组蛋白乙酰基转移酶1在肝癌细胞中介导的蛋白质乙酰化修饰谱分析

赖氨酸乙酰化是重要的蛋白质翻译后修饰之一,广泛存在于细胞的生理和病理过程。组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)作为第一个被鉴定的蛋白ε-氨基赖氨酸乙酰基转移酶,具有介导组蛋白和非组蛋白乙酰化的作用。然而,在肝癌细胞中HAT1介导的乙酰化蛋白质及其修饰位点目前仍不清楚。本研究首先揭示了HAT1在肝癌组织中呈高表达,并且与预后呈负相关。在建立HAT1敲除HepG2肝癌细胞系的基础上,应用乙酰化修饰蛋白质组学,对肝癌细胞的蛋白质乙酰化修饰谱进行了鉴定和分析,结果鉴定出HepG2肝癌细胞中547种蛋白质上的858个乙酰化修饰位点,发现HAT1影响了68种蛋白质上74个位点的赖氨酸乙酰化修饰。生物信息学分析确定了HAT1修饰的底物蛋白质与多种信号通路有关,涉及疾病发生过程、RNA生物学、剪接体和核小体组装、氧化应激、各种信号通路以及代谢途径等。我们进一步验证了HAT1介导的蛋白质乙酰化修饰能够促进肝癌细胞的异常脂代谢。应用CCK8、克隆形成和Edu细胞增殖检测等方法证实,HAT1对肝癌细胞的增殖具有明显的促进作用。为此,本研究揭示的肝癌细胞中HAT1介导的蛋白质乙酰化修饰位点,对进一步阐明肝癌发病的分子机制具有重要的理论意义,并为开发抗肝癌药物提供了精准的靶标。

啤酒酿造过程中脂转移蛋白糖基化形式的检出

利用MAIDI TOF生物质谱检测出了啤酒中LTP的糖基化形式,肯定了啤酒中糖蛋白的存在。LTP糖基化形式存在于从麦芽到啤酒泡沫的整个啤酒酿造过程。酿造过程中蛋白质糖基化的发生增加了蛋白的亲水性,从侧面解释了LTP等强疏水性蛋白稳定存在于啤酒中的原因。

制麦和发酵过程中脂转移蛋白LTPl变性和糖基化过程的验证

本文利用圆二色性光谱和质谱检测技术,对制麦和发酵过程的蛋白LTP1化学特性和物理结构的影响进行了研究.首先将蛋白质从二棱大麦芽及相应的啤酒酿造过程中提纯.研究表明,麦芽中的LTP1与大麦中的含量没有太大差别,有趣的是,从麦芽中还分离到了LTP1的异构形式LTP1b和LTP1c.而且,麦芽中LTP的三种异构形式都表现出了不同程度的糖基化,而且仍保持α-螺旋结构.糖蛋白化的LTP1和LTP1b可以在糖化过程中得到回复,变成LTP1和LTP1b.实验还证实,糖蛋白化LTP1在麦汁煮沸过程中分子结构展开,呈现与以前报道的从啤酒中分离出来的变性LTP一样的结构.

基于LPL/CPT1/FABP4通路探讨健脾化痰方对非酒精性脂肪性肝病“炎癌转化”的抑制作用

目的 基于脂蛋白脂肪酶(LPL)/肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)/脂肪酸结合蛋白质4(FABP4)通路探讨健脾化痰方对非酒精性脂肪性肝病小鼠“炎癌转化”的抑制作用。方法 30只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、健脾化痰方低剂量组(19.2 g/kg)、健脾化痰方高剂量组(38.4 g/kg)和依折麦布组(10.0 mg/kg),每组6只。除对照组外,其他各组小鼠腹腔注射二乙基亚硝胺(25 mg/kg)。4周后,除对照组正常饲养外,其他各组小鼠予高脂、高胆固醇饲料喂养26周,建立非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌(NASH-HCC)模型。灌胃给药每日1次,持续26周。比较各组小鼠肝脏肿瘤数量、最大肿瘤表面积。HE染色、油红O染色观察肝脏组织炎症、脂肪变性和气球样变。酶联免疫吸附测定法检测肝脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量。实时荧光PCR法检测肝脏杆状病毒凋亡抑制蛋白5(Birc5)、淋巴细胞抗原6复合位点D(Ly6d)、CD44抗原(CD44)、增殖标志物Ki-67(Mki67)等肿瘤相关标志物的mRNA表达。蛋白质印迹法检测各组小鼠肝脏LPL、CPT1、FABP4的蛋白表达。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏出现肿瘤,Ly6d、Birc5、CD44、Mki67 mRNA水平升高,肝脏损伤明显,脂肪变性及气球样变严重,肝脏有大量脂滴蓄积,血清ALT、AST及肝脏TNF-α均升高,血清TC、TG、LDL、HDL水平升高,肝脏LPL、CPT1B、FABP4蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组小鼠相比,健脾化痰方低剂量组和依折麦布组Birc5 mRNA表达降低(均P<0.05);健脾化痰方低、高剂量组和依折麦布组肝脏损伤不同程度地缓解,表现为脂肪变性和气球样变性的减少、脂滴蓄积的减少及肝脏炎症因子TNF-α的降低(均P<0.05)。与模型组比较,健脾化痰方低剂量组、依折麦布组血清TC、TG、LDL、HDL降低(均P<0.05);与健脾化痰方低剂量组比较,依折麦布组血清TC、LDL、HDL降低(均P<0.05)。与模型组比较,健脾化痰方低剂量组CPT1B、FABP4的蛋白表达降低,健脾化痰方高剂量组LPL、FABP4的蛋白表达降低(均P<0.05)。结论 健脾化痰方可能通过调控LPL/CPT1/FABP4脂质代谢信号通路,促进TC和TG的分解,改善模型小鼠肝组织脂肪变性及其炎症损伤程度,抑制模型小鼠肿瘤发生发展,从而发挥抗NASH-HCC的作用。

脂肪因子在代谢综合征中的作用新进展

代谢综合征（ metabolic syndrome ，MS）是心血管多种危险因素在个体内集聚的状态，包括肥胖尤其是向心性肥胖、胰岛素抵抗（ insulin resistance ，IR）、2型糖尿病（ type 2 diabe-tes mellitus，T2DM ）、血脂异常、高血压、冠心病、非酒精性脂肪肝、低度炎症反应等。其中肥胖和IR为中心环节［1］。白色脂肪组织（white adipose tissue，WAT）是不均匀的混合物，主要成分为前脂肪细胞和脂肪细胞，还包括渗透入WAT的非脂肪细胞和组织成分：如内皮细胞、巨噬细胞、血管、神经等。 WAT可分泌多种脂肪因子［2］，自1994年Halaas等应用DNA重组技术，在大肠杆菌中合成肥胖基因表达产物，并命名为瘦素以来，已发现10余种脂肪因子，包括瘦素（ Lep-tin）、脂联素（ Adiponectin ）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（ plas-minogen activator inhibitor-1， PAI-1）、血管紧张素原（ angio-tensinogen，AGT）、血清淀粉样蛋白 A （ serum amyloid A， SAA）、抵抗素（Resistin）、锌α2糖蛋白（zinc-α2-glycoprotein， ZAG）、Apelin、视黄醇结合蛋白-4（ retinol binding protein-4， RBP-4）、Vaspin （ visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor ）、内脂素（ Visfatin ）、网膜素（ Omentin ）、趋化素（ Chemerin ）。渗透入WAT的炎症细胞分泌的炎症因子：肿瘤坏死因子-α（ tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）也属于脂肪因子。现将脂肪因子在MS，特别是在肥胖及IR中的作用新进展综述如下。