脆性组氨酸三联体基因甲基化与前列腺癌的相关性及临床意义

目的:检测前列腺癌患者血清中脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)甲基化状态,探讨FHIT甲基化与前列腺癌患者临床病理特征及5年生化复发和临床进展之间的关系。方法:采用MSP法检测78例前列腺癌和45例前列腺增生患者血清中FHIT甲基化表达状态,分析FHIT甲基化率与前列腺癌患者临床病理的关系,采用Kaplan-Meier生存分析FHIT甲基化率与前列腺癌5年生化复发和5年临床进展之间的关系。结果:前列腺癌患者血清中FHIT基因甲基化率为48.72%,高于前列腺增生患者的4.44%,差异有显著意义(PP<0.05)。FHIT甲基化与前列腺癌患者年龄、术前前列腺特异抗原(PSA)、TNM分期、Gleason分级有关;在前列腺癌Gleason分级≤7和Gleason 8~10分级中,FHIT甲基化率分别为59.18%和31.03%,在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期前列腺癌患者中,FHIT甲基化率分别为37.50%和66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。甲基化组5年复发率和5年累计临床进展率高于非甲基化组(P<0.05)。结论:FHIT甲基化与前列腺癌临床病理有关,检测FHIT甲基化状态有助于评估前列腺癌患者的临床预后。

Peutz-Jeghers综合征脆性组氨酸三连体基因突变与癌变的关系

背景与目的:Peutz-Jeghers综合征(Peutz-Jegherssyndrome,PJS)是一种常染色体显性遗传性疾病。脆性组氨酸三连体(fragilehistidinetriad,FHIT)基因是定位于3p14.2脆性位点区域的重要抑癌基因。我们以往的研究结果认为PJS患者在3p14.2区域可能存在易感基因。本文旨在明确PJS患者FHIT基因突变与癌变的关系和FHIT基因的改变及规律。方法:应用变性高效液相色谱(DHPLC)分析、聚合酶链反应-单链构象多肽分析技术(PCR-SSCP)和DNA测序方法,对6个PJS家系中的15个患者及其20例正常家族成员的FHIT基因进行了研究。结果:在6个家系中,有1位患者的FHIT基因第159位核苷酸由G→T,相应的第54位密码子编码的氨基酸由谷氨酸变成终止密码子;在第62位密码子处存在碱基G插入,使读码框架发生移位,在第111位密码子处提前出现终止密码子;在2例癌变患者的息肉标本DNA和癌标本DNA中检测到FHIT基因第8外显子的纯合性缺失;在3个散发的PJS患者中发现,患者与其母亲在第8外显子,有相同的SSCP带型和DHPLC峰型,DNA测序结果显示,在第98位密码子处发生同义突变,由CAT→CAC,相应编码的氨基酸未发生改变,均为苏氨酸。另外,有7例患者和2例正常人在FHIT基因的第6内含子5'端第42位核苷酸位点发生由A→G的点突变。

脆性组氨酸三聚体基因及错配修复基因hMLH_1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三聚体基因(fragilehistidinetriad,FHIT)和hMLH1基因在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其相互关系。方法采用免疫组化法检测69例口腔鳞状细胞癌和40例正常口腔黏膜组织中FHIT和hMLH1的表达情况。资料的统计学处理用SPSS软件完成,比较用χ2检验。结果口腔鳞状细胞癌组织中FHIT、hMLH1的阳性表达率(46.4%,47·8%)低于正常口腔黏膜组织(77.5%,77.5%),有显著性差异(P<0·05)。结论FHIT和hMLH1可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展中发挥重要作用。

前列腺癌脆性组氨酸三体Fhit蛋白高表达及其意义

目的 讨论前列腺癌中Fhit基因蛋白 (FHIT)表达状况及其与临床病理的可能关系。方法 采用兔抗人Fhit蛋白抗体和枸橼酸 微波 SP免疫组化方法检测前列腺癌 5 5例、前列腺上皮内瘤变 4 2例以及正常形态前列腺组织 4 3例。结果 5 5例前列腺癌组织 4 8例中Fhit(+) ,39例强 (+) ,7例 (- ) ;4 2例前列腺上皮内瘤变组织 35例(+) ,9例强 (+) ,7例 (- ) ;4 3例前列腺正常形态组织 7例 (+) ,仅 1例强 (+) ,36例 (- ) ;三者比较差异极显著。Fhit蛋白阳性表达的癌组织学分级为Ⅰ级癌占 6 2 5 % ,Ⅱ级癌占 80 % ,Ⅲ级癌占 93 8% ,各级癌组间强阳性差异极显著。Fhit蛋白表达在前列腺上皮内瘤变 (不典型增生组织 )中的分布为Ⅰ级 80 % ,Ⅱ级 85 7% ,Ⅲ级 87 5 % ;三组强阳性比较差异极显著。结论 Fhit表达可能与前列腺癌的发生和分化有关 ,Fhit过表达可能提示其抑癌功能丧失 ,Fhit强阳性表达可能成为辅助前列腺癌诊断的新标记。

头颈部鳞状细胞癌组织中脆性组氨酸三联体基因的表达

目的 :研究头颈部鳞状细胞癌组织 (HNSCC)中脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因的表达及其与淋巴结转移的关系。方法 :应用免疫组化SP法 ,检测 80例HNSCC及 4 1例正常鳞状上皮标本中FHIT的表达。结果 :HN SCC及正常鳞状上皮组织中FHIT的阳性表达率分别为 5 3.75 % (4 3/80 ) ,10 0 % (4 1/41) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。HNSCC中 ,有淋巴结转移组与无淋巴结转移组FHIT的阳性率分别为 37.1% (13/35 )和 6 6 .7% (30 /45 ) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :HNSCC的发生、演进中FHIT起重要作用 。

人类乳头瘤病毒与脆性组氨酸三联体基因蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的作用

目的探讨人类乳头瘤病毒(HPV)和脆性组氨酸三联体基因(FHIT)蛋白在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的作用及其之间的关系。方法用免疫组化SP法检测SCC和癌旁组织皮损中HPV及FHIT蛋白的表达。结果HPV和FHIT蛋白在癌旁正常皮肤鳞状上皮组织、非典型增生组织、原位癌及浸润癌组织中的表达具有明显差异性(P<0.05);且FHIT蛋白在分化不同的肿瘤组织表达具有差异性(P<0.01);HPV和FHIT蛋白在肿瘤组织中的表达呈负相关。结论HPV和FHIT共同参与了SCC的发生,FHIT表达状况与SCC的分化程度有关。

肝细胞癌组织中脆性组氨酸三联体和Survivin蛋白的表达

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)和Survivin蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测48例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中FHIT蛋白和Survivin蛋白的表达,并分析2者的表达与HCC临床病理特征的关系。结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中FHIT的阳性表达率分别为45.8%、88.0%及93.3%,差异有统计学意义(P<0.05);FHIT蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与肿瘤大小、有无包膜、是否有门静脉癌栓、甲胎蛋白的含量、是否感染乙肝无关(P>0.05)。HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Survivin的阳性表达率分别为72.9%,16.0%及20.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Survivin阳性表达率与HCC患者的肿瘤大小有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05)。HCC组织中FHIT与Survivin的表达呈负相关(r=-0.341,P=0.018)。结论:FHIT的表达缺失和Survivin的过表达可能共同参与了HCC的发生和发展。

口腔癌及癌前病变中脆性组氨酸三联体基因的表达及其意义

目的检测抑癌基因脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)及癌前病变中的表达情况,并探讨其在口腔癌发生过程中的作用及其意义。方法采用SP免疫组化方法检测64例OSCC、39例口腔癌前病变、12例正常粘膜中FHIT蛋白情况的表达。结果正常粘膜的FHIT蛋白100%(12/12)高表达;癌前病变组中均为中度和高表达,与正常组相比无统计学差异;64例OSCC中,3例为阴性表达、8例低表达、43例中度和高度表达;OSCC中FHIT蛋白缺乏或减少的比率为17%(11/64),与正常组、癌前病变组相比有显著差异,而与OSCC的分化程度无关。结论FHIT在口腔鳞癌的发生过程中起着一定的作用。

非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体和PCNA的表达

目的:观察人非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。方法:应用免疫组织化学(SP法)检测80例非小细胞肺癌和40例肺良性病变组织中FHIT和PCNA的表达。结果:非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率(57.5%)低于肺良性病变组织(90.0%)(P<0.01);腺癌组织中FHIT的表达阳性率高于鳞癌,且表达阳性率与鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率与患者是否有吸烟史有相关性(P<0.05);非小细胞肺癌组织中PCNA表达阳性率(60.0%)高于肺良性病变组织(10.0%)(P<0.01);FHIT表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT和PCNA表达呈负相关(rs=-0.547,P<0.01)。结论:FHIT表达下调是肿瘤细胞增殖活跃的分子基础之一,FHIT与非小细胞肺癌的发生、发展关系密切。

脆性组氨酸三联体与caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(F HIT)与caspase一3在不同的卵巢组织中的表达及其临床意义。方法正常卵巢14例,均为子宫肌瘤行子宫全切加一侧卵巢切除术的卵巢组织;良性囊腺瘤15例;交界性囊腺瘤15例;上皮性卵巢癌38例,上皮性卵巢癌标本未经任何抗癌治疗。检测脆性组氨酸三联体与caspase-3。结果除FHIT在上皮性卵巢癌组织中的缺表达率分别显著高于正常卵巢、良性囊腺瘤和交界性囊腺瘤等三种卵巢组织外,在正常卵巢、良性囊腺瘤、交界性囊腺瘤卵巢组织中差异无显著性,在上皮性卵巢癌组织中的比较差异无显著性;caspase-3在正常卵巢、良性囊腺瘤、交界性囊腺瘤等三种卵巢组织中的表达率差异有显著性,在正常卵巢、良性囊腺瘤、交界性囊腺瘤卵巢组织中差异无显著性。结论病理分级越低和临床分期越高则FHIT的表达率越低,FHIT的表达与年龄和月经无关。提示FHIT的缺表达可能与卵巢癌细胞的恶性程度、侵袭力和转移能力,以及卵巢癌的发展及预后有关,可能成为卵巢癌的恶性程度和预后的预测性指标。caspase-3在未化疗的上皮性卵巢癌中的表达率显著低于正常卵巢、良性囊腺瘤和交界性囊腺瘤;caspase-3还与临床分期有关,临床分期越晚则表达率越低。

喉声门型癌脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与吸烟的关系

目的观察脆性组氨酸三联体基因(fragilehis tidinetriad,FHIT)蛋白在喉声门型癌组织细胞中定位及分布情况,比较其在吸烟组和非吸烟组癌组织中的表达差异以及吸烟量和FHIT表达的关系。方法运用免疫组织化学SP法检测66例喉声门型癌手术切除组织中FHIT蛋白的表达。结果FHIT蛋白在喉声门型癌组织中表达阳性率为33.3%(22/66),吸烟组FHIT蛋白表达阳性率为24.5%(12/49),比非吸烟组58.8%(10/17)低,差别有统计学意义(x2=6.70,P=0.01)。结论FHIT蛋白在喉声门型癌组织中的表达减弱或缺失是常发事件。喉声门型癌吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失较非吸烟组高,吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失与患者吸烟的年支数(每天吸烟量与吸烟年数的乘积)无明显相关关系(rs=-0.0499,P=0.7334)。

分化型甲状腺癌组织中脆性组氨酸三联体基因外显子5、8纯合性缺失及突变检测

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因外显子5、8(E5、E8)纯合性缺失及突变情况。方法:分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测65例DTC组织及其相应非癌上皮(NCE)组织中FHIT基因E5、E8纯合性缺失及点突变。结果:甲状腺NCE组织中,E5、E8纯合性缺失率均为0;DTC中,E5纯合性缺失率为30.8%(20/65),且与患者淋巴结转移有关(P<0.05);E8纯合性缺失率为29.2%(19/65),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05)。DTC组织中,FHIT基因E5、E8纯合性缺失的发生相关(χ2=23.212,P<0.01)。所有标本未检测到E5、E8点突变。结论:FHIT基因E5、E8纯合性缺失可作为检测DTC生物学行为的重要标志。点突变可能不是DTC组织中FHIT基因失活的主要机制。

喉鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因编码外显子纯合性缺失检测

目的:探讨喉鳞癌(LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因编码外显子纯合性缺失及其临床意义。方法:分别采用外显子特异PCR技术及免疫组化SP法检测41例LSCC(肿瘤发生部位位于声门上15例,声门24例,声门下2例;TNM分期Ⅰ期10例,Ⅱ期13例,Ⅲ期15例,Ⅳ期3例;病理分级:高分化15例,中分化18例,低分化8例;淋巴结转移阳性15例,阴性26例)及其相对应的喉正常黏膜组织中FHIT基因全部编码外显子E5～E9纯合性缺失及增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并分析其与临床病理特征及PCNA的关系。结果:41例喉正常黏膜组织中,E5～E9无1例发生纯合性缺失。LSCC组织中,E5～E9纯合性缺失率分别为26.8%(11/41)、14.6%(6/41)、9.8%(4/41)、29.3%(12/41)和7.3%(3/41)。FHIT基因编码外显子总纯合性缺失率为41.5%(17/41),且与患者TNM分期、淋巴结转移及复发有关(P<0.05)。FHIT基因编码外显子纯合性缺失与PCNA标记指数有明显的负相关关系(P<0.05)。结论:LSCC组织中FHIT基因编码外显子纯合性缺失可能为其基因失活的重要机制之一,可作为检测LSCC生物学行为的重要标志。

人端粒酶反转录酶和脆性组氨酸三联体基因在口腔鳞癌中的表达及意义

端粒酶被认为是迄今为止最具有人体肿瘤特异性和敏感性的分子标志物,人端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTRT）是端粒酶活性的限速酶,只在端粒酶阳性的肿瘤细胞和永生化细胞中表达,与端粒酶活性平行相关[1]。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad,FHIT）是1996年发现的一种抑癌基因,

食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白的表达

目的:检测食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法检测39例正常食管黏膜组织、23例不典型增生组织及39例食管鳞癌组织中FHIT蛋白的表达。结果:癌旁不典型增生组织和食管鳞癌组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为52.17%和28.21%,均低于正常食管黏膜组织的89.74%(P均<0.01)。FHIT蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度及淋巴结转移有关,而与浸润深度无关。结论:FHIT蛋白的缺失与食管鳞癌的发生密切相关。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fhit1～GST-Fhit11融合蛋白、突变体GST-FhitSIYEEL、GST-FhitIY、GST-FhitEL、GST-FhitF、GST-FhitA,以及GST-FhitD融合蛋白,用GST沉降技术研究Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结果:Fhit蛋白第112～117(SIYEEL)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键区域,而第114(Y)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结论:确定了Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脆性组氨酸三聚体蛋白和蛋白激酶Cα的表达及其与非小细胞肺癌侵袭、转移的相关性

目的探讨脆性组氨酸三聚体(FHIT)蛋白和蛋白激酶Cα(cPKCα)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC侵袭、转移的相关性。方法采用免疫组化PicTureTM通用型二步法,对41例NSCLC组织和11例肺良性病变组织行FHIT蛋白和cPKCα检测。结果FHIT蛋白和cPKCα在NSCLC组织中的阳性表达率分别为48.8%和53.7%,在肺良性病变组织中的阳性表达率分别为90.9%和18.20%,均有显著性差异(P<0.05);COX比例风险模型生存分析结果显示,FHIT蛋白(P=0.020,RR=2.754)、cPKCα(P=0.022,RR=0.385)具有独立的预后意义。结论FHIT蛋白和cPKCα表达与NSCLC的发展、侵袭及转移显著相关,可作为判断NSCLC临床预后的参考指标。

脆性组氨酸三联体在子宫内膜异位症的表达及意义

目的通过观察脆性组氨酸三联体(Fhit)在子宫内膜异位症中的表达,探讨Fhit在子宫内膜异位症发病中的作用。方法应用免疫组化SP法检测58例子宫内膜异位症(EMS)患者(包括36例卵巢子宫内膜异位症和22例子宫腺肌症)的异位内膜和在位内膜及15例子宫肌瘤患者子宫内膜(对照组)中Fhit的表达情况。结果Fhit主要表达在腺体上皮细胞的胞浆和胞膜,其表达强弱顺序为:对照组子宫内膜>EMS组在位内膜>EMS组异位内膜,EMS在位和异位内膜Fhit表达在增生期和分泌期均无显著性差异(P>0.05);EMS组在位内膜的Fhit表达在临床r-AFS分期的不同期别中均无显著性差异(P>0.05),但异位内膜的Fhit表达在不同r-AFS分期中差异显著(P<0.05);卵巢EMS组和子宫腺肌症的在位和异位内膜Fhit的表达均无显著性差异。结论Fhit可能与子宫内膜异位症的发生、发展过程中起重要作用。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果:通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论:确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脑胶质瘤中脆性组氨酸三联体和PTEN的表达

目的检测抑癌基因脆性组氨酸三联体(FHIT)、PTEN在胶质瘤中的表达,并探讨其与肿瘤恶性程度的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测80例胶质瘤、5例正常脑组织中的FHIT、PTEN蛋白的表达。结果FHIT主要定位于肿瘤细胞的细胞质,PTEN主要定位于肿瘤细胞的细胞核,总阳性率分别为47.5%(38/80)、55.0%(44/80);FHIT和PTEN在正常脑组织中表达率均为80%(4/5),两者在正常脑组织和不同级别胶质瘤之间的表达均有差异(P<0.05),且随胶质瘤恶性程度的增加而减弱。结论FHIT和PTEN在胶质瘤细胞中表达减少或缺失,两者协同作用促进胶质瘤的发生发展。