脂质超声微泡增强AAV介导的致密结构细胞的基因转导

目的:探讨超声介导的脂质微泡能否增强腺相关病毒(AAV)对具有致密结构的细胞的转导效率。方法:制备载AAV-eGFP的脂质超声微泡,以Malvern粒度检测仪检测微泡粒径及分布,选用人支气管上皮细胞16HBE14o-为模型细胞,采用Transwell小室细胞培养技术培养具有紧密结构的人支气管上皮细胞16HBE14o-,利用倒置荧光显微镜定性观察转导效率,采用流式细胞技术进一步定量检测转导效率。结果:本试验制备的载AAV脂质超声微泡呈圆球形均匀分布,平均粒径为2.46±1.2μm;脂质微泡携同超声处理能显著增强AAV对形成致密结构的人支气管上皮细胞16HBE14o-转导效率。结论:超声介导脂质微泡为AAV在基因治疗中的应用提供了一种新的途径,为AAV在体内的靶向应用奠定了基础。

载ANM33双靶标脂质超声微泡精准胞内释药可行性的体外研究

目的制备载miR-33反义核苷酸(ANM33)的双靶标脂质超声微泡(HA-PANBs),体外评价其分阶段靶向泡沫细胞并实现细胞内精准释药的可行性。方法设计以纳米泡NBs为微泡核心,透明质酸(hyaluronic acid,HA)第一阶段靶向受损内皮细胞,适配子PM1第二阶段靶向泡沫细胞,ANM33为治疗因子的双靶标脂质超声微泡。完成脂质泡表征的同时检测其稳定性及体外造影能力;随后建立受损人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和巨噬细胞(RAW264.7,MΦ)共培养模型,结合流式细胞术、油红O染色和小动物活体成像仪等评价HA-PANBs体外精准定位泡沫细胞并释放ANM33的能力。结果制备的双靶标脂质超声微泡HA-PANBs形态规则,稳定性好,粒径为(1357.53±140.20)nm,表面电位为(-5.61±0.73)mV,HA、PM1及ANM33均有效连接。在受损HUVEC/MΦ共培养模型中,HA-PANBs靶向下层泡沫细胞的效果最佳,且有效摄取量高达(80.65±2.12)%,较NBs组高56.74%;油红O染色显示HA-PANBs组泡沫细胞的胆固醇外排能力明显优于NBs组,差异有统计学意义[(629.80±21.99)a.u.比(1071.00±55.49)a.u.,P<0.05]。结论构建的双靶标脂质超声微泡HA-PANBs能精准靶向泡沫细胞并显著增强其胆固醇外排能力,为实现动脉粥样硬化的早期无创诊疗提供了新策略。

超声微泡介导反义寡核苷酸转染肾脏的实验研究（英文）

目的：探讨超声联合自制脂质体微泡（lipid contrast agent,LCA）转染肾脏的条件和效率。方法：HE染色、肝肾功能检测评价其安全性;荧光显微镜评价其转染效率;RT-PCR和Western印迹检测其对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）表达的影响。结果：超声联合LCA显著增强基因在肾脏内的转导效率,CY5标记的寡核苷酸主要表达在85%~90%的肾小球、肾小管和间质区;血液生化指标无明显改变;转染后第7天的LDH水平均低于0天（P〈0.05）;转染至肾脏的CTGF反义寡核苷酸成功抑制了CTGF的表达。结论：超声联合LCA的基因转移系统显著增强基因转移和表达的效率,该方法可以用来转导其他外源性的基因。