee’s指数,检测各组大鼠干预后血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)水平,比较各组大鼠干预后白色脂肪组织(WAT)质量、脂肪细胞面积,并采用Westernblot法检测各组大鼠干预后WAT中SIRT1、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达。结果:干预后,与模型组比较,电针组、激活剂组大鼠体质量减轻、Lee’s指数下降(P<0.01,P<0.05),电针联合抑制剂组大鼠体质量减轻(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、FFA含量及WAT质量均升高(P<0.01),脂肪细胞面积增大(P<0.01);与模型组比较,电针组、激活剂组、电针联合抑制剂组大鼠血清TC、TG(除外电针联合抑制剂组)、FFA含量及WAT质量均降低(P<0.01,P<0.05),脂肪细胞面积减小(P<0.01,P<0.05);与电针组比较,电针联合抑制剂组大鼠脂肪细胞面积增大(P<0.05)。与正常组比较,模型组WAT中SIRT1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达减少(P<0.01),GSK3β、PPARγ蛋白表达增多(P<0.01)。与模型组比较,电针组和激活剂组WAT中SIRT1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达增多(P<0.05,P<0.01),GSK3β和PPARγ蛋白表达减少(P<0.01,P<0.05);电针联合抑制剂组GSK3β蛋白减少、β-catenin蛋白增多(P<0.05)。结论:电针可明显改善肥胖模型大鼠体质量、Lee’s指数、血脂代谢,降低WAT质量以及脂肪细胞大小,其机制可能与上调WAT中SIRT1蛋白表达,激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制下游成脂基因PPARγ的表达,从而影响脂质生成有关。

外源油脂的添加促进卷枝毛霉脂肪酸的积累

卷枝毛霉(Mucor circinelloides)可利用多种碳源实现脂质积累,不同的碳源对其脂质积累的影响不同。在不改变其它发酵培养条件和碳氮比的情况下,以100%葡萄糖为对照,添加不同比例的外源油脂(大豆油)作为另一种碳源,对其细胞生长和脂质生成的影响进行了研究。采用氯仿-甲醇法提取脂质,通过气相色谱技术(gas chromatography,GC)测定其脂肪酸组成及含量。同时,采用实时荧光定量PCR法检测了与脂肪酸合成相关的脱饱和酶基因在菌株中的表达情况。结果表明:碳氮比不变的情况下,最佳碳源混合比例为葡萄糖35 g/L,大豆油24.3 g/L,该培养基中生长的卷枝毛霉的生物量、脂质含量和脂质产量在发酵前期迅速增长,在发酵后期的增长趋势逐渐平缓,在发酵72 h之后略有下降,其最高生物量、脂质含量和产量分别为19.60 g/L、42.62%和8.35 g/L,而对照组(以葡萄糖为单一碳源)仅为14.72 g/L、34.41%和5.06 g/L。与对照组相比,经混合碳源培养的卷枝毛霉的生物量、脂质含量和产量分别提高了33.15%、23.8%和65.10%,且可以将大豆油中的α-亚麻酸(α-Linolenic acid,ALA)吸收并储存在细胞内,同时,其生物体内△12脱饱和酶的表达量显著(P<0.05)上升,而△9和△6脱饱和酶的表达量显著(P<0.05)下降,这解释了脂肪酸含量的变化,并为进一步探究其他外源油脂对卷枝毛霉产脂的影响奠定了基础。

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的:考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法:采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP)亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptorγ,PPARγ)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果:异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK m RNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论:异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。

银杏叶提取物中三种黄酮对3T3-L1细胞成脂代谢的影响

银杏叶提取物(EGB)包含了两大类活性成分——黄酮类和萜内酯类,并具有多种药用价值。本研究以3T3-L1细胞为研究对象,通过MTT法、油红O染色法和荧光定量PCR法研究银杏叶提取物中三种黄酮对脂肪细胞的成脂代谢影响。结果显示,山奈酚、槲皮素和异鼠李素在较高浓度下(100μmol/L)对成熟脂肪细胞的细胞毒性较为显著,分别是44%、26%和14%。山奈酚和槲皮素在100μmol/L时对前脂肪细胞的增殖抑制作用为分别27%和19%,异鼠李素对前脂肪细胞的增殖抑制效果小于5%,影响较小,以上数值均有统计学意义。油红O染色半定量结果表明异鼠李素,山奈酚和槲皮素在相同浓度下(50μmol/L)对脂质积累的抑制率分别为43%、29%和17%,且具有统计学意义。荧光定量PCR结果表明三种银杏黄酮在较高浓度下能够显著抑制细胞分化终末期的关键转录因子PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达,进而影响其下游与脂质合成相关的酶和蛋白的转录水平表达。综上,三种银杏黄酮对3T3-L1细胞的主要影响方式是对成熟脂肪的细胞毒性以及对脂肪细胞分化和脂质积累的抑制。

秦皮甲素对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝的保护作用研究

目的研究秦皮甲素对高脂饮食诱导小鼠脂肪肝病的保护作用及可能机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、秦皮甲素低剂量组和秦皮甲素高剂量组。对照组小鼠给予正常饮食,模型组和药物组给予高脂饮食处理12周。秦皮甲素低、高剂量组(20和40 mg·kg^-1)灌胃给药12周。全自动生化仪检测血脂指标,生化试剂盒检测血清中AST和ALT水平,H&E和Masson染色检测肝脏变性情况,Real-time PCR和Western blot法测定肝脏组织中脂质合成基因PPAR-γ、FASN以及LXR的表达。结果秦皮甲素可逆转高脂饮食诱导小鼠血脂指标的异常,降低ALT和AST的水平,降低高脂饮食诱导的肝脏脂肪变性以及纤维化,降低高脂饮食诱导小鼠肝脏中脂质合成基因PPAR-γ、FASN和LXR的表达。结论秦皮甲素可抑制高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病的生成,其机制与其调节肝脏脂质生成基因的表达有关。

猪miR-378种子序列的多态性对其功能以及胴体性状的影响

本研究旨在探索miR-378种子序列多态性对其结构、功能和猪胴体性状的影响。利用荣昌猪和亚洲野猪的单核苷酸多态性(SNP)进行群体遗传选择分析,预测miR-378种子序列的多态性对其结构的改变,统计不同猪种中等位基因频率;采用microRNA类似物验证种子序列多态性对miR-378在脂肪细胞中功能以及相关基因表达的影响;运用猪屠宰测定数据与miR-378基因型进行关联分析。结果发现,荣昌猪miR-378位点具有极强的受选择信号,miR-378-3p种子序列第5位出现了A>G的突变,在不同猪种中该位点等位基因频率不同,其中人工选择越强的猪种A等位基因频率越高;该突变会抑制miR-378在脂肪细胞中促进脂质生成的功能,同时会消除miR-378对脂肪分化相关基因(PGC-1α和PGC-1β)以及脂肪分解代谢相关基因(HSL、ATGL和CGI-58)的调控作用;而且该位点的基因型与猪胴体性状显著相关,GG型的背膘厚显著高于AG型和AA型,AA型眼肌面积显著高于GG型。本研究发现的miR-378种子序列这个多态性位点可作为猪生长、胴体性状辅助选择的分子标记应用于猪的育种实践中。

SREBP-1相关通路为靶点的NAFLD发生机制及治疗进展

非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)是引起肝损伤最常见的原因之一,其特征是肝脏外源性游离脂肪酸增多或内源性从头生成增加,导致肝细胞中甘油三酯的过度积累。甾醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是一个转录因子家族,通过调控内源性胆固醇、脂肪酸(FA)、三酰基甘油和磷脂合成所需的一系列酶来调节脂质稳态。SREBP-1是增加肝脏脂肪酸和甘油三酯合成的主要转录因子,本文回顾了近年来以SREBP-1相关通路为靶点NAFLD的研究进展。

HBx蛋白通过C/EBPα/SREBP-1通路调节脂代谢促进肝癌细胞增殖

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)编码的x蛋白(HBx)调节人肝癌细胞HepG2脂代谢和增殖的作用及其机制。方法用HBx表达质粒瞬时转染HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,油红O染色检测脂滴堆积情况,Western blot检测脂代谢相关基因CCAAT/增强子结合蛋白α (C/EBPα)、固醇调节元件结合蛋白-1 (SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FASN)和乙酰辅酶A羧化酶1 (ACC1)的蛋白水平;MTT、油红O染色和Western blot检测C/EBPα在过表达和低表达的情况下对HBx调节HepG2细胞脂代谢和增殖的影响。组间数据比较采用方差分析。结果 HBx明显促进人肝癌细胞HepG2增殖,并呈剂量和时间依赖关系(F = 32.82,P < 0.001;F = 58.21,P < 0.001);HBx明显促进HepG2细胞的脂质堆积(F = 22.65,P < 0.001),且使脂质代谢的重要调节因子C/EBPα和SREBP-1、脂肪酸合成的限速酶FASN和ACC1的蛋白水平显著升高。C/EBPα过表达进一步加强了HBx对HepG2细胞增殖、脂滴堆积和脂生成相关基因表达的促进作用;相反,C/EBPα低表达削弱了HBx对细胞增殖、脂滴堆积和脂生成相关基因表达的促进作用。结论 HBx可能通过C/EBPα/SREBP-1信号通路,影响人肝癌细胞HepG2的脂质生成,促进其增殖。