食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白的表达

目的:检测食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法检测39例正常食管黏膜组织、23例不典型增生组织及39例食管鳞癌组织中FHIT蛋白的表达。结果:癌旁不典型增生组织和食管鳞癌组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为52.17%和28.21%,均低于正常食管黏膜组织的89.74%(P均<0.01)。FHIT蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度及淋巴结转移有关,而与浸润深度无关。结论:FHIT蛋白的缺失与食管鳞癌的发生密切相关。

脆性组氨酸三联体蛋白在炎症性肠病中表达丢失的研究

目的 探讨炎症性肠病中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因蛋白表达状况及其与临床病理指标的可能关系。方法 采用兔抗人FHIT蛋白抗体和拘橼酸-微波-SP-免疫组织化学方法检测60例甲醛固定、石蜡包埋的炎症性肠病活检蜡块标本中FHIT表达状况并分析其与年龄、性别的天系。结果 溃疡性结肠炎中FHIT基因表达阳性率(31.88％±20.33％)显著低于正常的结肠组织(57.05％±8.86％)(P<0 01);克隆氏病中FHIT基因表达阳性率(29.99％±19.82％)显著低于正常的结肠组织(57.05％±8.86％)(P<0.01);而溃疡性结肠炎和克隆氏病中FHIT基因表达阳性率无显著差别(P>0.05);溃疡性结肠炎和克隆氏病中FHIT基因表达水平降低与炎症性肠病患者的年龄、性别无显著相关性(P>0.05)。结论 FHIT基因的表达下降或缺失与炎症性肠病的发生发展过程密切相关,可能是炎症性肠病中从炎症过渡到癌变的一个早期事件之一。

皮肤鳞状细胞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白和生存素的表达

目的:检测皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中脆性组氨酸三联体蛋白(FHIT),Survivin蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例SCC和21例正常皮肤组织中FHIT和Survivin蛋白的表达。结果:SCC组织中FHIT蛋白的阳性表达率(43.3%)低于正常皮肤组织(95.2%)(P<0.05),且FHIT的阳性表达与组织学分级有关。SCC组织中Survivin蛋白的阳性表达率(66.7%)高于正常皮肤组织(0.0%)(P<0.05)。SCC组织中FHIT与Survivin的表达呈负相关(r=-0.523,P<0.05)。结论:FHIT,Survivin的表达可能与SCC的发生及恶性度有关;联合检测2者可能为SCC诊断及治疗提供理论依据。

乳癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白检测

目的:检测乳癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法,检测53例乳癌组织(Ⅰ期6例,Ⅱ期13例,Ⅲ期25例,Ⅳ期9例;有淋巴结转移38例,无淋巴结转移15例;高中分化31例,低分化22例)及14例癌旁正常组织中FHIT的表达。结果:①乳癌组织中FHIT蛋白阳性表达率(49.1%,26/53)明显低于正常乳腺组织(92.9%,13/14),P<0.05。②53例乳癌组织中,中高分化组与低分化组间(54.8%νs40.9%),淋巴结转移组与无淋巴结转移组间(44.7%νs60.0%),Ⅰ+Ⅱ期组与Ⅲ+Ⅳ期组间(57.9%νs44.1%)FHIT蛋白阳性表达率差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:FHIT基因与乳癌的发生、发展有关,可作为判定乳癌发生及转移能力的一项客观指标。

脆性组氨酸三联体蛋白在子宫内膜异位症中的表达

目的：观察脆性组氨酸三联体（FHIT）蛋白在子宫内膜异位症（EMT）中的表达及意义。方法：应用免疫组化sP法检测FHIT在28例EMT患者（EMT组）的在位内膜、异位内膜及28例单纯子宫肌瘤患者（对照组）子宫内膜中的表达情况。结果：FHIT主要表达在子宫内膜腺体上皮细胞的胞浆和胞膜中。FHIT在EMT患者的在位内膜和异位内膜的阳性率分别为68％（19／28）和54％（15／28），两者相比差异无统计学意义（P〉0．05）；但均低于对照组的96％（27／28），差异有统计学意义（P〈0．05）；EMT不同re-AFS分期的异位子宫内膜中，FHIT的表达情况不同，Ⅰ～Ⅱ期的阳性率较Ⅲ-Ⅳ期的阳性率明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：FHIT可能与EMT的发病有关，并对疾病的严重程度有一定的影响。

横纹肌肉瘤脆性组氨酸三联体蛋白的表达

目的 探讨脆性组氨酸三联体 (FHIT)蛋白在横纹肌肉瘤 (RMS)中的表达及其在肿瘤发生发展中可能的作用机制。方法 应用免疫组织化学技术 (SP法 )检测 4 4例石蜡包埋人体横纹肌肉瘤细胞及 2 0例正常骨骼肌细胞中 FHIT蛋白的表达 ,并结合临床资料进行分析。结果 在 4 4例横纹肌肉瘤中 FHIT蛋白的低表达率为6 8.2 % (30 / 4 4 ) ,2 0例正常横纹肌的低表达率为 35 .0 % (7/ 2 0 ) ,两组间有显著性差异 (P<0 .0 5 )。患者不同性别、肉瘤组织学类型及分级间 FHIT蛋白的低表达率无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,但肿瘤的不同预后 (复发及转移 )间有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 FHIT蛋白表达降低可能参与了横纹肌肉瘤的发生与发展 ,有望成为

人肝癌细胞系和正常肝细胞系中脆性组氨酸三联体蛋白表达研究

目的：研究脆性组氨酸三联体 （FHIT）蛋白在人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L O2中的表达差异.方法：利用细胞免疫化学染色法分别检测FHIT蛋白在人肝癌细胞系HepG2（简称HepG2）及人正常肝细胞系LO2（简称LO2）中的差异性表达.结果：与LO2相比,HepG2的FHIT蛋白在HepG2和LO2中的IOD值分别为（12346.36±4436.31）与（104897.13±12572.62）,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论：FHIT在肝癌细胞系中的低表达可能与肝癌的发生、发展有关.

子宫内膜癌组织中包含WW域的氧化还原酶和脆性组氨酸三联体蛋白的表达

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中包含WW域的氧化还原酶(WWOX)和脆性组氨酸三联体(FHIT)的表达及其关系。方法:采用免疫组化SP法检测60例EC、27例不典型增生(AH)及15例正常增生期子宫内膜(NE)组织中WWOX和FHIT的表达,并探讨其与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)等临床病理参数之间的关系。结果:WWOX在NE、AH和EC组织中的阳性表达率分别为93.3%、59.3%和51.7%,3组间比较,差异有统计学意义(χ2=8.671,P=0.013)。EC组织中WWOX的阳性表达率与其组织学分级、临床分期、ER表达和淋巴结转移有关(χ2=4.212、4.258、4.005和6.607,P均<0.05)。FHIT在NE、AH和EC组织中的阳性表达率分别为100.0%、70.4%和60.0%,非EC组与EC组间比较,差异有统计学意义(χ2=5.038,P=0.025)。EC组织中FHIT的表达与其组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(χ2=4.571,4.242和6.544,P均<0.05)。EC组织中WWOX和FHIT的表达有关联性(rP=0.345,χ2=8.109,P=0.004)。结论:WWOX和FHIT的协同低表达可能在EC的发生发展中起重要作用。

组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2通过调控巨噬细胞焦亡抑制动脉粥样硬化

目的:探讨组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2(HINT2)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其可能机制。方法:分离胸痛患者的外周血单个核细胞(PBMCs)并诱导分化为巨噬细胞,检测细胞中HINT2的表达水平。体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,检测细胞上清液炎症因子的水平及细胞死亡情况。建立载脂蛋白E基因敲除(apoE^(−/−))小鼠AS模型,检测小鼠主动脉根部斑块形成及巨噬细胞的脂质代谢和泡沫化程度。RT-qPCR和Western blot法检测RAW264.7细胞和apoE^(−/−)小鼠主动脉内焦亡相关因子的表达水平。结果:急性冠脉综合征患者PBMCs源性巨噬细胞中HINT2的表达水平显著降低,且与血清中促炎因子水平呈负相关,与抗炎因子水平呈正相关,提示HINT2可能抑制AS的炎症反应。体外实验结果表明,过表达HINT2基因能够抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下巨噬细胞的脂质积累和泡沫化,降低细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α等炎症因子的分泌,减少细胞死亡和焦亡相关因子的mRNA及蛋白表达。动物实验结果表明,过表达HINT2基因能够减轻apoE^(−/−)小鼠主动脉根部的斑块负荷,降低巨噬细胞的泡沫化程度,抑制焦亡相关因子核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白表达。结论:HINT2可以抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡,减轻AS过程中的炎症反应,减缓AS的发生与发展。

脆性组氨酸三联体基因甲基化与前列腺癌的相关性及临床意义

目的:检测前列腺癌患者血清中脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)甲基化状态,探讨FHIT甲基化与前列腺癌患者临床病理特征及5年生化复发和临床进展之间的关系。方法:采用MSP法检测78例前列腺癌和45例前列腺增生患者血清中FHIT甲基化表达状态,分析FHIT甲基化率与前列腺癌患者临床病理的关系,采用Kaplan-Meier生存分析FHIT甲基化率与前列腺癌5年生化复发和5年临床进展之间的关系。结果:前列腺癌患者血清中FHIT基因甲基化率为48.72%,高于前列腺增生患者的4.44%,差异有显著意义(PP<0.05)。FHIT甲基化与前列腺癌患者年龄、术前前列腺特异抗原(PSA)、TNM分期、Gleason分级有关;在前列腺癌Gleason分级≤7和Gleason 8~10分级中,FHIT甲基化率分别为59.18%和31.03%,在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期前列腺癌患者中,FHIT甲基化率分别为37.50%和66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。甲基化组5年复发率和5年累计临床进展率高于非甲基化组(P<0.05)。结论:FHIT甲基化与前列腺癌临床病理有关,检测FHIT甲基化状态有助于评估前列腺癌患者的临床预后。

结直肠癌脆性组氨酸三联体蛋白表达丢失研究

目的 探讨结直肠癌中脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因蛋白表达状况及其与临床病理指标的可能关系。方法 采用兔抗人FHIT蛋白抗体和枸橼酸 微波 SP免疫组织化学方法检测 6 0例甲醛固定、石蜡包埋的结直肠癌蜡块标本中FHIT表达状况并分析其与组织学分级、Dukes分期以及 5年生存率的关系。结果 癌组织FHIT表达强度较正常黏膜高者为 2 1例 (35 0 % ) ,较正常黏膜低者为33例 (5 5 0 % ) ,与正常黏膜基本相等者为 6例 (10 0 % )。FHIT蛋白低表达癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ级癌 7/ 16 ,Ⅱ级癌 14/ 30 ,Ⅲ级癌 12 / 14,各级癌组间比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。FHIT蛋白低表达癌在Dukes分期中的分布为A期癌 5 / 11,B期癌 12 / 2 8,C期癌 16 / 2 1,已伴淋巴结转移组的C期癌与未转移组的A、B期癌比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 39例获访病例中 ,FHIT蛋白低表达癌在 5年随访病例组中的分布为 5年生存组为 13/ 2 5 ,5年死亡组为 12 / 14,组间比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 结直肠癌FHIT表达状况可能与组织学分级、Dukes分期以及 5年生存率相关 ,提示FHIT表达降低可能对结直肠癌的演化和进展具有一定重要作用 ,并可能成为一个新的预后指标。

p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体蛋白在甲状腺肿瘤中的表达

目的探讨p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织(其中包括11例甲状腺滤泡癌(FTC)、12例乳头状癌(PTC)、4例髓样癌(MTC)以及1例未分化癌(UDTC)中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达。结果p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、36%;15%、75%;90%、7%,这3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在FTC与腺瘤之间,PTC与腺瘤之间有统计学意义(P<0.05),p53及FHIT的表达在MTC与腺瘤间差异有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别以及淋巴结转移无关。另外p14ARF与FHIT蛋白的表达正相关,并且它们与p53均负相关。结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及癌蛋白p53的高表达是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一;联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌。

古抑菌素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对脆性组氨酸三联体蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A(TSA)对人肝癌HepG2细胞的抑制作用以及对脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的机制。方法:以不同浓度TSA(125、250、500、1000、2000nmol·L-1)处理体外培养的人肝癌HepG2细胞,孵育24、48h后采用MTT法、以吸光度值和抑制率为指标检测细胞的生长抑制情况;分别用原位末端脱氧核苷转换酶标记(TUNEL)法和免疫细胞化学法检测TSA(250、1000nmol·L-1)作用后细胞凋亡率和细胞中FHIT、caspase-3、bax、bcl-2的蛋白表达;同时设立溶剂为对照组。结果:与对照组比较,不同浓度TSA作用后吸光度值降低,抑制率升高,并呈明显的剂量依赖和时间依赖关系;TUNEL阳性细胞百分率升高(P<0.01)、细胞中FHIT、cas-pase-3、bax蛋白表达增强(P<0.05),bcl-2的变化不明显(P>0.05)。结论:TSA可能通过上调FHIT、caspase-3、bax蛋白的表达而诱导肝癌HepG2细胞凋亡。

肝细胞癌组织中脆性组氨酸三联体和Survivin蛋白的表达

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)和Survivin蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测48例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中FHIT蛋白和Survivin蛋白的表达,并分析2者的表达与HCC临床病理特征的关系。结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中FHIT的阳性表达率分别为45.8%、88.0%及93.3%,差异有统计学意义(P<0.05);FHIT蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与肿瘤大小、有无包膜、是否有门静脉癌栓、甲胎蛋白的含量、是否感染乙肝无关(P>0.05)。HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Survivin的阳性表达率分别为72.9%,16.0%及20.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Survivin阳性表达率与HCC患者的肿瘤大小有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05)。HCC组织中FHIT与Survivin的表达呈负相关(r=-0.341,P=0.018)。结论:FHIT的表达缺失和Survivin的过表达可能共同参与了HCC的发生和发展。

喉声门型癌脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与吸烟的关系

目的观察脆性组氨酸三联体基因(fragilehis tidinetriad,FHIT)蛋白在喉声门型癌组织细胞中定位及分布情况,比较其在吸烟组和非吸烟组癌组织中的表达差异以及吸烟量和FHIT表达的关系。方法运用免疫组织化学SP法检测66例喉声门型癌手术切除组织中FHIT蛋白的表达。结果FHIT蛋白在喉声门型癌组织中表达阳性率为33.3%(22/66),吸烟组FHIT蛋白表达阳性率为24.5%(12/49),比非吸烟组58.8%(10/17)低,差别有统计学意义(x2=6.70,P=0.01)。结论FHIT蛋白在喉声门型癌组织中的表达减弱或缺失是常发事件。喉声门型癌吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失较非吸烟组高,吸烟组FHIT蛋白表达减弱或缺失与患者吸烟的年支数(每天吸烟量与吸烟年数的乘积)无明显相关关系(rs=-0.0499,P=0.7334)。

人类乳头瘤病毒与脆性组氨酸三联体基因蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的作用

目的探讨人类乳头瘤病毒(HPV)和脆性组氨酸三联体基因(FHIT)蛋白在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的作用及其之间的关系。方法用免疫组化SP法检测SCC和癌旁组织皮损中HPV及FHIT蛋白的表达。结果HPV和FHIT蛋白在癌旁正常皮肤鳞状上皮组织、非典型增生组织、原位癌及浸润癌组织中的表达具有明显差异性(P<0.05);且FHIT蛋白在分化不同的肿瘤组织表达具有差异性(P<0.01);HPV和FHIT蛋白在肿瘤组织中的表达呈负相关。结论HPV和FHIT共同参与了SCC的发生,FHIT表达状况与SCC的分化程度有关。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fhit1～GST-Fhit11融合蛋白、突变体GST-FhitSIYEEL、GST-FhitIY、GST-FhitEL、GST-FhitF、GST-FhitA,以及GST-FhitD融合蛋白,用GST沉降技术研究Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结果:Fhit蛋白第112～117(SIYEEL)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键区域,而第114(Y)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结论:确定了Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果:通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论:确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。

脆性组氨酸三联体基因与HIV-TAT蛋白转导域融合蛋白表达、纯化和多克隆抗体制备

目的:制备脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白FHIT/TAT以及该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,探讨FHIT基因对肝肿瘤的作用及其机制.方法:构建FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体,确定该载体的最佳诱导表达条件,在大肠杆菌中大量表达并获得纯化的FHIT/TAT融合蛋白,同时以该融合蛋白免疫兔制备抗FHIT/TAT融合蛋白的多克隆抗体.结果:构建了FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体;确定了该载体的最佳诱导表达条件;Western Blot检测也证实了该融合蛋白在大肠杆菌中的表达;以此为基础在大肠杆菌中大量表达并获得了70%纯度的FHIT/TAT融合蛋白;同时制备了较高滴度的兔抗FHIT/TAT融合蛋白多克隆抗体.结论:成功建立了制备具有高效转导作用的HIV-TAT蛋白转导域与FHIT基因融合蛋白的原核表达体系,获得了该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,为FHIT基因对于肝肿瘤的作用及其机制研究,特别是肝肿瘤的基因治疗和预防等打下了良好的基础.

脆性组氨酸三联体与半胱氨酸蛋白酶3在子宫内膜癌组织中的表达

目的探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白在子宫内膜腺癌发生、发展过程中的可能作用。方法选择子宫内膜腺癌患者（腺癌组，60例）、子宫内膜不典型增生患者（不典型增生组，30例）和子宫肌瘤切除术患者（对照组，正常子宫内膜30例）作为研究对象。采用免疫组织化学（免疫组化）SP法检测3组中FHIT、caspase-3蛋白的表达，结合临床病理特征进行分析。结果FHIT在腺癌组、不典型增生组和对照组的阳性表达率分别为53．3％（32／60）、63．3％（19／30）和100％（30／30），caspase-3的阳性表达率分别为51．7％（31／60）、70．0％（21／30）和86．7％（26／30），腺癌组FHIT、caspase-3的阳性表达率明显低于对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。FHIT与caspase-3的阳性表达均与子宫内膜腺癌的组织分级（G1、G2～3）有关（X^2=9．312、14．299，均P〈0．01），FHIT还与子宫内膜腺癌的手术-病理分期（Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ）、肌层浸润（≤1／2、〉1／2）和淋巴转移（阴性、阳性）有关（均P〈0．05）。结论FHIT和caspase-3可能与子宫内膜腺癌的发生均有关。FHIT和CASPASE-3联合检测有利于子宫内膜腺癌的早期诊断及判断预后。