喉声门型癌脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与吸烟的关系

目的观察脆性组氨酸三联体基因(fragilehis tidinetriad,FHIT)蛋白在喉声门型癌组织细胞中定位及分布情况,比较其在吸烟组和非吸烟组癌组织中的表达差异以及吸烟量和FHIT表达的关系。方法运用免疫组织化学SP法检测66例喉声门型癌手术切除组织中FHIT蛋白的表达。结果FHIT蛋白在喉声门型癌组织中表达阳性率为33.3%(22/66),吸烟组FHIT蛋白表达阳性率为24.5%(12/49),比非吸烟组58.8%(10/17)低,差别有统计学意义(x2=6.70,P=0.01)。结论FHIT蛋白在喉声门型癌组织中的表达减弱或缺失是常发事件。喉声门型癌吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失较非吸烟组高,吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失与患者吸烟的年支数(每天吸烟量与吸烟年数的乘积)无明显相关关系(rs=-0.0499,P=0.7334)。

食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白的表达

目的:检测食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法检测39例正常食管黏膜组织、23例不典型增生组织及39例食管鳞癌组织中FHIT蛋白的表达。结果:癌旁不典型增生组织和食管鳞癌组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为52.17%和28.21%,均低于正常食管黏膜组织的89.74%(P均<0.01)。FHIT蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度及淋巴结转移有关,而与浸润深度无关。结论:FHIT蛋白的缺失与食管鳞癌的发生密切相关。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fhit1～GST-Fhit11融合蛋白、突变体GST-FhitSIYEEL、GST-FhitIY、GST-FhitEL、GST-FhitF、GST-FhitA,以及GST-FhitD融合蛋白,用GST沉降技术研究Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结果:Fhit蛋白第112～117(SIYEEL)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键区域,而第114(Y)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结论:确定了Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果:通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论:确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脆性组氨酸三联体基因与HIV-TAT蛋白转导域融合蛋白表达、纯化和多克隆抗体制备

目的:制备脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白FHIT/TAT以及该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,探讨FHIT基因对肝肿瘤的作用及其机制.方法:构建FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体,确定该载体的最佳诱导表达条件,在大肠杆菌中大量表达并获得纯化的FHIT/TAT融合蛋白,同时以该融合蛋白免疫兔制备抗FHIT/TAT融合蛋白的多克隆抗体.结果:构建了FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体;确定了该载体的最佳诱导表达条件;Western Blot检测也证实了该融合蛋白在大肠杆菌中的表达;以此为基础在大肠杆菌中大量表达并获得了70%纯度的FHIT/TAT融合蛋白;同时制备了较高滴度的兔抗FHIT/TAT融合蛋白多克隆抗体.结论:成功建立了制备具有高效转导作用的HIV-TAT蛋白转导域与FHIT基因融合蛋白的原核表达体系,获得了该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,为FHIT基因对于肝肿瘤的作用及其机制研究,特别是肝肿瘤的基因治疗和预防等打下了良好的基础.

脆性组氨酸三联体与半胱氨酸蛋白酶3在子宫内膜癌组织中的表达

目的探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白在子宫内膜腺癌发生、发展过程中的可能作用。方法选择子宫内膜腺癌患者（腺癌组，60例）、子宫内膜不典型增生患者（不典型增生组，30例）和子宫肌瘤切除术患者（对照组，正常子宫内膜30例）作为研究对象。采用免疫组织化学（免疫组化）SP法检测3组中FHIT、caspase-3蛋白的表达，结合临床病理特征进行分析。结果FHIT在腺癌组、不典型增生组和对照组的阳性表达率分别为53．3％（32／60）、63．3％（19／30）和100％（30／30），caspase-3的阳性表达率分别为51．7％（31／60）、70．0％（21／30）和86．7％（26／30），腺癌组FHIT、caspase-3的阳性表达率明显低于对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。FHIT与caspase-3的阳性表达均与子宫内膜腺癌的组织分级（G1、G2～3）有关（X^2=9．312、14．299，均P〈0．01），FHIT还与子宫内膜腺癌的手术-病理分期（Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ）、肌层浸润（≤1／2、〉1／2）和淋巴转移（阴性、阳性）有关（均P〈0．05）。结论FHIT和caspase-3可能与子宫内膜腺癌的发生均有关。FHIT和CASPASE-3联合检测有利于子宫内膜腺癌的早期诊断及判断预后。

脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与炎症性肠病的临床关系

目的:探讨脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine trail, FHIT)蛋白在38例溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)、25例Crohn’s病、11例UC相关性腺癌和13例正常对照组中的表达情况. 方法:标本常规石蜡包埋,采用免疫组化法检测FHIT在UC、Crohn’s病、UC相关性腺癌和正常对照组中的表达. 结果:38例UC中,25例FHIT蛋白表达阴性;25例Crohn’S 病中,19例表达阴性;11例UC相关性腺癌中,6例表达阴性.FHIT蛋白在UC和正常对照组(71.43%vs 7.69%, X2=18.80,P<0.01)、Crohn’s病和正常对照组(76% vs 7.69%,X2=18.88,P<0.01)、UC相关性腺癌和正常对照组(54.55%vs 7.69%,X2=7.75,P<0.05)间均有显著性差异;而在UC和UC相关性腺癌中无显著性差异(54.55%vs 71.43%,X2=0.05,P>0.05). 结论:FHIT蛋白在炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)和UC相关性腺癌中呈低表达或缺失,提示该基因可能与IBD和UC相关性腺癌发生有关.

定性及定量分析脆性组氨酸三联体基因蛋白表达在食管癌变过程中的临床意义

目的定性和定量分析脆性组氨酸三联体基因蛋白(Fhit蛋白)在食管癌及癌前病变(不典型增生)组织中的表达,探讨Fhit蛋白与食管癌发生发展的关系。方法收集色素内镜初筛并经组织病理学证实标本94例,应用免疫组化及流式细胞术(FCM),定性及定量检测Fhit蛋白在食管癌变过程中的表达情况。结果①从食管鳞状上皮→不典型增生(癌前病变)→原位癌→浸润癌,随着食管病变的加重,定性及定量检测Fhit蛋白表达均呈逐渐降低趋势;②免疫组化结果显示:正常组、不典型增生Ⅰ级组、不典型增生Ⅱ级组、不典型增生Ⅲ级组、原位癌组、浸润癌组中Fhit蛋白表达分别为82.35%、75.00%、43.75%、35.29%、30.00%、33.33%;正常组与食管不典型增生Ⅰ级组Fhit蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),与其余各组相比差异有统计学意义(P<0.05);浸润癌组与正常组、不典型增生Ⅰ级组差异均有统计学意义(P<0.05),浸润癌组与不典型增生Ⅱ级、Ⅲ级组、原位癌组差异无统计学意义(P>0.05);③FCM结果显示:不典型增生Ⅰ级、Ⅱ级组间Fhit蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.001),不典型增生Ⅱ级、Ⅲ级组间差异有统计学意义(P<0.05),不典型增生Ⅱ级与正常组间差异有统计学意义(P<0.001),不典型增生Ⅲ级与食管癌组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论Fhit蛋白表达缺失是食管癌变过程的早期事件,随病理组织学分级的增高Fhit蛋白表达阳性率逐渐降低,其蛋白表达的缺失在食管癌发生、发展过程中可能起着重要作用。

脆性组氨酸三联体蛋白在炎症性肠病中表达丢失的研究

目的 探讨炎症性肠病中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因蛋白表达状况及其与临床病理指标的可能关系。方法 采用兔抗人FHIT蛋白抗体和拘橼酸-微波-SP-免疫组织化学方法检测60例甲醛固定、石蜡包埋的炎症性肠病活检蜡块标本中FHIT表达状况并分析其与年龄、性别的天系。结果 溃疡性结肠炎中FHIT基因表达阳性率(31.88％±20.33％)显著低于正常的结肠组织(57.05％±8.86％)(P<0 01);克隆氏病中FHIT基因表达阳性率(29.99％±19.82％)显著低于正常的结肠组织(57.05％±8.86％)(P<0.01);而溃疡性结肠炎和克隆氏病中FHIT基因表达阳性率无显著差别(P>0.05);溃疡性结肠炎和克隆氏病中FHIT基因表达水平降低与炎症性肠病患者的年龄、性别无显著相关性(P>0.05)。结论 FHIT基因的表达下降或缺失与炎症性肠病的发生发展过程密切相关,可能是炎症性肠病中从炎症过渡到癌变的一个早期事件之一。

脆性组氨酸三联体基因蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的 探讨胆囊癌中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因蛋白表达状况及其与临床病理指标的可能关系。方法 采用兔抗人FHIT蛋白抗体和枸橼酸微波SP免疫组化方法检测53 例原发性胆囊癌、18 例胆囊腺瘤性息肉和25 例慢性胆囊炎中FHIT表达状况,并结合临床病理指标进行分析。结果 FHIT基因蛋白在原发性胆囊癌中的阳性表达率为28.3%(15/53),而在胆囊腺瘤性息肉和慢性胆囊炎中的表达分别为55.6%(10/18)和88.0%(22/25),其差异有统计学意义(P<0.05)。胆囊癌组织中FHIT基因蛋白表达与肿瘤分化程度有关,在低分化癌中表达低,与高中分化癌比较有显著性差异(P<0.05);同时研究表明其表达与预后有关(P<0.01)。结论 FHIT基因可能参与了胆囊癌的发生、发展过程,可作为判断原发性胆囊癌分化程度和预后的指标。

肝细胞肝癌中脆性组氨酸三联体和p21蛋白的表达及意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白和p21蛋白的表达及临床意义。方法:用Western blot方法检测36例HCC、32例癌旁和14例正常肝组织中FHIT蛋白和p21蛋白的表达,并结合临床病理指标进行分析。结果:FHIT蛋白在HCC中的表达(0.934±0.622)低于癌旁(2.298±1.050)和正常对照组(2.457±0.958),差异有统计学意义(P<0.01);p21蛋白在HCC中的表达(2.604±0.316)高于癌旁(1.241±0.547)和正常对照组(1.056±0.186),差异有统计学意义(P<0.05)。在高、中、低分化HCC中FHIT蛋白表达逐渐减低;而p21蛋白在上述组织中表达逐渐增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。门静脉癌栓组中FHIT表达低于无门静脉癌栓组;p21在门静脉癌栓组中表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。在HCC中FHIT和p21的表达呈负相关(r=-0.329,P=0.027)。结论:FHIT的低表达与p21高表达和HCC的病理分型和侵袭转移有关,FHIT基因的突变或缺失可能通过上调p21基因的转录而导致恶性肿瘤的发生。

喉鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因和增殖蛋白的关系

目的检测喉鳞癌中脆性组氨酸三联体基因(FHIT)、增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67增殖蛋白(Ki67)的表达特征,探讨FHIT对增殖的作用。方法 67例喉鳞癌患者的临床资料和术后蜡块组织作为观察组,喉黏膜不典型增生的术后组织53例作为对照组,收集上述距肿物边缘>2 cm非肿瘤性喉黏膜组织53例作为正常对照组。应用免疫组化二步法检测三组FHIT、PCNA和Ki67的表达。结果三组FHIT、PCNA和Ki67的阳性率差别显著(P<0.000 1)。观察组中FHIT、PCNA和Ki67的阳性率均与肿瘤最大径、分化程度、是否伴有脉管内瘤栓相关。PCNA和Ki67的表达与淋巴结转移相关。线性相关分析显示观察组中FHIT和PCNA、FHIT和Ki67的表达均具有负相关性。结论喉鳞癌术后组织中FHIT低表达,PCNA和Ki67高表达对促进肿瘤形成和进展有一定作用,FHIT在调节肿瘤性进展过程中可能与对肿瘤细胞增殖的调节有关。

皮肤鳞状细胞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白和生存素的表达

目的:检测皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中脆性组氨酸三联体蛋白(FHIT),Survivin蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例SCC和21例正常皮肤组织中FHIT和Survivin蛋白的表达。结果:SCC组织中FHIT蛋白的阳性表达率(43.3%)低于正常皮肤组织(95.2%)(P<0.05),且FHIT的阳性表达与组织学分级有关。SCC组织中Survivin蛋白的阳性表达率(66.7%)高于正常皮肤组织(0.0%)(P<0.05)。SCC组织中FHIT与Survivin的表达呈负相关(r=-0.523,P<0.05)。结论:FHIT,Survivin的表达可能与SCC的发生及恶性度有关;联合检测2者可能为SCC诊断及治疗提供理论依据。

前列腺癌脆性组氨酸三体Fhit蛋白高表达及其意义

目的 讨论前列腺癌中Fhit基因蛋白 (FHIT)表达状况及其与临床病理的可能关系。方法 采用兔抗人Fhit蛋白抗体和枸橼酸 微波 SP免疫组化方法检测前列腺癌 5 5例、前列腺上皮内瘤变 4 2例以及正常形态前列腺组织 4 3例。结果 5 5例前列腺癌组织 4 8例中Fhit(+) ,39例强 (+) ,7例 (- ) ;4 2例前列腺上皮内瘤变组织 35例(+) ,9例强 (+) ,7例 (- ) ;4 3例前列腺正常形态组织 7例 (+) ,仅 1例强 (+) ,36例 (- ) ;三者比较差异极显著。Fhit蛋白阳性表达的癌组织学分级为Ⅰ级癌占 6 2 5 % ,Ⅱ级癌占 80 % ,Ⅲ级癌占 93 8% ,各级癌组间强阳性差异极显著。Fhit蛋白表达在前列腺上皮内瘤变 (不典型增生组织 )中的分布为Ⅰ级 80 % ,Ⅱ级 85 7% ,Ⅲ级 87 5 % ;三组强阳性比较差异极显著。结论 Fhit表达可能与前列腺癌的发生和分化有关 ,Fhit过表达可能提示其抑癌功能丧失 ,Fhit强阳性表达可能成为辅助前列腺癌诊断的新标记。

脑胶质瘤中脆性组氨酸三联体和PTEN的表达

目的检测抑癌基因脆性组氨酸三联体(FHIT)、PTEN在胶质瘤中的表达,并探讨其与肿瘤恶性程度的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测80例胶质瘤、5例正常脑组织中的FHIT、PTEN蛋白的表达。结果FHIT主要定位于肿瘤细胞的细胞质,PTEN主要定位于肿瘤细胞的细胞核,总阳性率分别为47.5%(38/80)、55.0%(44/80);FHIT和PTEN在正常脑组织中表达率均为80%(4/5),两者在正常脑组织和不同级别胶质瘤之间的表达均有差异(P<0.05),且随胶质瘤恶性程度的增加而减弱。结论FHIT和PTEN在胶质瘤细胞中表达减少或缺失,两者协同作用促进胶质瘤的发生发展。

脆性组氨酸三联体基因及p53基因在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在肺癌组织中的表达及其与肺癌分化程度、组织学分类、p53表达的关系。方法利用组织芯片,运用免疫组织化学技术,对110例肺癌及25例良性病变的肺组织标本分别进行FHIT、p53蛋白检测。结果①良性病变肺组织FHIT异常表达率为16%,而肺癌组织中FHIT异常表达率为85.5%。肺癌组织与良性病变肺组织相比,差异有极显著性(P<0.01);分化程度不同肺癌组织,FHIT表达差异有极显著性(P<0.01),且FHIT基因表达与肺癌组织分化程度正相关(P<0.01);组织学分类不同的肺癌组织,FHIT基因表达差异无统计学意义(P>0.05);②p53阴性表达组和阳性表达组,FHIT的表达差异无统计学意义(P>0.05);p53异常表达率为53.6%,FHIT异常表达率为85.4%,两者比较差异有极显著性(P<0.01)。p53异常表达与FHIT异常表达共同检出率为93.6%。结论①FHIT蛋白可能成为肺癌早期诊断的更有效分子标记物,p53蛋白与FHIT蛋白的联合检测有助于提高肺癌的检出率;②FHIT蛋白影响肺肿瘤细胞的分化方向,为临床药物开发提供新思路。

脆性组氨酸三联体在皮肤良恶性肿瘤中的表达

鳞状细胞癌（SCC）、鲍温病（BOD）、光线性角化病（AK）是常见的非黑素瘤皮肤肿瘤（NMSC）.这些皮肤肿瘤的病因及发病机制至今尚未阐明.目前研究表明,皮肤肿瘤的发病与紫外线照射、人类乳头瘤病毒（HPV）感染,癌基因、抑癌基因等多种因素有关.大部分皮肤癌是因暴露于环境中的日光所引起的,浅肤色或DNA修复功能低下是日光诱发皮肤癌的遗传易感性因素.脆性组氨酸三联体（FHIT）基因是1996年Ohta等1利用差异显示分析探针和外显捕获法于人3号染色体短臂（3p14.2）处发现的一个抑癌基因,此基因跨越人类染色体的脆性部位FRA3B,其缺失与许多肿瘤的发生密切相关.另有研究认为FHIT缺失可能与环境条件有联系.鉴于皮肤肿瘤与FHIT缺失均与环境条件密切相关,本实验拟对SCC、BOD、AK及正常皮肤中的FHIT基因蛋白进行检测,以探讨FHIT基因在皮肤肿瘤发生、发展中的作用,为皮肤肿瘤的基因治疗提供一种新的思路.

肺癌脆性组氨酸三联体基因表达及其与细胞增殖的关系

目的探讨脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在肺癌中表达及其与肺癌细胞增殖的相关性。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测110例肺癌及25例良性病变的肺组织标本FHIT蛋白及Ki-67、P53、P21WAF1蛋白表达。结果(1)良性病变的肺组织FHIT基因异常表达率为16%,肺癌组织异常表达率为85·5%,二者比较,差异有极显著性(χ2=49·390,P=0·000);(2)细胞增殖指数(proliferationindex,PI)不同的肺癌组织中,FHIT基因表达差异有极显著性(χ2=30·145,P=0·000),且FHIT基因表达与PI负相关(r=-0·0418,P=0·000);(3)在P53表达阴性的肺癌组织中,P21WAF1阴性组与P21WAF1阳性组比较,FHIT的表达差异无统计学意义(χ2=4·125,P=0·248)。结论FHIT基因可能参与肿瘤细胞增殖的调控,FHIT基因表达下降可能与肺癌的发生密切相关。