聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒,测定包封率、载药量、粒径、Zeta电位,单因素试验优化处方,XRPD进行晶型分析,考察体外释药、稳定性。24只大鼠随机分为4组,分别灌胃给予杨梅苷、杨梅苷固体脂质纳米粒、杨梅苷固体脂质纳米粒+聚乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(150 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定杨梅素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为药脂比1∶15,单硬酯酸甘油酯与聚乙二醇硬脂酸酯比例10∶1,泊洛沙姆188浓度0.8%,均质次数8次,包封率为81.75%,载药量为5.04%,粒径为207.56 nm,PDI为0.092,Zeta电位为-14.79 mV。杨梅苷以无定型状态存在于聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒中,18 h内累积释放度为64.71%,模拟胃液中2 h内、模拟肠液中12 h内稳定性良好。与原料药、固体脂质纳米粒比较,聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒t_(max)延长(P<0.05),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.05,P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至4.60倍。结论聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒可改善杨梅苷稳定性,促进其口服吸收。

脂质纳米粒在经皮给药系统中治疗皮肤病的应用

经皮给药作为一种非侵入性给药方式,正逐渐受到广大医药工作者和患者的青睐。然而,皮肤角质层的屏障功能限制了药物的经皮吸收。脂质纳米粒作为一种新型的药物载体能够有效提高皮肤渗透性、减少药物相关副作用。本文就脂质纳米粒的特点、透皮作用机制以及在多种皮肤病中的应用做一综述,阐明脂质纳米粒在经皮给药领域的广阔发展前景,为脂质纳米粒的开发及临床应用提供参考。

利用ATR-FTIR研究脂质纳米粒的鼻黏液渗透性

鼻黏液是影响疫苗和药物经鼻吸收的首要屏障。由于干扰因素复杂多变,在体评价黏液渗透性较难实施,多采用体外评价。现有的药物鼻黏液渗透性检测方法如细胞模型法、多粒子示踪技术等,存在细胞培养周期长、操作繁琐、成本高、可获得信息少且需要进行荧光标记等不足,对鼻黏膜制剂的体外评价具有很大的局限性,因此迫切需要建立一种快速、简便、灵敏的鼻黏膜制剂黏液渗透性评价方法。基于衰减全反射-傅里叶红外光谱(ATR-FTIR)对药物结构以及粘蛋白二级结构变化的敏感性,利用其对不同性质(粒径与电荷)脂质体的鼻黏液渗透性进行研究,通过FTIR图谱分析不同脂质纳米粒与黏液中粘蛋白的相互作用,建立了鼻黏膜制剂黏液渗透性的体外评价方法。方法学研究表明,对于聚乙二醇10000(PEG10000)、壳聚糖、海藻酸钠脂质体,该方法线性关系分别为Y=2.3866X+2.154、Y=1.8703X+0.2789、Y=1.13014X+0.0609,线性相关系数分别为0.9958、0.9945、0.9909,精密度RSD值分别为0.62%、0.73%、0.95%;重复性试验中RSD值分别为0.83%、0.97%、0.88%,说明该方法线性关系良好、精密度高、重复性好,可用于体外评价药物制剂在黏液中的渗透性。研究结果表明,利用ATR-FTIR在不同时间内扫描样品可得到不同脂质体制剂样品的强度增加的吸收带。对于不同粒径PEG脂质体而言,粒径越小其黏液渗透性越强;对于不同电荷脂质体而言,壳聚糖脂质体黏液渗透性最弱,海藻酸钠次之,PEG脂质体黏液渗透性最强。进一步研究表明,不同电荷脂质体黏液渗透性的差异源于其与粘蛋白相互作用,该结论可通过分析粘蛋白酰胺Ⅰ带所包含的各二级结构信息得到。综上,基于ATR-FTIR所建立的体外评价方法灵敏简便,可作为多种不同制剂的鼻黏液渗透性的快速测定,经改进后还可用于药物制剂在其他黏液中的渗透性评价,应用前景广阔。

漆黄素固体脂质纳米粒的制备及体外释放评价

目的制备漆黄素固体脂质纳米粒(FIT-SLN),对其进行质量评价并考察其体外释放作用。方法采用乳化蒸发-低温固化法制备FIT-SLN,利用Box-Behnken设计试验优化处方工艺,并制成冻干粉末。考察其外观、粒径、Zeta电位,并通过差示量热扫描仪判断药物在FIT-SLN冻干粉中的存在状态,透析袋法评价制剂在不同介质中的体外释放行为。结果FIT-SLN的最佳制备工艺:漆黄素用量3 mg、吐温80用量115μL、双硬脂酸甘油酯(Precirol ATO 5)用量30 mg、卵磷脂用量30 mg。所得FIT-SLN的粒径、Zeta电位、包封率分别为(124.53±2.00)nm、(-21.33±1.69)mV、77.89%,体外释放规律与一级动力学方程相符。结论成功制备粒径小、包封率高的FIT-SLN,其具有一定的缓释能力。

姜黄素固体脂质纳米粒制备工艺研究

采用微乳法制备姜黄素固体脂质纳米粒,以固体脂质总量、2种固体脂质基质的质量比、乳化剂质量、表面活性剂的质量浓度为影响因素进行单因素试验和响应面试验。以姜黄素的包封率和载药量为指标,研究姜黄素固体脂质纳米粒的最优配方。结果表明,姜黄素固体脂质纳米粒优化配方为固体脂质总量30 mg,乳化剂的质量200 mg,表面活性剂质量分数为3%,在此条件下制备的姜黄素固体脂质纳米粒包封率为89.86%,载药量为28.63%。

可电离脂质及其对载核酸药物脂质纳米粒转染效率和安全性的影响研究进展

可电离脂质构成的脂质纳米粒(LNP)是目前临床上最具应用前景的非病毒核酸药物递送载体之一,在递送基因治疗药物和疫苗等方面具有巨大潜力。LNP的主要成分可电离脂质对LNP的内涵体逃逸率、转染效率、器官靶向性和安全性等起决定性作用。可电离脂质的亲水头基含有叔胺基,可提高LNP缓冲能力,进而改变其p Ka值,并含有咪唑,可增强mRNA-LNP的稳定性和转染活性;连接体含有酯基能够高效诱导基因沉默并可提高其降解速率和安全性;疏水尾数量在3~4个,具有1~2个不饱和度和8~18个碳链长度时,LNP能够高效诱导基因沉默,同时含有分支或不对称的疏水尾时可提高LNP的转染效率。本综述从可电离脂质的化学结构出发,总结了其结构对载核酸药物LNP的转染效率和安全性的影响,并总结归纳其构效关系,为新型可电离脂质的研究提供借鉴。

塞来昔布固体脂质纳米粒对兔角膜重度热烧伤行穿透性角膜移植术后CNV、MMP-2的影响

目的观察塞来昔布(celecoxib,CXB)固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)对兔角膜重度热烧伤(severe corneal thermal burn,SCTB)行穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)浓度的影响,探讨CXB-SLN对兔SCTB的作用机制。方法取36只新西兰白兔,恒温烧灼器制作兔SCTB模型(左眼),随机分为对照组、PKP组、CXB-PKP组,每组12只。对照组、PKP组球结膜下注射9 g/L的生理盐水0.1 ml,CXB-PKP组球结膜下注射1 g/L的CXB-SLN 0.1 ml。PKP组、CXB-PKP组于造模后第3天行PKP治疗。观察3组白兔术后角膜一般情况并记录术后10、20、40天CNV面积。在术后20、40天各组随机选择6只兔处死。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测角膜上清液中MMP-2浓度,并分析CNV面积与MMP-2的相关性。结果术前3组白兔角膜均可见角膜缘充血明显,角膜烧伤区水肿,混浊,伴角膜上皮层坏死、剥脱。术后对照组可见角膜混浊逐渐加重呈瓷白色混浊,PKP组与CXB-PKP组可见角膜植片均成活,角膜透明度尚可。术后10、20、40天,CXB-PKP组CNV面积小于PKP组(P均<0.05),PKP组CNV面积小于对照组(P均<0.05)。术后20和40天角膜上清液MMP-2的浓度,CXB-PKP组低于PKP组,PKP组低于对照组(P均<0.05)。术后20、40天,CNV面积与MMP-2浓度呈正相关(r=0.742,P<0.001;r=0.827,P<0.001)。结论CXB-SLN对兔SCTB后的CNV具有明显抑制作用,可减轻角膜混浊,其机理可能与MMP-2的下调有关,能够为SCTB后行PKP创造有利条件。

姜黄素固体脂质纳米粒制备工艺的优化和评价

目的:优化姜黄素固体脂质纳米粒制备工艺,并对其理化性质进行考察。方法:通过考察制备方法及单因素试验确定其最佳制备条件;采用透射电子显微镜及粒径仪器观察姜黄素固体脂质纳米粒的微观形态;采用紫外分光光度法测定姜黄素的药物包封率及载药量。结果:最优制备条件为:V_(有机相)∶V_(水相)=1∶20,m_(单硬酯酸甘油酯)∶m _(PEG单硬脂酸酯)∶m_(辛酸癸酸单硬酯酸酯)=13∶2∶4,姜黄素含量占脂质质量含量为3.5%,超声时间为7 min,搅拌时间为10 min,水浴温度为70℃,泊洛沙姆188质量分数为0.1%;通过最优条件制备得到的产品为黄色透明液体,在透射电镜下呈圆形或圆球形状,平均粒径为(140.4±0.97)nm,PDI为0.237,电位为(-9.29±1.04)mV;测定其包封率和载药量分别为92.66%±0.17%,3.17%±0.47%。结论:本研究所筛选的姜黄素固体脂质纳米粒制备方法简单,理化性质稳定,可为姜黄素纳米制剂的开发和应用奠定实验基础。

纳米多孔花形乳糖装载姜黄素固体脂质纳米粒吸入微粉的制备及其体外抑凋亡作用研究

目的制备纳米多孔花形乳糖(FL)装载姜黄素(Cur)固体脂质纳米粒(SLN)吸入微粉(Cur-SLN-FL),探讨其对脂多糖(LPS)诱导的BEAS-2B细胞凋亡的抑制作用。方法以不同种类(乳糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖)和不同用量(2%、3%、5%)的冻干保护剂为考察对象,采用冷冻干燥技术将Cur-SLN混悬液微粉化制成冻干粉,再将冻干粉与FL混匀后过200目筛,即得Cur-SLN-FL。采用扫描电镜、激光粒度仪等对Cur-SLN-FL的理化性质进行表征。以BEAS-2B细胞为对象,采用AnnexinⅤ/PI双染法和JC-1试剂盒检测LPS诱导的BEAS-2B细胞经Cur-SLN-FL处理后的凋亡情况和线粒体膜电位变化。结果以3%海藻糖为Cur-SLN冻干保护剂,所得冻干粉外形致密、饱满、不回缩塌陷,为色泽均匀的淡黄色粉末,30 s可完全溶解。当FL与Cur-SLN冻干粉以质量比1∶2混匀时具有更高的二级分布沉积率[(40.92±0.02)%]。制得的Cur-SLN-FL呈花形外貌,平均粒径为(4.95±0.57)μm,空气动力学粒径为(4.03±0.40)μm,临界相对湿度约为54%,排空率为(90.34±1.21)%,在2~7级收集盘中的可吸入细颗粒量为(47.5±0.7)%,实测空气动力学粒径为(4.33±0.08)μm。Cur-SLN-FL对BEAS-2B细胞半致死剂量(LD50)为5.809 mg/mL。Cur-SLN-FL处理后的模型细胞凋亡率显著降低,线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。结论Cur-SLN-FL的制备工艺简单可行。Cur-SLN-FL可改善LPS诱导的BEAS-2B细胞凋亡,且该作用与调节线粒体膜电位有关。

花形乳糖装载姜黄素固体脂质纳米粒吸入微粉对COPD模型小鼠肺部炎症的影响及机制

目的探讨肺吸入花形乳糖(FL)装载姜黄素(Cur)固体脂质纳米粒(SLN)吸入微粉(Cur-SLN-FL)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺部炎症的影响及机制。方法对Cur-SLN-FL的肺部刺激性进行考察,明确吸入材料的局部安全性。然后随机选用10只小鼠经气管注入生理盐水,其余50只小鼠均滴注猪胰蛋白酶溶液(浓度为33.3 mg/mL、给药剂量为1.0 mL/kg)复制COPD模型,小鼠正常喂养28 d后分为假手术组、模型组、布地奈德组(20 mg/kg)和Cur-SLN-FL高、低剂量(100、50 mg/kg)组,每组10只。按要求给予相应药物,每日1次,连续14 d。末次给药24 h后,采集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)并对其中的白细胞分类计数;采用苏木素-伊红(HE)染色观察气管和肺组织病理形态;采用Masson染色检测肺组织胶原纤维沉积;采用免疫组织化学法检测肺组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)的阳性表达;采用Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1、核因子κB(NF-κB)的蛋白表达。结果Cur-SLN-FL无明显肺部刺激性。与假手术组比较,模型组小鼠BALF中白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞均显著增加,淋巴细胞数显著降低(P<0.05);气管见纤毛柱状上皮增生增厚、脱落,腔内可见黏液蓄积,肺组织可见间质炎性细胞浸润;肺组织胶原纤维沉积明显增加,肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β的阳性表达明显增强,肺组织中NLRP3、caspase-1、NF-κB蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05)。给予Cur-SLN-FL后,上述各指标均有一定程度改善。结论Cur-SLN-FL能够改善COPD模型小鼠的肺部炎症反应,其机制可能是通过调控NLRP3信号通路,抑制caspase-1、NF-κB、IL-1β的表达,进而缓解小鼠肺组织纤维化的进程。

姜黄素固体脂质纳米粒在大鼠体内的组织分布研究

目的 研究姜黄素固体脂质纳米粒(Cur-SLN)在大鼠体内的组织分布特点。方法 采用微乳法制备Cur-SLN。将SD大鼠随机分为Cur原料药组和Cur-SLN组,每组45只。两组大鼠均单次静脉注射相应药物(以Cur计,注射剂量均为25 mg/kg),分别于给药0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24 h时,分离大鼠心、肺、肾和肝组织,采用高效液相色谱法测定Cur在不同组织中的含量,并分析其组织分布情况。结果 Cur在心、肺、肾和肝组织中检测质量浓度的线性范围分别为0.064 75~129.50、0.064 75~64.75、0.064 75~129.50、0.064 75~129.50μg/mL(r均大于0.99),定量下限均为0.064 75μg/mL,检测限均为0.012 95μg/mL;日内、日间精密度以及准确度、提取回收率均符合生物样品定量分析的要求。与Cur原料药组比较,Cur-SLN组大鼠心、肾、肺(0.25~24 h各时间点)和肝(0.25~1 h、12~24 h各时间点)组织样品中Cur的含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);而肝(2~8 h各时间点)组织样品中Cur的含量均显著降低(P<0.01)。结论 将Cur制成固体脂质纳米粒后,增加了其在心、肾、肺组织的分布。

钩藤碱固体脂质纳米粒抑制哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞增殖的作用机制

目的研究钩藤碱固体脂质纳米粒(Rhy-SLN)抑制哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用机制。方法采用卵清蛋白+氢氧化铝过敏法制备哮喘模型小鼠,然后原代分离培养ASMCs并进行形态观察和鉴定[当ASMCs内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)呈红色,结蛋白(Desmin)呈绿色,表明ASMCs培养成功];将细胞分为空白组(正常小鼠ASMCs)、模型组(哮喘模型小鼠ASMCs)、Rhy-SLN组(哮喘模型小鼠ASMCs)、细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)过表达组(转染SOCS1过表达载体的哮喘模型小鼠ASMCs)、SOCS1-RNAi组(转染SOCS1-RNAi载体的哮喘模型小鼠ASMCs)、SB203580组[p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂,哮喘模型小鼠ASMCs]。各组加入相应含药(均为10μmol/L)或不含药培养基培养24 h。采用MTT法检测ASMCs增殖,采用Western blot法检测ASMCs中α-SMA、白细胞介素1β(IL-1β)、SOCS1、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白表达水平。结果小鼠原代ASMCs形态大小不一,呈不规则形、梭形、三角形;细胞内α-SMA呈红色,Desmin呈绿色,表明ASMCs培养成功。与模型组比较,Rhy-SLN组、SOCS1过表达组和SB203580组ASMCs吸光度值及α-SMA、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著降低,SOCS1蛋白表达水平(SB203580组除外)显著升高(P<0.05);Rhy-SLN组ASMCs中IL-1β蛋白表达水平显著降低(P<0.05);SOCS1-RNAi组ASMCs吸光度值及α-SMA、SOCS1、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论Rhy-SLN可抑制AMSCs增殖,其作用机制可能与促进SOCS1过表达,抑制IL-1β、p38 MAPK蛋白表达有关。

斑蝥素固体脂质纳米粒的制备及促肝癌细胞凋亡的研究

目的制备斑蝥素固体脂质纳米粒,并对其进行质量评价及体内外抗肝癌研究。方法采用薄膜超声分散法制备斑蝥素固体脂质纳米粒,以粒径、PDI(Polydispersity Index)、Zeta电位和包封率等为指标,对制备工艺进行优化,通过透射电镜观察纳米粒的形态,并考察其体外释放度,以荧光实验考察肝癌细胞摄取固体脂质纳米粒,以CCK8法研究固体脂质纳米粒使斑蝥素增效减毒的作用、以流式细胞术研究斑蝥素固体脂质纳米粒促细胞凋亡及阻滞细胞周期的情况,以体内裸鼠实验验证斑蝥素固体脂质纳米粒的药效。结果斑蝥素固体脂质纳米粒呈粒径大小均一,形状规整的类球实体形,具有较好的稳定性和良好的药物缓释作用,细胞摄取实验结果显示与游离斑蝥素相比,固体脂质纳米粒更能有效递送药物到细胞。细胞毒性实验结果显示CTD-SLN(cantharidin solid lipid nanoparticles)和CTD(cantharidin)对HepG2细胞均具有显著浓度依赖性的毒作用,且CTD-SLN能够起到增效减毒的作用。流式细胞术的结果发现CTD-SLN能够促进细胞凋亡且使细胞停滞在S期。结论制备得到的斑蝥素固体脂质纳米粒能增强药物促肝肿瘤细胞凋亡效果,可用于进一步研究。

RGD修饰载阿霉素固体脂质纳米粒的制备及体外转运能力观察

目的 制备精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸肽(RGD)修饰的载阿霉素固体脂质纳米粒(RGD-DOX-SLNs),观察其在肠道M细胞模型中的转运能力。方法 采用不同乳化剂配方,以乳化溶剂挥发法制备固体脂质纳米粒(SLNs),通过检测SLNs的稳定性,选取较优乳化剂配方进行阿霉素包载;制备载阿霉素的SLNs(DOX-SLNs),测定粒径、表面电位及包封率,选择最优乳化剂配方,对DOX-SLNs表面进行RGD修饰,制备RGD-DOX-SLNs;以空白SLNs作为对照。使用透射电镜观察RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs的形态,采用CCK-8法测算与载药SLNs共培养的Caco-2细胞及293T细胞存活率以评价载体安全性。建立滤泡相关上皮单层细胞模型,分别加入含有阿霉素单药、DOX-SLNs或RGD-DOX-SLNs的HBSS液,采用荧光分光光度法测定转运小室下侧的阿霉素浓度,共聚焦显微镜观察荧光,评价RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs的药物转运能力。结果 选择最优乳化剂配方为1%吐温与1%泊洛沙姆188体积比2∶1,DOX-SLNs粒径、表面电位及包封率分别为(147.4±11.2)nm、(-20.0±2.3)mV、80.9%±2.8%,RGD-DOX-SLNs分别为(153.1±6.2)nm、(-22.0±1.3)mV、81.3%±0.8%。透射电镜下RGD-DOX-SLNs和DOXSLNs形态圆整,RGD-DOX-SLNs表面略粗糙。RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs在0~1 000μg/mL浓度范围内安全性较好。阿霉素单药组、DOX-SLNs组及RGD-DOX-SLNs组的转运量依次增高(P均<0.05);阿霉素单药组红色荧光微弱,DOX-SLNs组X-Y、Y-Z、X-Z三个切面均可见红色荧光,RGD-DOX-SLNs组红色荧光强度较DOX-SLNs增强。结论 成功制备RGD-DOX-SLNs,较DOX-SLNs对阿霉素的体外转运能力更高。

脂质纳米粒载体共递送抗原和雷西莫特佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响

目的探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响。方法取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组(生理盐水100μL)、LNP+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和LNP 10μg)、LNP+R848组(LNP 10μg和R8483.18μg)、R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和R8483.18μg)及LNP+R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg、LNP 10μg及R8483.18μg),均采用肌肉注射、2次免疫、间隔7 d,免疫处理期间每2 d测量1次各组小鼠肿瘤体积的变化,第2次免疫结束后第7天麻醉处死各组小鼠,取瘤体制备细胞悬液;采用流式细胞术检测各组小鼠肿瘤细胞中CD4阳性T淋巴细胞(CD4^(+)T)和CD8阳性T淋巴细胞(CD8^(+)T)细胞分泌的溶酶体相关膜蛋白1(CD107a)、干扰素γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果LNP+R848^(+)抗原组小鼠黑色素瘤体积低于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848^(+)抗原组(P<0.05);LNP+R848^(+)抗原组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞分泌的CD107a、IFN-γ及TNF-α表达高于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848^(+)抗原组(P<0.05)。结论LNP载体共递送抗原和R848佐剂可增强黑色素瘤小鼠的细胞免疫应答及抑制瘤体的生长。

脂质纳米粒递送靶向Cyp2e1基因的小干扰RNA可减轻小鼠亚急性酒精性肝损伤

目的:研究脂质纳米粒(LNP)递送靶向Cyp2e1基因的小干扰RNA(siRNA)减轻小鼠亚急性酒精性肝损伤的作用及机制。方法:通过微流控技术将靶向Cyp2e1基因的siRNA封装在LNP中得si-Cyp2e1 LNP,并进行表征。筛选si-Cyp2e1 LNP给药的最佳剂量,将40只C57BL/6N雌鼠随机分为空白对照组、模型对照组、si-Cyp2e1 LNP组、LNP对照组和美他多辛组,经10 d的乙醇喂养及最后3 d的乙醇灌胃处理,构建亚急性酒精性肝损伤小鼠模型。测定各组血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛、活性氧、谷胱甘肽、三酰甘油和总胆固醇含量,计算肝脏指数;光学显微镜观察小鼠肝组织病理学变化。实时逆转录聚合酶链反应检测各组小鼠体内氧化应激、脂质合成和炎症相关基因表达的变化情况。结果:与模型对照组比较,si-Cyp2e1 LNP组肝脏指数降低,血清ALT、AST活性降低,肝组织丙二醛、活性氧、三酰甘油和总胆固醇含量下降,SOD活性升高,谷胱甘肽含量增加(均P<0.01)。苏木精-伊红染色结果显示模型对照组肝细胞排列紊乱,细胞质稀疏,有大量的脂肪空泡和坏死,而si-Cyp2e1 LNP组肝细胞大小均匀,排列整齐,肝组织形态结构正常;油红O染色结果显示si-Cyp2e1 LNP组相比模型对照组肝脏脂肪含量减少,未见脂肪滴积聚;抗F4/80单克隆抗体荧光免疫组织化学结果显示si-Cyp2e1LNP组相比模型对照组累积光密度比值降低(P<0.01),无明显炎症反应。与模型对照组比较,si-Cyp2e1 LNP组活性氧形成相关催化基因P47phox、P67phox和Gp91phox的表达减少(均P<0.01),而抗氧化酶相关基因Sod1、Gsh-rd和Gsh-px的表达增加(均P<0.01);脂质代谢相关基因Pgc-1α、Cpt1的mRNA表达增加(均P<0.01),脂质合成相关基因Srebp1c、Acc和Fasn的mRNA表达减少(均P<0.01);肝脏炎症相关基因Tgf-β、Tnf-α和Il-6的表达减少(均P<0.01)。结论:si-Cyp2e1 LNP主要通过降低活性氧水平,增加抗氧化活性,阻断氧化应激途径,减少乙醇诱发的脂肪变性和炎症,保护肝脏免受乙醇引起的损伤,为亚急性酒精性肝损伤提供了一种新的靶向治疗方法。

诺米林固体脂质纳米粒及其冻干工艺研究

目的:制备诺米林固体脂质纳米粒(NML-SLN)及其冻干粉,进行体外释药研究。方法:薄膜超声分散法制备NML-SLN,以包封率、载药量、粒径分布为指标,确定最优处方,考察各冻干支架剂对其冻干效果的影响,确定最佳冻干工艺,绘制诺米林释药曲线。结果:NML-SLN的最佳制备工艺为:卵磷脂50 mg、单硬脂酸甘油酯25 mg、二氯甲烷20 mL、2%泊洛沙姆188水溶液13 mL、超声功率350 W、超声时间4 min,所得NML-SLN包封率、载药量及粒径分别为96.27%、8.73%、189.3 nm,5%甘露醇为最佳冻干保护剂,NML-SLN冻干粉为质地疏松的白色固体,表面光洁、平整,复现性良好,能有效延缓诺米林释放。结论:该研究制备的NML-SLN粒径较小,载药量、包封率高,所得NML-SLN冻干粉复现性良好,具有良好的缓控释效果。

固体脂质纳米粒的制备及其在细菌感染治疗中的应用研究进展

随着药学的不断发展,使用合适的给药系统来输送药物成为日益重要的研究方向,合适的给药系统可以增进药物疗效,提高药物的靶向性,克服药物自身存在的一些问题。固体脂质纳米粒(Solid lipid nanoparticles,SLN)是一类以类脂质包裹药物或将药物粘附于类脂表面的药物输送体系,尺寸介于10~1000 nm。该体系毒性低、物理稳定性高、易于大规模生产,因此可作为一种优质的给药系统用于药物的输送。

抗菌肽LL37固体脂质纳米粒的制备、优化和评价

目的制备搭载抗菌肽LL37的固体脂质纳米粒(LL37-SLNs),对配方进行优化、表征和评价。方法采用“乳化蒸发-低温固化”的方法制备17个批次的LL37-SLNs,以硬脂酸、软磷脂和表面活性剂Myrj52作为自变量,平均粒径和包封率作为因变量,通过Box-Behnken试验设计优化配方,并进行表征和评价。结果通过Design Expert 12.0软件对回归方程分析得到最佳配方为硬脂酸300 mg、软磷脂150 mg、Myrj52250 mg。对优化后的LL37-SLNs进行表征和评价,结果显示载药量为(2.92±0.06)%,包封率为(86.87±0.26)%,平均粒径为(221.7±1.3)nm,Zeta电位为(-30.4±0.2)mV,多分散指数为(0.233±0.012)。在透射电镜下观察其外观规则,粒径均一。LL37-SLNs的体外释药曲线表现出良好的缓释能力,体外抗菌活性研究显示出持久的抗菌特性,且在-20℃可稳定储存60 d。结论LL37-SLNs配方合理,颗粒分布均一、稳定,包封率佳,体外释放和抗菌活性良好。

鬼臼毒素固体脂质纳米粒对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的研究鬼臼毒素固体脂质纳米粒(PPT-SLNs)对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法采用低温乳化凝固法制备PPT-SLNs,透射电镜观察纳米粒的形态,粒径分析仪测定其粒径和电位,HPLC法测定PPT-SLNs的包封率,透析法评估PPT-SLNs体外药物缓释性能,CCK8和细胞划痕实验检测鬼臼毒素(PPT)及PPT-SLNs对A549细胞增殖和迁移能力的影响。结果PPT-SLNs纳米粒基本呈圆球形或椭圆球形,粒径为(44.0±21.6)nm,Zeta电位为(-15.1±3.2)mV,包封率为(85.5±2.6)%;缓释性能测定显示PPT-SLNs在模拟生理条件下(pH 7.4)的稳定性较好,在弱酸性条件下(pH 5.0)水解速度明显加快;PPT-SLNs和PPT对A549细胞增殖的抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性,48 h浓度为5μmol·L^(-1)时,PPT-SLNs对细胞增殖的抑制作用显著高于PPT[(69.60±0.62)%vs.(56.61%±4.71)%,P<0.05],在正常肺上皮BEAS-2B细胞中,PPT-SLNs的增殖抑制作用则显著低于PPT[(24.52±3.94)%vs.(35.07±0.47)%,P<0.05];细胞划痕24 h时,PPT-SLNs对A549细胞体外迁移抑制作用明显高于PPT[(17.18±2.10)%vs.(28.31±2.71)%,P<0.01]。结论PPTSLNs可增强对A549细胞增殖和迁移的抑制,且对正常肺上皮细胞的毒性更小。