TLR2介导鸡毒支原体脂质相关膜蛋白诱导DF-1细胞表达IL-1β的研究

Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示LAMPs可以诱导DF-1细胞分泌IL-1β,并确定最佳刺激时间为6 h,最佳刺激剂量为1μg/m L。此外,通过构建TLR2重组表达质粒p CMV-HA-TLR2,并将该质粒转染DF-1细胞进行过表达及通过抗体封闭TLR2的两种处理方式,处理后采用LAMPs刺激细胞。经检测显示:TLR2过表达处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平显著升高,而抗体处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平下调。结果表明,LAMPs能够与DF-1细胞膜上的TLR2受体结合,有效的诱导DF-1细胞表达并分泌IL-1β,而且IL-1β的释放可能与天然免疫系统的经典通路即NF-κB信号通路调控有关。本研究为阐述MG的致病机制提供相关实验依据。

解脲脲原体脂质相关膜蛋白通过激活核因子κB调控诱导性一氧化氮合酶在小鼠巨噬细胞中的表达

为探讨解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的分子机制,从解脲脲原体提取的脂质相关膜蛋白,刺激小鼠巨噬细胞,以RT_PCR、Western blot等方法分析iNOS的表达及NO的产生;用细胞免疫化学、间接免疫荧光及Western blot等方法检测核因子κB(NF_κB)的激活,另外检测了NF_κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及NF_κB激活的影响。结果表明,解脲脲原体的LAMPs通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白,且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,NF_κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX),可抑制NF_κB的激活及iNOS的表达。由于解脲脲原体的脂质相关膜蛋白通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS和产生NO,因而可能是一个重要的致病因素。

肺炎支原体脂质相关膜蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制

目的研究肺炎支原体脂质相关膜蛋白对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响,初步探讨肺炎支原体引起动脉粥样硬化的机制。方法用ELISA检测肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导体外培养的巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用流式细胞术检测脂质相关膜蛋白诱导巨噬细胞的凋亡率;West-ern blot方法检测经脂质相关膜蛋白作用的巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响。结果脂质相关膜蛋白能促进巨噬细胞分泌高水平的TNF-α、IL-1β和IL-6和发生凋亡;并能使NF-κB从细胞浆中转位到细胞核内;吡咯啉烷二甲基硫脲能显著抑制巨噬细胞NF-κB的激活,且能抑制脂质相关膜蛋白诱导的巨噬细胞分泌细胞因子和发生凋亡。结论肺炎支原体脂质相关膜蛋白可通过激活NF-κB诱导巨噬细胞分泌前炎症细胞因子和促进凋亡,可能在动脉粥样硬化的发病中起重要作用。

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1从而负调控细胞因子分泌

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白（LAMP）能否诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1（HO-1），从而影响细胞因子的产生。方法体外培养胎盘滋养层细胞，用0．5—5wg／mLLAMP作用4-12h。实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子2（Nrf2）的核转位；2’，7’-二氯二氢荧光黄二乙酸酯（H2DCFDA）检测活性氧（ROS）产生；采用N-乙酰半胱氨酸（NAC）或Nrf2 siRNA处理滋养层细胞，观察其对HO-1表达的影响。采用HO-1的激动剂钴原卟啉（CoPP），抑制剂锌原卟啉（ZnPP）或HO-1 siRNA处理细胞，ELISA检测处理前后LAMP对诱导肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素1β（IL-1β）分泌的影响。结果LAMP能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白表达，并能诱导其产生ROS以及促进Nrf2核转位。ROS抑制剂NAC预处理后，可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。同时，Nrf2 siRNA转染后，HO-1表达显著减少。采用ZnPP处理滋养层细胞，或RNA干扰HO-1表达后，可促进LAMP诱导滋养层细胞分泌TNF—α和IL-1β，而CoPP处理能进一步降低TNF—α和IL-1β水平。结论LAMP能通过ROS／Nrf2诱导滋养层细胞表达HO-1，从而抑制细胞因子的过度分泌。

牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究

为研究牛支原体(M.bovis)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以M.bovis及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒p EGFP-p65转染EBL细胞,以LAMPs刺激EBL细胞,通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光定量PCR结果显示,M.bovis及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL-1β的表达;而且LAMPs作用的最佳剂量为2μg/m L,最佳时间为12 h。同时,激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内,从而激活NF-κB信号通路,诱导IL-1β上调表达。

牛支原体脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞差异表达的转录组学研究

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析M.bovis LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组与对照组EBL细胞的c DNA文库并对其进行高通量测序,利用MAS3.0软件对差异表达基因进行筛选,结果显示共筛选得到706个差异表达基因,其中上调和下调差异基因分别为364个和342个;GO注释显示,差异表达基因编码蛋白主要与细胞黏附、免疫应答以及细胞增殖等相关;利用荧光定量PCR对部分差异表达基因(PIM2、F2RL1以及PTPN2)的表达情况进行验证,结果与RNA-seq测序结果相符。本研究为进一步阐述M.bovis的致病机制及宿主的免疫应答机制提供依据。

脂质相关膜蛋白体外诱导hBD-2基因表达的研究

目的探讨解脲支原体(UU)的L AMPs对β-防御素表达分泌量与作用时间的研究。方法应用LAMPs体外诱导绒毛膜及胎盘组织hBD-2基因表达,RT-PCR检测hBD-2 mRMA表达。结果不同浓度的LAMPs均能明显诱导绒毛膜及胎盘组织产生hBD-2,相同浓度的LAMPS刺激绒毛膜及胎盘组织12 h,24 h绒毛膜及胎盘组织的HBD-2 mRNA表达量不同。结论绒毛膜及胎盘组织HBD-2 mRNA表达与LAMPs呈明显的剂量依赖性;24 h内绒毛膜及胎盘组织的HBD-2 mRNA表达呈现出时间依赖性。

生殖支原体脂质相关膜蛋白通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶

目的探讨生殖支原体脂质相关膜蛋白（LAMPs）诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶-1（HO-1）的分子机制。方法用0.5~5μg/m L生殖支原体LAMPs处理体外培养的胎盘滋养层细胞4~12 h,采用实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子-2（Nrf2）的核转位;比色法观察HO-1的酶活性;2＇,7＇-二氯二氢荧光黄二乙酸酯（H2DCFDA）检测活性氧产生。分别采用酪氨酸激酶c-Src抑制剂PP1、活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）和Nrf2 siRNA干预,观察HO-1的表达情况。结果生殖支原体LAMPs能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达,上调其酶活性。同时,LAMPs也能诱导其产生活性氧,并促使Nrf2核转位。PP1和NAC预处理后,可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。采用Nrf2 siRNA转染后,HO-1的表达显著减少。结论生殖支原体LAMPs通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导滋养层细胞表达HO-1。

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。

肺炎支原体脂质相关膜蛋白促进树突状细胞成熟

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）是社区获得性肺炎最主要的病原体。在儿童和青少年中，10％～30％的社区获得性肺炎是由Mp感染所致。Mp缺乏细胞壁，其所引起的一系列炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂蛋白，又称脂质相关膜蛋白（1ipid-associated membrane proteins，LAMP）所致。

溶酶体相关膜蛋白3过表达促进肝细胞脂质沉积

目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(lysosome associated membrane protein 3,LAMP3)对肝细胞脂质代谢的作用。方法以肝癌细胞系Huh7为研究对象,利用qRT-PCR及Western blot法检测游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)0.4 mmol/L处理后肝细胞LAMP3表达变化;过表达LAMP3后,分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况;采用ATP及β-羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内ATP及β-羟基丁酸含量变化;过表达LAMP3,使用qRT-PCR、Western blot法检测脂质合成相关基因PPARγ与SCD-1及脂质分解相关基因CPT1A与PGC-1α表达变化。结果 FFAs处理后肝细胞Huh7中LAMP3表达显著上调(P<0.05);过表达LAMP3可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积(P<0.05);过表达LAMP3对肝细胞内ATP及β-羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义(P>0.05);过表达LAMP3可促进PPARγ及SCD-1表达(P<0.05),但对CPT1A、PGC-1α表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LAMP3可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积。

牛支原体脂质相关膜蛋白GLCP抑制宿主EBL细胞凋亡的分子机制研究

为探究牛支原体(M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)抑制宿主细胞凋亡的分子机制,本研究利用实验室前期经AKTA分子筛分成5组的M.bovis TJ株LAMPs分别刺激胎牛肺(EBL)细胞,经western blot检测各组LAMPs对EBL细胞中凋亡执行分子Caspase-3剪切激活水平的影响,经CCK-8试验检测筛选出的目标LAMPs对EBL细胞活力的影响,并对其进行蛋白质谱测序分析。结果显示,D组LAMPs能够抑制Caspase-3的剪切激活水平,并可以极显著提高EBL细胞活力,结合蛋白质谱测序结果以及生物信息学软件预测蛋白功能,选定VSPHB0801-4、TPP、DJ-1、EF-TU、GAPDH以及GLCP为候选蛋白进行后续试验。经PCR扩增dj-1基因,重叠延伸PCR扩增ef-tu和glcp融合基因,vsphb0801-4、tpp和gapdh基因片段则由华大基因公司合成,将上述基因片段分别克隆至相应的原核表达载体中,构建重组质粒pET-28a-vsphb0801-4、pET-28a-tpp、pET-32a-dj-1、pET-32a-ef-tu、pEGX-6P-1-gapdh和pMAL-c5X-glcp,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后通过亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的纯化效果。结果显示,获得了纯度较高的6个重组蛋白。将不同浓度的6个重组蛋白分别刺激EBL细胞,经western blot验证重组蛋白是否具有抑制EBL细胞凋亡的作用,结果显示,只有重组蛋白GLCP能够抑制EBL细胞凋亡。因此,将其作为靶标蛋白进一步探究其抑制EBL细胞凋亡的分子机制。将不同浓度的重组蛋白GLCP分别刺激EBL细胞后,经western blot检测经典凋亡通路介导分子Caspase-8、Caspase-9和Caspase-12的剪切激活水平、激光共聚焦显微镜检测EBL细胞线粒体膜电位,以及western blot检测线粒体介导的凋亡通路关键分子Bcl-2、Bax、Cyt C、Apaf-1以及剪切的多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP1)蛋白的表达水平。结果显示,重组蛋白GLCP主要抑制Caspase-9的剪切激活水平,提高线粒体膜电位,并上调线粒体介导的凋亡通路关键分子Bcl-2蛋白的表达水平,以及下调Bax、Cyt C、Apaf-1和剪切的PARP1蛋白表达水平。以上实验结果表明,重组蛋白GLCP主要通过线粒体介导的凋亡通路抑制EBL细胞凋亡。本研究首次筛选到抑制EBL细胞凋亡的M.bovis脂质相关膜蛋白GLCP,并初步解析了其抑制宿主细胞凋亡的分子机制,为M.bovis持续性感染机制的研究提供参考依据。

支原体脂质相关膜蛋白致病机制的研究进展

支原体是一种没有细胞壁的原核细胞型微生物。支原体膜表面含有丰富的脂质相关膜蛋白(Lipid-associated membrane proteins,LAMPs),LAMPs在支原体对宿主的致病过程中起着重要的作用。了解支原体LAMPs致病机制可为开发针对性疫苗和有效药物提供依据。根据近年来发表的文献,对支原体LAMPs的结构特点及其致病机制的研究进展予以综述。

TRIM9基因调控牛支原体脂质相关膜蛋白诱导EBL细胞IL-1β表达的研究

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过M.bovis LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因的转录水平,结果显示TRIM9基因转录水平上调2.9倍,IL-1β基因转录水平上调2.5倍。构建pEGFP-C1-TRIM9荧光报告质粒并转染EBL细胞,利用共聚焦显微镜观察TRIM9在EBL细胞中的定位,结果显示TRIM9蛋白能够瞬时表达于EBL细胞浆。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒共转染EBL细胞,经2μg/mL M.bovis LAMPs刺激12 h后,采用qPCR和ELISA检测IL-1β的转录水平和表达情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平均无明显变化,而敲低TRIM9组中IL-1β转录水平和蛋白表达水平均显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用western blot检测p65蛋白磷酸化水平,分析NF-κB信号通路激活情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化,而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高,促进NF-κB信号通路激活。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进M.bovis LAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β。本研究为进一步明确宿主蛋白参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。

绵羊肺炎支原体及其脂质相关膜蛋白通过Toll样受体2激活MAPK信号通路诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的研究

为验证绵羊肺炎支原体(M. ovi)或脂质相关膜蛋白(LAMPs)是否通过Toll样受体2(TLR2)诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的表达,本研究利用不同浓度的M.ovi或LAMPs刺激C57BL/6J WT小鼠及Tlr2-/-基因缺失小鼠的腹腔巨噬细胞12 h后,利用荧光定量PCR(qPCR)检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平。结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞TNF-α基因的转录水平明显受到抑制。进一步以终浓度为1×10^(7)cfu/mL M.ovi或8μg/mL LAMPs分别刺激C57BL/6J WT小鼠和Tlr2-/-基因缺失小鼠的巨噬细胞,不同时间后利用qPCR检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平;利用流式细胞术检测C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达水平;采用ELISA方法检测两种小鼠巨噬细胞上清液中TNF-α的分泌水平;利用western blot检测细胞中MAPK信号通路的激活。qPCR结果显示,以M. ovi或LAMPs经不同时间刺激的C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TNF-α基因的转录水平均明显受到抑制;流式细胞术检测结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TLR2蛋白的表达水平均不同程度上升;ELISA结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TNF-α蛋白的表达水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达则明显受到抑制;Western blot结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞经M. ovi或LAMPs刺激后MAPK信号通路中各信号蛋白(Erk、p38、JNK)均发生磷酸化反应,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞在受到这两种物质刺激后MAPK信号通路明显受到抑制。上述结果表明,M. ovi及其LAMPs可通过小鼠腹腔巨噬细胞的TLR2激活MAPK信号通路,继而引起细胞因子TNF-α的分泌增多。本研究首次证实M. ovi及其LAMPs是通过TLR2及MAPK信号通路引起小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的分泌水平发生变化,为进一步明确巨噬细胞参与抗M. ovi天然免疫应答的机制奠定基础。

肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱发THP-1细胞炎症反应研究

探讨肺炎支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱发THP-1细胞炎症反应机制。提取LAMPs并刺激THP-1细胞,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-1β,IL-18和TNF-α浓度,qRT-PCR法检测NLRP3和Caspase-1基因表达量,免疫印迹技术检测NF-κB信号通路活化,流式细胞术检测活性氧(ROS)生成量。结果显示:LAMPs显著提高IL-1β,IL-18和TNF-α表达(P<0.05);NLRP3和Caspase-1基因表达量均显著升高(P<0.05);LAMPs刺激后胞核NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05);细胞ROS生成量显著升高(P<0.05)。LAMPs可以通过ROS/NF-κB/NLRP3途径诱发宿主巨噬细胞炎症反应,且随浓度升高诱导炎症反应能力增强。

CD14对生殖支原体LAMPs激活NF-κB的影响

目的探讨CD14在生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活NF-κB中作用。方法 THP-1细胞分别加入人血清和CD14抗体孵育,提取对数期Mg的LAMPs刺激,ELISA法检测其NF-κBp65水平;采用共转染技术和sCD14预孵育LAMPs,刺激Hela细胞,双荧光素酶报告基因分析CD14在LAMPs激活NF-κB中的作用。结果人血清上调LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;CD14中和抗体抑制LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;mCD14和sCD14上调LAMPs诱导Hela细胞激活NF-κB。结论 CD14上调生殖支原体LAMPs激活NF-κB。

人血清对生殖支原体LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α的影响

目的探讨人血清对生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导TNF-α表达的影响。方法提取对数期Mg的LAMPs,分别加入脂蛋白脂肪酶,蛋白酶K及人血清预处理后,刺激THP-1细胞,ELISA法测定其TNF-α水平。结果 Mg LAMPs为一混合蛋白,其活性成分为脂质成分,能激活THP-1细胞表达大量TNF-α,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。人血清能上调LAMPs诱导的TNF-α水平,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。结论人血清上调Mg LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α。

肺炎支原体Msr B经MAPK/NF-κB通路抑制脂质相关膜蛋白诱生促炎细胞因子

蛋氨酸亚砜还原酶B(methionine sulfoxide reductase, MsrB)是一种重要的氧化还原蛋白。该文探究了肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, Mp) MsrB对Mp脂质相关膜蛋白(lipidassociated membrane proteins, LAMPs)刺激的人髓系白血病单核细胞(THP-1细胞)分泌促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的调节及相关信号通路,以进一步了解Mp的免疫逃避机制。论文构建了pET28a(+)-msr B重组质粒,诱导表达、鉴定、纯化重组蛋白(rMsrB)并制备了多克隆抗体;Western blot检测MsrB、TLR1、TLR2、TLR6和MyD88蛋白表达水平及NF-κB p65、P38、ERK和JNK的总蛋白和磷酸化蛋白水平;间接免疫荧光分析NF-κB核转位;ELISA测定TNF-α和IL-1β分泌水平。结果显示Msr B可表达于Mp胞质和胞膜。rMsrB预处理可抑制LAMPs刺激的THP-1细胞合成TNF-α和IL-1β。Mp rMsrB可抑制LAMPs刺激的THP-1细胞表达TLR2、MyD88、p-ERK、p-JNK、p-p38和p-p65,并抑制NF-κB的核转位。抑制NF-κB、P38、ERK和JNK表达后,rMsrB可进一步抑制LAMPs刺激的THP-1细胞产生TNF-α和IL-1β。综上, Mp MsrB经MAPK/NF-κB信号通路抑制LAMPs刺激的THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β。

解脲脲原体LAMPs激活核因子κB诱导人单核细胞表达诱导型一氧化氮合酶和前炎症因子

目的分析解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)对人单核细胞(THP-1)表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和前炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响。方法用Uu的LAMPs刺激人单核细胞后,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)的激活和iNOS基因的表达,格氏试剂测定NO,ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-6的含量。结果Uu LAMPs通过激活NF-κB诱导人单核细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激人单核细胞产生NO,诱导表达前炎症因子(IL-1β、TNF-α和IL-6);NF-κB抑制剂PDTC可抑制NF-κB的激活、iNOS的表达及NO的产生。结论Uu LAMPs通过激活NF-κB途径诱导人单核细胞表达iNOS和前炎症因子,可能是产生某些疾病的一个重要的因素。