疫苗佐剂单磷酸脂质A合成分析

本文通过对单磷酸脂质A的结构以及来源进行探究,并提出了两种不同的合成路线。其中线路2的合成方式通过选择Nap作为单磷酸脂质A合成的保护基,并再次借助于DDQ全面脱除该保护基,进而则能够有效避免应用催化氢化方式,相较于另一种合成方式更加有效且更加安全。基于这样的研究,对单磷酸脂质A在实际疫苗中的应用做出了总结,发现其相较于一般的铝盐佐剂具有更加良好的应用效果,适用面相对更广且更加安全,能够在疫苗中广泛应用。

脂质A高亲和噬菌体融合肽的筛选及鉴定

以脂质A为靶标分子,对噬菌体展示环七肽库进行4轮亲合筛选,ELISA结合实验鉴定阳性克隆,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定,推导短肽的氨基酸残基序列。结果4轮筛选后,随机挑取的20个噬菌体克隆中14个可与脂质A结合。测序发现这14个阳性克隆融合多肽中的8个序列一致,均为QTPLSST。认为QT-PLSST是一个可与脂质A高亲力结合的噬菌体多肽。该肽序列能否抑制脂多糖的活性有待进一步研究。

从噬菌体展示肽库中筛选脂质A的结合肽

以脂质A为靶标,筛选噬菌体展示十二肽库,三轮后随机挑取14个噬菌体克隆进行结合活性鉴定,并对5个克隆进行序列分析。结果表明,14个克隆全部是阳性克隆,测序结果显示4个阳性克隆的序列完全一样。说明筛选到了一个脂质A的结合多肽。

无毒性单磷酸脂质A对小鼠血清集落刺激因子的影响

用~3H-TdR掺入法和琼脂集落培养法比较观察条件培养液(CM)中集落刺激因子(CSF)的活性,结果表明两法显著相关,从Re突变型的明苏尼达沙门氏菌Re_(595)(Salmonella Minnesota Re_(595))得来的单磷酸脂质A(MPLA)静注后小鼠血清CSF水平明显提高,12h达高峰,24h恢复正常,有明显的量效关系,在诱生CSF的同时还产生一些不耐热的集落抑制因子(CIF),说明MPLA是一种很强的CSF诱生剂。

脂质A参与免疫反应的结构基础研究进展

脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性菌细胞外膜的主要成分之一，又称内毒素（endotoxin）。主要由O-特异链（O-specific chain）、核心寡糖（core oligosaccharide）和脂质A（1ipid A）组成。少量LPS就能激活动物体内的免疫反应机制，以抵抗细菌感染。但如果免疫反应进一步扩大并失去调控，就会引起严重的炎症，甚至导致死亡[1]。

脂多糖中脂质A的生物活性

脂多糖中脂质Ａ的生物活性于昕，王长海，张惟杰（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）（烟台大学食品研究所，烟台２６４００５）关键词脂多糖，脂质Ａ，内毒素受体脂多糖（ＬＰＳ）是一种存在于革兰氏阴性菌外膜上的多糖。脂类复合物。早期对ＬＰＳ的生物功能...

单磷酸脂质A佐剂对无细胞百日咳疫苗的免疫保护效果研究

目的探讨单磷酸脂质A(MPLA)佐剂对无细胞百日咳疫苗(aP)的免疫保护效果影响。方法 aP中添加MPLA佐剂,在Balb/c小鼠上进行免疫以及感染保护实验。通过检测小鼠百日咳特异性IgG抗体及其分型抗体IgG1和IgG2a水平、感染后白细胞变化以及气管和肺组织细菌定植来进行免疫效果的评估。结果 aP+MPLA免疫的小鼠在第一次和第二次免疫后所产生的IgG抗体水平均高于aP组,且两次基础免疫后显著促进了Th1细胞免疫。但百日咳气雾感染保护实验结果显示无论是否添加MPLA,疫苗在小鼠上都具有明显的保护效果。但添加MPLA佐剂,对小鼠感染后白细胞变化以及气管和肺组织细菌定植并未有显著改善。结论 MPLA佐剂对aP的免疫保护效果并未有明显改善。

疫苗佐剂单磷酸脂质A的合成及在疫苗中应用进展

简单介绍了单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A)的来源及化学结构,单磷酸脂质A是革兰氏阴性菌外膜上脂多糖内层脂质A的部分结构。总结了单磷酸脂质A常用的两条合成路线并分析优缺点,指出路线2为最佳的合成方法,其巧妙的选取Nap作为保护基,用DDQ干净高效地脱除了Nap保护基,避免使用催化氢化,相比路线1更加适合工艺放大研究。化学合成与生物提取相比,避免了糖异质及纯度低的问题。最后总结了单磷酸脂质A作为佐剂在各类疫苗中的应用,为其进一步研究提供参考。

脂质A的磷酸基团是鼠伤寒沙门菌毒力的要素并发挥天然和适应性免疫作用

脂质A是革兰阴性菌外膜的一个关键组成部分,通过Toll样受体4（TLR4）-MD2-CD14途径刺激促炎反应。它的内毒素活性依赖于酰基链的数量和长度以及其磷酸化的状态。在鼠伤寒沙门菌中,除去脂质A中的次级月桂酸酯或肉豆蔻酸酯链导致细菌的减毒和在体外的生长缺陷。然而,脂质A的这两个磷酸基团,在细菌毒力和免疫原性中所起的作用仍然未知。

桑辛素通过调节胆固醇代谢改善油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积

目的观察桑辛素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞脂质蓄积的改善作用,并探讨其可能机制。方法以300μM OA处理HepG2细胞24 h诱导建立脂质蓄积模型,2.5、5、10μM的桑辛素和OA共同作用于细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,油红O染色观察细胞内脂质含量情况,DiI-LDL检测细胞脂质摄取能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑辛素对胆固醇代谢关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARα)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)蛋白表达的情况,并将桑辛素与低密度脂蛋白受体(LDLR)和PPARα通过AutoDock vina软件进行分子对接验证。结果OA刺激HepG2细胞导致细胞内脂滴颗粒明显增加,脂质含量明显升高(P<0.01)。与模型组相比,桑辛素可明显改善模型组肝细胞脂质蓄积,并降低脂质含量(P<0.05)。桑辛素可抑制HepG2细胞对DiI-LDL的摄取,上调细胞中PPARα和CYP7A1的蛋白表达水平(P<0.05)。分子对接显示桑辛素与LDLR和PPARα受体表现出良好的对接活性。结论桑辛素对HepG2细胞脂质蓄积模型有明显的改善作用,其机制可能与调节PPARα通路有关。

磷脂分子调控畜禽肉品质研究进展

磷脂是一类结构复杂、功能多元的极性脂质分子,包括甘油磷脂和鞘磷脂2类。作为细胞膜的重要组成部分,磷脂分子参与生命体细胞信号传导、脂滴形成、细胞凋亡等多种生理活动,磷脂分子的代谢、水解及氧化赋予肉类食品独特的质地、风味和营养品质。磷脂分子的功能特性因其连接的极性基团和sn-1/sn-2位点脂肪酸种类不同而有所差异,脂质组学为磷脂分子结构确证与表征提供了强大技术支撑。本文介绍了肌内磷脂分子的结构与功能、检测及分析方法,重点综述了磷脂分子参与畜禽肉肌内脂肪沉积、调控宰后生鲜肉品质及加工肉制品品质的研究进展,以期为精准调控畜禽肉品质提供参考借鉴。

槲皮素通过上调脂解和脂噬途径改善肝细胞脂质蓄积

目的 明确槲皮素(quercetin, QUE)通过调控脂解及脂噬途径改善肝细胞脂质蓄积的效应及作用机制。方法 利用棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导人正常HHL-5肝细胞株(human hepatocyte cell line 5, HHL-5)建立脂肪变性肝细胞模型,使用不同浓度槲皮素(5、10、20和40μmol/L)干预脂肪变性的HHL-5细胞24 h,实验分为(n=3):对照组、PA组、PA+QUE5组、PA+QUE10组、PA+QUE20组、PA+QUE40组。为明确自噬对QUE作用的影响,利用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)阻断自噬,将HHL-5细胞分为(n=3):对照组、PA组、PA+QUE40组、3-MA组、PA+3-MA组和PA+3-MA+QUE40组。2种不同实验分组均检测细胞内甘油三酯含量、脂滴蓄积情况、脂解和脂噬相关分子表达情况及共定位水平、自噬底物P62的表达水平。结果 与对照组比较,PA组肝细胞的甘油三酯含量和脂质蓄积程度明显升高,脂解相关分子脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglycerides lipase, ATGL)和比较基因识别因子58(comparative gene identification-58,CGI58),以及脂噬相关分子Ras相关蛋白7(Ras-related protein 7, RAB7)和微管相关蛋白1B轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3β)的蛋白表达水平、平均荧光强度及共定位程度均明显降低,而P62表达增强(P<0.05)。与PA组相比,PA+QUE40组的甘油三酯含量和脂质蓄积程度显著降低,脂解和脂噬相关分子的蛋白表达水平、平均荧光强度及共定位程度也明显增加,而P62明显降低(P<0.05)。在脂肪变性肝细胞中加入3-MA抑制自噬后,QUE对脂肪变性肝细胞的脂质蓄积的改善作用以及对脂解和脂噬相关分子的调控作用基本被抵消。结论 槲皮素可促进脂解和脂噬途径相关分子的表达及相互作用,从而减轻脂肪变性HHL-5细胞内的脂质蓄积,但以上作用可被自噬阻断剂3-MA削弱。

聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒,测定包封率、载药量、粒径、Zeta电位,单因素试验优化处方,XRPD进行晶型分析,考察体外释药、稳定性。24只大鼠随机分为4组,分别灌胃给予杨梅苷、杨梅苷固体脂质纳米粒、杨梅苷固体脂质纳米粒+聚乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(150 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定杨梅素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为药脂比1∶15,单硬酯酸甘油酯与聚乙二醇硬脂酸酯比例10∶1,泊洛沙姆188浓度0.8%,均质次数8次,包封率为81.75%,载药量为5.04%,粒径为207.56 nm,PDI为0.092,Zeta电位为-14.79 mV。杨梅苷以无定型状态存在于聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒中,18 h内累积释放度为64.71%,模拟胃液中2 h内、模拟肠液中12 h内稳定性良好。与原料药、固体脂质纳米粒比较,聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒t_(max)延长(P<0.05),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.05,P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至4.60倍。结论聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒可改善杨梅苷稳定性,促进其口服吸收。

化痰通遂汤联合督脉三针对脑卒中后吞咽障碍患者脂质过氧化及血清NPAS4、PARK7的影响

目的探讨化痰通遂汤联合督脉三针对脑卒中后吞咽障碍对患者脂质过氧化及血清NPAS4、PARK7的影响。方法研究将前瞻性选取2020年3月—2022年4月在医院诊疗的86例脑卒中后吞咽障碍患者为受试对象,根据数字表法将其分成试验组与对照组,各43例,对照组予以化痰通遂汤治疗,试验组予以化痰通遂汤治疗的同时采用督脉三针治疗,密切观察并对比两组研究对象的疗效,治疗前后的氧化应激和脂质过氧化指标,血清NPAS4、PARK7水平,NIHSS评分、FMA评分、SSA评分及SIS评分。结果应用化痰通遂汤联合督脉三针治疗后的试验组疗效明显高于单纯应用化痰通遂汤治疗的对照组(P<0.05);治疗后两组患者的SOD、iso-PGs指标较治疗前均上升(P<0.05),且试验组SOD指标高于对照组(P<0.05),但试验组iso-PGs指标较治疗前无明显差异(P>0.05),且试验组低于对照组(P<0.05),MDA指标治疗较治疗前显著下降(P<0.05),且试验组低于对照组(P<0.05);治疗前两组的NIHSS评分、SSA评分、FMA评分及SIS评分均无显著性差异(P>0.05),治疗后试验组患者的FMA评分及SIS评分均显著高于对照组(P<0.05),而NIHSS评分、SSA评分显著低于对照组(P<0.05);治疗前两组血清NPAS4、PARK7水平较治疗前均无显著性差异(P>0.05),且试验组患者血清NPAS4、PARK7水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论应用化痰通遂汤联合督脉三针治疗脑卒中后吞咽障碍,效果极佳,联用能够改善氧化应激以及脂质过氧化指标,降低血清NPAS4、PARK7水平,提高患者生存水平,安全可靠,临床应用前景较为宽阔。

四氢姜黄素脂质制剂处方优化

目的优化四氢姜黄素脂质制剂处方。方法考察四氢姜黄素在不同类型脂质处方中的溶解度和溶出度,以确定适宜的处方类型,采用D-最优混料设计考察不同处方在简化体外消化试验中四氢姜黄素时间-浓度曲线的曲线下面积(AUC),探索不同载药量对脂解条件下制剂体外性能的影响。结果最佳条件为蓖麻油7.6%,吐温8080%,Transcutol HP 12.4%,载药处方具有体外消化试验中最大的释放曲线AUC。最佳载药量为60%饱和载药量,即213 mg/g。结论该方法稳定可靠,预测性好,可用于四氢姜黄素脂质制剂处方。

基于ox-LDL/LOX-1信号通路探讨脂质代谢紊乱促进肺癌进展中的机制

目的基于氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)/人凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)信号通路探讨脂质代谢紊乱促进肺癌进展的机制。方法收集81个已鉴定的具有成对相邻非癌组织(离肿瘤至少5 cm)的肺腺癌组织,使用免疫组织化学检测LOX-1表达。肺腺癌细胞系(A549、H1299细胞)中过表达LOX-1。用Transwell测定细胞侵袭能力。用不同浓度oxLDL处理细胞,并检测细胞中LOX-1表达情况。结果在包含原发性人肺癌和匹配的邻近非癌组织中,肿瘤中LOX-1染色比非癌组织样品明显增强(中值H分数99.4 vs.16.2,P<0.001)。高LOX-1表达与低生存显著相关(P<0.001)。与无淋巴结转移的患者相比,发生淋巴结转移患者的癌组织具有更高的LOX-1水平(中值H分数83.2 vs.121.1,P<0.01)。LOX-1过表达显著促进肺癌细胞的侵袭转移细胞数(P<0.01)。此外,LOX-1是ox-LDL诱导的肺癌细胞转移所必需的功能靶点。伊他替尼抑制LOX-1过表达的A549在体外的转移能力。结论LOX-1的表达随着oxLDL水平的升高而增加,并且LOX-1的表达上调促进了肺癌细胞的转移,其作用机制可能与激活Janus激酶/转录因子激活子(JAK1/STAT6)信号通路有关。