基于基质辅助激光解析质谱的高通量酪氨酸酶活性及抑制剂分析

利用具有高效便捷分离能力和强紫外吸收的磁性石墨烯纳米材料Fe3O4@G,结合基质辅助激光解析质谱用于酪氨酸酶的活性及抑制剂分析.与其它方法相比,该策略在避免繁琐样品前处理的基础上,减少了样品的损失,提高了检测的灵敏度.此外,结合基质辅助激光解析质谱实现了高通量的样品分析.本文结果对于深入了解黑色素合成过程、研究相关疾病以及开发有效的药物和美容产品具有重要意义.

老瓜头乙酸乙酯提取部位化学成分及其抗氧化与酪氨酸酶抑制活性研究

为挖掘药用植物老瓜头的活性成分,对老瓜头全草的乙酸乙酯提取部位进行化学成分分离,并考察其抗氧化和酪氨酸酶抑制活性。采用各种色谱手段从中分离得到10个化合物,通过波谱学方法鉴定结构为3-甲氧基-4-羟基苯乙酮(1)、3,4-二甲氧基苯乙酮(2)、6,7-二甲氧基香豆素(3)、6-甲氧基-7-羟基香豆素(4)、对羟基苯丙酮(5)、对羟基苯乙酮(6)、10a,12a-dimethyl-4,4a,4b,10b,11,12-hexahydro-3H-naphtho[2,1-f]chromene-2,8-dione(7)、ent-13S-hydroxy-16-atisene-3,14-dione(8)、3-吲哚甲醛(9)、反式肉桂酸(10)。其中化合物7~10为首次从老瓜头中分离得到。分别通过DPPH自由基清除法和酪氨酸酶催化左旋多巴氧化速率法考察化合物的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性。结果表明化合物1、2、4和5对DPPH自由基有一定的清除能力,其IC50分别为37.3、44.3、51.4、48.2μg/mL。化合物1、2、3、4和6对酪氨酸酶有显著的抑制作用,其IC50分别为15.7、22.3、8.3、7.1、39.8μg/mL,均强于阳性对照熊果苷。

光甘草定抑制酪氨酸酶及体外抗氧化活性的研究

目的:评价光甘草定对蘑菇酪氨酸酶活性的影响及探讨其机理,并进行光甘草定体外抗氧化活性的考察。方法:以单酚酶和二酚酶为底物,测定光甘草定对酪氨酸酶活性的影响,采用比色法考察其对DPPH.和.OH的清除率。结果:光甘草定对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的活性均有抑制作用,IC50分别为1.28μmol/L和1.56μmol/L,Lineweaver-Burk图显示光甘草定对酪氨酸酶二酚酶活性的抑制作用表现为可逆性竞争型抑制;DPPH.和.OH实验显示光甘草定具有较强的体外抗氧化作用。结论:光甘草定有显著的抑制酶活性及体外抗氧化作用,可能是通过抑制黑色素生成的限速酶——酪氨酸酶和清除自由基来达到美白肌肤的作用。

山杏花总黄酮抗氧化活性及其对酪氨酸酶抑制作用的研究

利用闪式提取法提取山杏花总黄酮,并以X-5大孔树脂进行分离。通过测定分离前后山杏花总黄酮对DPPH自由基、羟基自由基的清除能力,总还原能力和总抗氧化能力,评价了其抗氧化活性;通过测定酪氨酸酶催化L-多巴氧化速率,以V_C和β-熊果苷为阳性对照,研究了分离前后山杏花总黄酮对体外酪氨酸酶活性的抑制作用。结果表明,分离前后山杏花总黄酮均具有一定的抗氧化活性,且分离后抗氧化活性得到明显提高;分离前后山杏花总黄酮对酪氨酸酶的抑制能力均强于β-熊果苷弱于V_C,其IC_(50)值分别为2.24、3.08 mg/m L。综上所述,分离前后山杏花总黄酮均具有一定的抗氧化活性,且能有效抑制酪氨酸酶的活性。

鹅毛竹叶提取物抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的研究

采用Folin试剂还原比色法、硝酸铝—亚硝酸钠比色法和香草醛—冰醋酸比色法测定鹅毛竹叶甲醇提取物及不同极性部位中总酚、总黄酮和三萜的含量,采用DPPH法、ABTS法、FRAP法评价各提取物的抗氧化能力及还原能力,同时采用酪氨酸酶催化氧化左旋多巴(L-DOPA)速率法体外测定酪氨酸酶活力。结果表明:鹅毛竹(Shibataea chinensis)叶乙酸乙酯相的总酚、总黄酮及三萜的含量最高,分别为(28.63±0.19)%、(23.74±0.17)%和(15.27±0.67)%;该相在不同抗氧化体系中的抗氧化活性最强,同时该相抑制酪氨酸酶的活性也最强,其半抑制浓度为3.29 mg/m L;鹅毛竹叶醇提物及其不同极相部位的总黄酮含量与还原力和DPPH、ABTS自由基的清除能力呈正相关,相关系数分别为0.947 0、0.900 1和0.965 3,表明总黄酮是鹅毛竹叶提取物抗氧化活性的主要成分;总酚含量与酪氨酸酶抑制活性呈正相关,相关系数达到0.991 0,表明总酚是鹅毛竹叶提取物抑制酪氨酸酶活性的主要成分;鹅毛竹叶乙酸乙酯相对酪氨酸酶的抑制作用及抗氧化活性最强,其对酪氨酸酶抑制机制为可逆的竞争性抑制,其抑制常数为27.49 mg/m L。

在线抗氧化分析和超滤亲和液质联用技术快速筛选桂花抗氧化及抑制酪氨酸酶的活性成分

目的:研究桂花水提物的抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性,并初步研究其活性化学成分。方法:以DPPH·清除能力、ABTS^(+)·清除能力和FRAP这3种抗氧化活性评价指标来衡量桂花水提物及其化合物的抗氧化能力;采用超高效液相-ABTS^(+)·-质谱(UPLC-PDA-QDa-ABTS^(+)·)在线法对桂花中的抗氧化活性成分进行定性鉴别,同时采用超滤亲和-液质联用技术(Ultra-filtration affinity-liquid chromatography spectrometry,UF-LC-MS),筛选桂花中的酪氨酸酶抑制剂。用H_(2)O_(2)致皮肤成纤维细胞氧化损伤模型,评价桂花水提物及其化合物对皮肤成纤维细胞的氧化应激保护作用。结果:桂花水提物清除DPPH·及ABTS^(+)·的半数有效浓度(EC_(50))值分别为37.66和38.32μg/mL。当桂花浓度达到2 mg/mL时,FRAP值可高达3.17。桂花水提物抑制酪氨酸酶双酚酶的EC_(50)为595.9μg/mL。通过UPLC-Triple-TOF/MS分析,初步鉴定了桂花水提物中28种化学成分。采用UPLC-PDA-QDa-ABTS^(+)·在线法及UF-LC-MS技术,快速筛选出桂花提取物中5种具有较好抗氧化作用并兼具显著酪氨酸酶结合率的化学成分,鉴定其中主要的活性成分为毛蕊花糖苷。体外抗氧化和酪氨酸酶实验,验证了毛蕊花糖苷具有显著抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性。毛蕊花糖苷清除DPPH·及ABTS^(+)·的EC_(50)值分别为10.27和14.96μg/mL。当毛蕊花糖苷浓度达到1 mg/mL时,FRAP值可高达4.22。毛蕊花糖苷对酪氨酸酶单酚酶的EC_(50)为477.5μg/mL,对双酚酶的抑制活性几乎没有。利用H_(2)O_(2)致皮肤成纤维细胞氧化损伤模型,进一步验证桂花提取物及毛蕊花糖苷对皮肤成纤维细胞氧化损伤具有显著保护作用。结论:桂花水提物及其主要活性成分毛蕊花糖苷具有很好的体外抗氧化能力、酪氨酸酶抑制活性及氧化应激保护能力。

六种中药不同提取方法对酪氨酸酶的抑制率和抗氧化功效研究

本文研究六种中药提取液的酪氨酸酶抑制率和DPPH自由基的清除率。结果表明：六种中药酪氨酸酶抑制率和DPPH自由基的清除率研究中，醇提法〉酶提法〉水提法。抑制酪氨酸酶活性实验中，甘草和白术效果最好，所有提取方法提取的中药提取液抑制率都高于50％。DPPH自由基清除率实验中，白僵蚕和白蔹的效果最好，抑制率均高于20％。

山嵛菜抗氧化与抑制酪氨酸酶的实验研究

为了探讨山嵛菜植物各部分的抗氧化与抑制酪氨酸酶能力,将新鲜山嵛菜的叶、叶柄、块茎、根须等,用20%乙醇水溶液提取后,分别检测各部分的总抗氧化能力、灭活超氧阴离子能力和抑制酪氨酸酶能力。结果表明,总抗氧化能力以山嵛菜叶最强(68.4单位,0.1 g/mL);灭活超氧阴离子能力也是山嵛菜叶最强(IC50值0.7mg/mL);抑制酪氨酸酶能力以山嵛菜块茎、根须最强(IC50值0.3或0.4 mg/mL)。上述资料为进一步开发利用山嵛菜提供了依据。

辣木叶总黄酮对酪氨酸酶的抑制及抗氧化活性研究

本文采用DPPH法及酪氨酸酶对L-多巴转化活性影响测定法对辣木叶总黄酮的粗提物进行生物活性测试,评价其抗氧化性及对酪氨酸酶的抑制效果。结果表明辣木叶总黄酮的粗提物具一定的抗氧化性,对DPPH消除率IC_(50)为0.0022mg/mL,辣木叶总黄酮粗提物对酪氨酸酶的抑制率IC_(50)为335μg/mL,对酪氨酸酶的抑制作用为随着浓度增大而增大。辣木叶总黄酮粗提物具抗衰老及祛斑美白功效,在美容方面有潜在的应用价值。

联合检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CystatinC)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)的诊断效能

目的:探究对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)诊断时,应用血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CystatinC)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)联合检测的效能,总结经验。方法:在2015年5月到2018年1月间展开本次研究,将该时间段内65例过敏性紫癜患儿作为HSP组,将65例早期肾损伤患儿作为HSPN组,并选择同时期65例健康儿童作为对照组,分别对其实施CystatinC、NGAL、KIM-1的检测,并进行联合分析和对比。结果:HSPN组、HSP组患儿的CystatinC显著高于对照组,组间差异显著(P<0.05)。HSPN组的NGAL/uCr、KIM-1/uCr则显著高于HSP组和对照组,组间差异显著(P<0.05)。三者联合诊断的敏感性则为90.76%,明显高于单一检测(P<0.05)。结论:联合检测CystatinC、NGAL、KIM-1对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)的诊断效能良好。

水田芥不同浓度乙醇提取物抗氧化性及抑制酪氨酸酶活性的研究

本文研究了水田芥不同浓度乙醇提取液的总酚，总黄酮，Vc含量，以及羟自由基清除率，DPPH自由基清除率，对羟基致DNA氧化损伤的保护作用，从而对水田芥提取物的抗氧化活性进行评价，并对酪氨酸酶的抑制率进行研究。结果表明水田芥中各物质随提取液乙醇浓度变化而含量变化明显，总酚含量0．034—0．062mg／mL，黄酮0．265—0．407mg／mL，Vc含量0．0414～0．262mg／mL。抗氧化性方面，DPPH清除实验中20％乙醇提取液清除率最高，羟自由基实验中20％，40％乙醇提取液作用强。对DNA保护作用实验，20％，40％作用强。酪氨酸酶抑制实验中各浓度作用强度均较强，水提作用最弱。

艾纳香地上部分化学成分及其抗氧化与酪氨酸酶抑制活性研究

本文对艾纳香(Blumea balsamifera DC.)中的化学成分及其抗氧化与酪氨酸酶抑制活性进行了研究。利用各种色谱手段和波谱学方法,从艾纳香地上部分分离得到18个化合物,分别鉴定为:7,3′,4′-三甲基槲皮素(1)、4′,5-二羟基-3′,7-二甲氧基黄酮(2)、木犀草素-7-甲醚(3)、鼠李素(4)、(2R,3R)-3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮(5)、(2R,3R)-二氢槲皮素-7-甲醚(6)、槲皮素(7)、木犀草素(8)、圣草酚(9)、异半皮桉苷(10)、异槲皮苷(11)、3-甲氧基槲皮素(12)、熊果酸(13)、熊果酸内酯(14)、过氧麦角甾醇(15)、2-羟基-4,6-二甲氧基苯乙酮(16)、2,4-二羟基-6-甲氧基苯乙酮(17)、丹参素甲酯(18)。其中化合物10、14和18为首次从艾纳香属植物中分离得到,化合物13为首次从植物艾纳香中分离得到。分别运用DPPH法及酪氨酸酶催化左旋多巴氧化速率法筛选化合物的体外抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性,发现化合物3~5、7~12、18有着较强的抗氧化性,化合物7、13、14、16、17有一定的酪氨酸酶抑制剂活性。

3种根皮素酰腙衍生物的合成及抑制酪氨酸酶和抗氧化活性

以根皮素为母体,设计合成了三种新的酰腙类化合物1～3:根皮素苯甲酰腙(1)、根皮素2-羟基苯甲酰基腙(2)和根皮素4-羟基苯甲酰基腙(3)。采用UV、IR、1H NMR、13C NMR及MS等手段对产物进行结构表征;测定了根皮素及其酰基腙的抑制酪氨酸酶的能力、清除DPPH自由基能力和清除ABTS自由基能力。结果表明化合物2(IC50=13.4±1.1μM)和化合物3(IC50=19.1±0.82μM)抑制酪氨酸酶能力比母体根皮素(IC50=23.7±1.8μM)有了明显提高;化合物1～3清除DPPH和ABTS自由基的能力均得到显著提高;通过构效关系探讨,表明化合物芳酰基苯环上羟基数目和位置在抑制酪氨酸酶和清除自由基能力中发挥着重要作用。

雀嘴茶中三大酚类成分的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性分析

为深入挖掘雀嘴茶的利用价值,本文以其中含量丰富的6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸三大酚类成分为研究对象,对其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行分析。结果表明,雀嘴茶三大酚类成分均表现出较好的抗氧化活性,6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸清除DPPH自由基的IC_(50)值分别为13.56±0.14、104.41±6.52和8.42±0.21μg/mL,清除ABTS+自由基的IC_(50)值分别为18.01±0.06、50.60±1.25和26.93±0.38μg/mL,清除OH自由基的IC_(50)值为2.64±0.06、>10.00和<1.00 mg/mL,对铁离子总还原能力的强度依次为绿原酸>CA>β-熊果苷;雀嘴茶三大酚类成分对酪氨酸酶的抑制活性差异较大,CA对酪氨酸酶兼具单酚酶和二酚酶抑制作用,其IC_(50)值分别为1.114±0.035和95.198±1.117μmol/L,β-熊果苷仅有单酚酶抑制作用,IC_(50)值为681.335±17.975μmol/L,绿原酸既无单酚酶抑制作用,也无二酚酶抑制作用。研究结果为雀嘴茶中活性成分的开发利用提供了重要参考。

珍珠贝肉抗氧化肽制备工艺优化及其对酪氨酸酶的抑制活性

以马氏珠母贝肉为研究对象,采用ABTS自由基清除率为评价指标,通过单因素试验和响应面法优化制备抗氧化肽酶解物的工艺,并对酶解物冻干粉的抗氧化能力和酪氨酸抑制能力进行研究。结果表明,珍珠贝抗氧化肽的最优酶解工艺为温度50℃,pH 7.25,时间3 h,料液比1:1,酶底比0.4%,所得酶解液的ABTS自由基清除率为98.48%。在此条件下得到的珍珠贝抗氧化肽显示出优异的ABTS自由基清除效果(IC_(50) 0.57 mg/mL)、Fe^(2+)螯合活性(IC_(50) 6.89 mg/mL)和良好的ORAC值(601.38μmol TE/g冻干粉)。同时,珍珠贝肉抗氧化肽对酪氨酸单酚酶(IC_(50) 0.37 mg/mL)和酪氨酸二酚酶(IC_(50) 20.27 mg/mL)抑制效果明显,显示其在美白护肤应用领域也具有良好的应用潜力。该研究结果将为珍珠贝在抗氧化、抗衰老、美白护肤等功能食品、化妆品领域的应用提供参考和基础数据。

香蕉皮总黄酮的提取及其抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性

采用超声辅助提取香蕉皮中的总黄酮,对提取工艺进行优化,并对2种成熟度的香蕉皮总黄酮的抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性进行研究。结果表明:香蕉皮总黄酮的最佳提取条件为料液比1∶20(g/mL),乙醇浓度95%,温度60℃,超声时间50 min,在此条件下,总黄酮得率为1.82%。成熟度1级、成熟度6级香蕉皮总黄酮均具有较强的抗氧化能力,其对羟自由基、ABTS^(+)自由基的清除能力及Fe3+还原能力均显著高于V_(C)。成熟度1级、成熟度6级香蕉皮总黄酮以及VC清除羟自由基的IC50值分别为0.12、0.09、15.06 mg/mL,清除ABTS^(+)自由基的IC50值分别为0.14、0.14、0.29 mg/mL。香蕉皮总黄酮具有抑制酪氨酸酶的活性,成熟度1级、成熟度6级香蕉皮总黄酮与曲酸抑制单酚酶活性的IC50值分别为0.10、0.03、0.01 mg/mL,抑制二酚酶活性的IC50值分别为0.15、0.14、0.11 mg/mL。

高良姜精油和纯露的体外抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性研究

以超临界流体辅助提取的高良姜精油和纯露为研究对象,测定其总抗氧化能力、ABTS+自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力,并与水蒸气蒸馏法所得高良姜精油和纯露比较,结果表明,采用超临界法辅助提取的高良姜精油和纯露具有比采用传统的水蒸气蒸馏法所得的对应样品更佳的体外抗氧化活性;超临界辅助提取高良姜精油对L-酪氨酸酶的抑制率,最高约为64%,明显高于阳性对照熊果苷对L-酪氨酸酶的抑制率。

枸骨叶提取物对酪氨酸酶的抑制与抗氧化作用

本实验以枸骨叶为研究对象,经75%乙醇浸提,用极性递增的溶剂分离制备获得枸骨叶提取物,测定了枸骨叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用,并使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除的方法检测了枸骨叶提取物抗氧化能力。实验结果表明:枸骨叶三氯甲烷和正丁醇提取物对酪氨酸酶具有较强的抑制作用,IC50值分别达到0.414 mg/m L和0.667 mg/m L,均为混合型可逆抑制类型。同时,二者均具有一定的清除DPPH自由基的能力,IC50值分别为0.132 mg/m L和0.039 mg/m L,表明枸骨叶提取物同时具有抑制酪氨酸酶活性和抗氧化的功效,在美容、药物及食品等行业具有潜在的应用价值。

螺旋藻多糖对酪氨酸酶的抑制作用及抗氧化性能

以螺旋藻粉作为原材料,研究了螺旋藻多糖的最佳提取条件;采用酶动力学的方法,研究螺旋藻多糖对酪氨酸酶的抑制作用效果、类型和机理;通过DPPH自由基法评价其抗氧化能力。研究表明,在提取时间2 h,料液比1∶40,提取温度90℃,pH 8的条件下,可获得螺旋藻多糖的最佳提取效果;酶动力学研究结果表明,螺旋藻多糖对酪氨酸酶具有明显的抑制效果,其IC50为1.193 mg/mL,其抑制作用表现为可逆的混合型抑制,其抑制常数KI为0.544 mg/mL;螺旋藻多糖对DPPH自由基表现出较好的清除作用,其IC50为0.463 g/L,其自由基清除能力为同浓度下L-抗坏血酸的83.24%。

三叶青茎部不同溶剂提取物的功能成分、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性研究

目的 以三叶青茎部为原料,探究三叶青不同溶剂提取物的功能成分、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性。方法 采用乙醇超声法提取三叶青,获得醇提液及残渣。醇提液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对其进行分步萃取,残渣则采用蒸馏水多次提取,最终得到4种提取物。分别测定4种提取物总酚、总黄酮、总皂苷、总多糖、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性,并进行相关性分析。结果 4种提取物中乙酸乙酯萃取物总酚、总黄酮、总皂苷含量最高,分别为40.22%±1.01%、38.56%±0.64%、6.15%±0.21%,正丁醇萃取物总多糖含量最高,为9.29%±0.25%。各萃取物均具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活性,其中乙酸乙酯萃取物清除1,1-二苯基-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子、2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧(2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-3-oxide-1-oxyl,PTIO)自由基、羟自由基能力和铁离子还原能力(ferric reducing antioxidant power, FRAP)最强,其半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)分别为0.016、0.014、0.355、0.265、0.352mg/mL。同时,在酪氨酸酶抑制活性上,乙酸乙酯萃取物明显强于各萃取物。相关性分析表明,三叶青提取物中总酚、总黄酮、总皂苷物质与抗氧化和酪氨酸酶抑制活性呈极显著正相关性(P<0.01)。结论 三叶青茎部乙酸乙酯萃取物具有较强的抗氧化性及抑制酪氨酸酶活性,主要作用成分为总酚、总黄酮和总皂苷。本研究为进一步开发利用三叶青茎部资源提供相关技术支持。