白桦脂醇酯类衍生物合成及体外抗氧化活性评价

目的通过对白桦脂醇不同位点的修饰及进一步抗氧化活性分析,探讨白桦脂醇各修饰位点与抗氧化活性间的关系。方法以白桦脂醇为起始物,以四氢呋喃(THF)或二甲基甲酰胺(DMF)作溶剂,控制反应温度及酸酐当量,进行酰化、羟基保护、氯铬酸吡啶鎓盐(PCC)氧化、脱保护基等反应合成7个目标化合物,即3,28-二乙酰基白桦脂醇、3,28-二烯丙酰基白桦脂醇、28-乙酰基白桦脂醇、28-烯丙酰基白桦脂醇、3-乙酰基白桦脂醇、3-烯丙酰基白桦脂醇和3-羰基白桦脂醇。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定目标化合物的体外抗氧化活性。结果白桦脂醇衍生物的结构通过核磁共振(NMR)图谱、高分辨液质联用(HRLC-MS)综合解释得以验证。DPPH法测试结果显示,白桦脂醇、3-乙酰基或烯丙酰基白桦脂醇及28-乙酰基或烯丙酰基白桦脂醇对DPPH均有一定的清除作用,且呈浓度依赖性,28-乙酰基或烯丙酰基白桦脂醇对DPPH的清除效果优于白桦脂醇及3-乙酰基或烯丙酰基白桦脂醇。在相同条件下,3-羰基白桦脂醇与3,28-双酰基(乙酰基或烯丙酰基)取代白桦脂醇无明显清除DPPH的作用。此外,烯丙酰基修饰的白桦脂醇体外抗氧化活性优于对应的乙酰基修饰的白桦脂醇。结论建立了简单易行的白桦脂醇酰化及羟基官能团保护方法。28-烯丙酰基白桦脂醇表现出更优良的体外抗氧化活性,提示白桦脂醇28-位引入吸电子作用基团可能提高其抗氧化作用。

白桦脂醇纳米乳的制备及其在S180荷瘤小鼠体内分布研究

目的制备白桦脂醇纳米乳,研究其在S180荷瘤小鼠体内的分布情况。方法通过相转变法制备白桦脂醇纳米乳,腹腔注射白桦脂醇纳米乳和白桦脂醇注射液,采用HPLC方法测定小鼠各组织中的药物浓度并计算药动学参数,分析比较两种制剂在小鼠体内组织分布情况。结果白桦脂醇纳米乳在各组织中Cmax和AUC依次为:肿瘤组织>肝>肾>脾>肺>心脏,且均高于白桦脂醇注射液组(P<0.05);肿瘤组织和肝脏的峰浓度比Ce分别为1.53和1.54;肿瘤的靶向效率Te值最大。结论与白桦脂醇注射液相比,白桦脂醇纳米乳在肿瘤组织和肝脏中的分布显著增加(P<0.01),白桦脂醇纳米乳对肿瘤组织具有明显的靶向性。

白桦脂醇的药理作用及其机制研究进展

总结归纳近年来白桦脂醇的药理作用及其机制研究,以期为白桦脂醇进一步开发和应用提供理论依据。白桦脂醇主要是从桦树皮中提取出来的三萜类化合物,其抗肿瘤活性较为突出,相关的分子作用机制主要为阻滞肿瘤细胞周期,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,以及诱导细胞凋亡。此外白桦脂醇还可通过多途径、多环节及多靶点发挥抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、神经保护、肝保护、心血管保护、皮肤保护、抗糖尿病及并发症、杀虫、抗疟疾及抗胆结石等多重药理作用。

白桦脂醇的药理作用研究进展

白桦脂醇是桦树皮提取物白桦三萜物质中的主要成分,具有抗菌、抗病毒、保肝、利胆、抗癌等多种作用。文中通过整理国内外发表的有关文献,对白桦脂醇药理作用的研究进展情况进行整理分析,以期为白桦脂醇的深入研究及开发利用提供理论依据。

白桦脂醇、白桦脂酸的研究进展及其前景

白桦脂醇、白桦脂酸属羽扇烷型三萜类化合物,近年来,这两种天然产物及其衍生物在抗艾滋病病毒、抗肿瘤等方面表现出较强生物活性受到广泛关注,已成为当今一个研究热点。本文从白桦脂醇、白桦脂酸的来源、衍生化研究、生物活性以及提取制备等方面对近年来的相关研究进行概括总结,并对其研究前景进行展望。

白桦脂醇通过抑制PI3K/AKT途径抑制宫颈癌小鼠移植瘤增殖

目的:阐明白桦脂醇对宫颈癌细胞系c4-1移植瘤模型裸鼠的影响和机制。方法:皮下注射宫颈癌细胞系c4-1建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为3组:对照组(DMSO)、白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200),进行后续使用。白桦脂醇治疗后,检测移植瘤体积和裸鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况;Westernblot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果:与对照组(DMSO)相比较,白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200)肿瘤体积明显减小(P<0.01),裸鼠存活率明显增加(P<0.01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P<0.01),且PI3K/AKT磷酸化水平明显被抑制(P<0.01)。结论:白桦脂醇能抑制c4-1移植瘤体积,增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。白桦脂醇可能通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌细胞系c4-1移植瘤。

白桦脂醇对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用

目的:探讨白桦脂醇对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:CCK-8试剂盒检测不同浓度白桦脂醇对细胞活性的影响;Western blot检测细胞中Ki67和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达水平。结果:白桦脂醇浓度低于50μmol/L时,对细胞活性没有显著影响;不同浓度白桦脂醇处理人胃癌MGC-803细胞后,细胞增殖倍数显著降低;细胞中Ki67和PCNA的表达水平显著降低;发生凋亡的细胞比率显著增加,细胞中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3表达水平显著升高;细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率显著降低,p65和mTOR表达水平显著降低,上述作用均具有白桦脂醇剂量依赖效应。结论:白桦脂醇抑制胃癌MGC-803细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路激活相关。

超声波辅助提取桦褐孔菌中白桦脂醇的研究

通过单因素试验和正交试验研究了超声波技术对桦褐孔菌中白桦脂醇提取质量比的影响。当提取时间20min、温度40℃、液料比20mL/g、溶剂为丙酮时,采用气相色谱质谱检测白桦脂醇的质量比可达9.868g/kg。与传统方法相比,应用超声波辅助提取桦褐孔菌中的白桦脂醇,提取时间短、提取质量比高,是一种有效的桦褐孔菌白桦脂醇提取方法。

落叶松脂醇体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:通过体外细胞培养技术考察落叶松脂醇(laricircsinol,以下称LA)对肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:采用MTT比色法、生长曲线法考察LA对肿瘤细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察LA作用PC-3细胞后的细胞形态,流式细胞术检测LA对PC-3、KB、NB4、B16肿瘤细胞的凋亡率。结果:LA对4种肿瘤细胞均有较强的细胞毒作用,IC50分别为(0.32±0.04)、(3.92±0.09)、(0.59±0.05)、(2.17±0.11)μg.mL-1;生长曲线法结果表明LA对PC-3细胞的抑制作用呈显的著量-效关系,且在一定剂量范围内呈显著的时-效关系;荧光显微镜观察结果表明给药组细胞的细胞核改变和凋亡小体的形成;流式细胞术检测结果表明随LA浓度的增加细胞凋亡率增加,呈显著的量-效关系。结论:LA对多种肿瘤细胞均有抑制作用,诱导细胞凋亡是其作用机制之一。

白桦脂醇的体内抗肿瘤作用及机制

目的:研究白桦酯醇的体内抗肿瘤作用及机制。方法:采用小鼠肝癌细胞(H22)建立荷瘤小鼠动物模型,白桦脂醇灌胃10 d后,计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数;MTT法测定小鼠T淋巴细胞转化功能及NK细胞杀伤活性。结果:白桦脂醇三个剂量组、阳性对照组瘤重均减轻,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),中剂量组抑瘤率最高;三个剂量组脾指数与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),中、高剂量组与阴性对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.05);中剂量组胸腺指数与阴性、阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组T淋巴细胞转化率与阴性对照组和阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组在效靶比为25∶1时,NK细胞杀伤活性高于阳性对照组(P<0.05),在效靶比为100∶1,杀伤活性高于阴性对照组(P<0.05);中剂量组在效靶比为25∶1、50∶1、100∶1时,NK细胞杀伤活性均同时高于阴性对照组和阳性对照组(P<0.05);高剂量组在效靶比为25∶1时,NK细胞杀伤活性高于阴性对照组和阳性对照组(P<0.05)。结论:白桦脂醇通过刺激激活免疫器官,提高T淋巴细胞转化功能、提高NK细胞杀伤活性来抑制肿瘤细胞增殖。

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路调控作用。方法:使用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,Western blot和PCR法测定MAPK通路中关键蛋白激酶和TYP、TRP-1、TRP-2、MITF、p38、p-p38蛋白含量及mRNA表达;加入p38信号通路阻断剂(SB203580)之后,测定上述蛋白和mRNA表达。结果:白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性有抑制作用(P<0.05或P<0.01),SB203580(10μmol/L)能阻断白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性抑制作用;白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白及mRNA表达有抑制作用(P<0.05或P<0.01),加入SB203580后,阻断p38-MAPK信号通路,白桦脂醇以上作用受到显著抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:表明白桦脂醇通过MAPK信号通路中的p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素合成。

白桦脂醇对AGEs诱导H9C2心肌细胞自噬的影响

目的:探讨白桦脂醇(Betulin)对晚期糖基化终末产物(AGES)诱导的H9C2心肌细胞自噬的影响。方法:将心肌细胞随机分成5组:正常H9C2组,AGEs组,低剂量加药组(5μmol/L),中剂量加药组(10μmol/L),高剂量加药组(20μmol/L)。CCK8测定0、1、2、3、4d细胞活力。试剂盒检测肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)的表达。Western blot检测Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PI3K和AKT的表达。免疫荧光染色检测LC3的表达量。结果:AGEs组与正常H9C2组相比,H9C2细胞增殖倍数明显降低;Mb、CK-MB和cTnⅠ的表达显著上调;Beclin1表达显著上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显上升,P62的表达显著下调;免疫荧光检测LC3光点明显增加;同时磷酸化激活的PI3K和AKT的表达水平显著增加(P<0.01)。加药组与AGEs组相比,H9C2心肌细胞的增殖倍数明显增加;Mb、CK-MB和cTnⅠ的表达水平显著降低;Beclin1表达显著下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显下降,P62的表达显著上升;另外LC3免疫荧光结果显示LC3光点明显减少;同时,磷酸化PI3K和磷酸化AKT的表达水平显著下降(P<0.01)。结论:白桦脂醇通过抑制PI3K/AKT的活性进而降低AGEs诱导的H9C2心肌细胞自噬水平。

八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因的克隆及分析

目的:通过末端快速扩增(RACE)技术获得临安地区八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶基因的全序列,探讨八角莲内异松树脂醇二酯脱氢酶基因的序列特点。方法:以浙江省临安地区八角莲为材料,根据同源序列法分别进行3′末端RACE和5′末端RACE,获得闭联异松树脂醇二酯脱氢酶基因的全序列。结果:以八角莲属的八角莲为材料获得闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因序列为国际首次报道。此cDNA全长序列991bp,5′端非翻译区42bp,3′端非翻译区112bp。开放阅读框编码278个氨基酸,分子量为29253.3道尔顿,等电点为6.328。提交GeneBank序列号为EU573789。RT-PCR初步分析发现该酶的mRNA产物在茎内含量丰富。氨基酸序列比对表明闭联异松树脂醇二酯脱氢酶的物种差异性较大。结论:获得八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因。

白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响

目的探究白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤(NK)细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响。方法通过皮下注射人宫颈癌HeLa细胞复制宫颈癌小鼠模型。将45只模型小鼠随机分为模型组、白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组,每组15只。另取15只未做处理的小鼠作为对照组。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组白桦脂醇灌胃干预(100 mg/kg)。白桦脂醇+SB203580组通过腹腔注射SB203580(50 ng/kg)抑制p38通路。采用免疫组织化学染色检测细胞增殖。比较各组p38蛋白、NK细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性。结果白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组肿瘤体积和质量小于模型组(P<0.05),并且白桦脂醇+SB203580组肿瘤体积和质量小于白桦脂醇组(P<0.05)。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组免疫组织化学染色评分、p38蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05),并且白桦脂醇+SB203580组免疫组织化学染色评分、p38蛋白相对表达量低于白桦脂醇组(P<0.05)。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组脾脏指数、NK细胞杀伤力、淋巴细胞增殖活性高于模型组(P<0.05),并且白桦脂醇+SB203580组脾脏指数、NK细胞杀伤力、淋巴细胞增殖活性高于白桦脂醇组(P<0.05)。结论白桦脂醇通过抑制p38通路抑制宫颈癌细胞增殖,并提高NK细胞杀伤力和淋巴细胞增殖活性。

Threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯的全合成

报道了双木脂素threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯的全合成.以香草醛为原料,经过两步Sto-bbe反应构建木脂素骨架,然后再用LiAlH4还原、加氢后,产物经柱层析分离,得到2个异构体meso-和threo-(±)-开环落叶松脂素;根据其NMR,IR和HRMS等谱图确认发现,极性较小的产物threo-(±)-开环落叶松脂素为合成的关键中间体.threo-(±)-开环落叶松脂素与甲氧甲基(MOM)保护的阿魏酸缩合得到目标产物threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯.合成采用汇聚法,经11步,以约8%的总产率得到了目标产物.该合成方法具有原料价廉易得及操作简便的优点,并具有一定的实用价值.

磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C对内毒素介导枯否细胞激活的抑制作用

目的研究磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)对内毒素介导的肝Kupffer细胞(枯否细胞,KCs)激活及其CD14表达的抑制作用。方法Wistar大鼠20只,分为PI-PLC组和LPS组,测定细胞培养液中TNF-α和IL-6含量变化,用免疫组化观察KCs膜CD14和核NF-κB的相对活性,测定KCs中CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达和KCs膜CD14蛋白含量变化。结果不同浓度的LPS刺激60 min后,PI-PLC组培养液中TNF-α与IL-6的含量随LPS浓度的增高而增加,但明显低于LPS组(P<0.01);CD14抗体染色显示,PI-PLC组部分KCs为弱阳性,而LPS组KCs为阳性细胞;NF-κB P65抗体染色显示,PI-PLC组部分KCs为弱阳性细胞,而LPS组KCs为强阳性细胞;PI-PLC组NF-κB活性在10μg/mL以上LPS刺激下才有升高,其相对光密度值显著低于LPS组(P<0.01);在相同浓度LPS刺激后,PI-PLC组CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达显著低于LPS组(P<0.01);PI-PLC组在相同浓度LPS刺激120 min后CD14蛋白表达才明显,LPS组在100μg/mL LPS刺激后30 min CD14蛋白开始升高,两者有显著性差异(P<0.01)。结论PI-PLC对LPS介导的KCs激活有明显的抑制作用,其机制可能与抑制KCs中CD14蛋白的表达有关。

白桦树皮中白桦脂醇的抗氧性测定研究

建立了一种测定白桦树皮中白桦脂醇对羟自由基清除率的新方法。在HCl-NaAc（pH值4．20）缓冲溶液中，Fenton反应产生的羟自由基被过量的KI捕获；生成I^-3与罗丹明B（λmax；为556nm）形成缔合物，导致其吸收峰降低。羟自由基质量浓度（以H2O2浓度计）在0．14～0．68mg／L范围内与罗丹明B体系的吸光度降低值成正比，据此测定了白桦脂醇和抗坏血酸抗氧剂的抗氧活性。

HPLC-DAD法同时测定酸枣仁皂苷中酸枣仁皂苷A、B和白桦脂酸、白桦脂醇

目的采用HPLC-DAD法同时定量测定酸枣仁皂苷中酸枣仁皂苷A、B和白桦脂酸、白桦脂醇。方法酸枣仁以甲醇提取,采用Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,体积流量1 m L/min,运行时间120 min,检测波长204 nm,柱温35℃。结果 4种成分的进样量与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 0）;加样回收率为99.2%~100.2%。结论经方法学验证,所采用的测定方法准确稳定,灵敏度高,可作为酸枣仁皂苷多指标定量测定方法。

一种高效的白桦树皮中白桦脂醇分离、纯化方法

通过比较白桦树皮中白桦脂醇的不同的提取方法,获得一种简单、高效的白桦脂醇提取、纯化方法。通过对不同浸提时间比较、超声震荡方法及旋转蒸发仪回收提取3种白桦脂醇提取方案的比较,进一步利用甲醇-氯仿重结晶法、无水乙醇重结晶法及大孔吸附树脂层析法对获得的白桦脂醇初提取物进行纯化。获得了白桦脂醇提取及纯化的最佳方案。用95%乙醇溶液,液固比50∶1(mL∶g)浸泡白桦树皮样品120 h后,用滤纸过滤,收集滤液,将滤液50℃加热回流5 h,减压蒸馏得到米白色固体粉末。接着以70 mL乙酸乙酯为溶剂,将得到的固体加热回流90 min,趁热过滤。滤液使用坩埚50℃浓缩至干。再以无水乙醇为溶剂进行重结晶,无水乙醇∶固体=30 mL∶1 g,-20℃重结晶,重结晶产率可达38.00%,最高纯度达到99.81%。优化后的白桦脂醇提取纯化方法操作简便,产量较高、试剂安全,是一种可用于规模化提取的有效方法。

基于IKKβ/NF-κB信号通路探讨白桦脂醇对ApoE-/-小鼠的血管保护作用及机制

目的:建立高脂血症小鼠模型,评价白桦脂醇对动脉的保护作用,并从脂质代谢紊乱、血管内皮功能失衡及炎症反应等方面探讨其作用机制。方法:将36只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙片组、白桦脂醇组,每组12只,以高脂饲料喂养12 w构建小鼠高脂血症模型。另取12只C57BL/6雄性小鼠为正常对照组,普通饲料喂养。阿托伐他汀钙片组给予阿托伐他汀钙片5 mg/kg灌胃给药,白桦脂醇组以20 mg/kg剂量灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃相应体积生理盐水,持续给药12 w。第12周末处死小鼠,取小鼠主动脉进行HE染色,光学显微镜下观察血管组织病理学变化;检测小鼠血脂水平,并检测主动脉组织中ET-1、NO、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及eNOS、iNOS、IKKβ、p-IKKβ、NF-κBp65蛋白表达。结果:白桦脂醇能有效调节ApoE-/-小鼠的脂质代谢紊乱,调节血管内皮功能失衡,抑制IKKβ/NF-κB信号通路,从而降低炎症因子的表达,抑制炎症反应的发生。结论:白桦脂醇能改善ApoE高脂血症模型小鼠动脉管壁病理学改变,有效保护动脉,其作用机制可能与改善脂质代谢紊乱、调节血管内皮功能失衡及抑制IKKβ/NF-κB信号通路进而减少炎症反应的级联放大有关。