智力低下和孤独症男童脆性X基因突变的研究

目的应用改良基因检测方法,探讨脆性X综合征致病基因(fragileXmentalretardation"1,FMR1)在中国人群智力低下和孤独症中的作用。方法收集2002～2006年小儿神经、遗传代谢门诊诊断的男性孤独症患儿44例、非家族性智力低下男性患儿40例,建立适用于男性的FMR1基因突变检查方法,对检查阳性者以pfxa3探针进行Southern杂交。结果在44例孤独症患儿中,发现1例pfxa3杂交片段约0.2kb,为FMR1前突变;40例智力低下患者中FMR1基因未见异常。结论在孤独症人群中发现的1例FMR1基因前突变,其致病意义有待进一步阐明。

PCR检测脆性X基因FMR－1的CGG三核苷酸重复数变异及其应用价值

ＰＣＲ检测脆性Ｘ基因ＦＭＲ－１的ＣＧＧ三核苷酸重复数变异及其应用价值项坤三，王延庆，沈卫平脆性Ｘ综合征［Ｆｒａ（ｘ）］系由Ｘ染色体ｑ２７．３上的ＦＭＲ－１基因突变所致。绝大多数［Ｆｒａ（ｘ）］患者中，为５’非翻译区的ＣＧＧ三核苷酸重复数突变致其长度显...

脑膜瘤组织中脆性X相关基因1过表达促进脑膜瘤细胞生长与血管生成的研究

目的:探讨人脑膜瘤组织中RNA结合蛋白脆性X相关基因1(FXR1)表达情况及其对脑膜瘤细胞生长和血管生成的影响。方法:收集我院24例脑膜瘤患者的肿瘤组织及瘤旁组织标本,免疫组织化学染色检测FXR1表达。分离并培养人脑膜瘤细胞,将培养的细胞分为空白对照组、pcDNA3.1-NC组和pcDNA3.1-FXR1组,采用脂质体转染法将pcDNA3.1-FXR1质粒载体与pcDNA3.1空质粒载体转染至脑膜瘤细胞;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中FXR1 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖活性;细胞克隆形成实验检测细胞菌落形成能力;Western blot检测VEGF、EDN-1蛋白表达水平;流式细胞术检测血管内皮细胞的标记CD31与CD34的阳性细胞表达;体外小管生成试验检测HUVECs成管情况。结果:脑膜瘤组织中FXR1阳性表达较瘤旁组织显著增加(P<0.05)。与空白对照组和pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FXR1组细胞中FXR1 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),转染48、72和96 h后细胞增殖活性显著升高(P<0.05),细胞克隆形成数目显著增加(P<0.05),VEGF、EDN-1蛋白表达水平显著增加(P<0.05),CD34和CD31标记的阳性细胞数显著增多(P<0.05)同时,管腔形成数目明显增多。结论:FXR1在人脑膜瘤组织中呈高表达,过表达FXR1可促进脑膜瘤细胞生长与血管生成。

顶体素结合蛋白和脆性X智障基因1邻近蛋白在大肠癌中的表达及意义

目的观察癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(ACRBP)和脆性X智障基因1邻近蛋白(FMR1NB)在大肠癌中的表达,并探讨其临床意义。方法应用RT-PCR方法,从mRNA水平检测60例大肠癌及相应癌旁组织中ACRBP和FMR1NB的表达,并就其表达与临床病理指标的关系进行分析。结果大肠癌组织ACRBP mRNA的表达率为73.3%,显著高于癌旁组织的55.0%(P=0.036);大肠癌组织FMR1NB mRNA的表达率为36.7%,亦显著高于癌旁组织的13.3%(P=0.003)。癌组织中至少表达1个癌-睾丸抗原者占81.7%,表达2个癌-睾丸抗原者占28.3%。ACRBP和FMR1NB的表达与大肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小及位置、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、肿瘤分化程度及组织学类型等临床病理指标无关。结论大肠癌中ACRBP和FMR1NB表达率较高,有望作为大肠癌免疫治疗的靶抗原。

脆性X综合征FMR1基因研究进展

脆性X综合征是常见的遗传性智力低下综合征,是X连锁不完全显性遗传病,其发病机理是脆性X智力低下1号基因5'端非翻译区(CGG)n三核苷酸串联重复序列大量扩增和CpG岛异常甲基化,引起脆性X智力低下1号基因失活,导致脆性X智力低下1号蛋白的缺失引起智力低下。该文对脆性X智力低下1号蛋白生物学功能,脆性X智力低下1号基因异常的分子机制等方面国内外研究最新进展作以综述。

脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体的构建及其应用

目的构建人脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体,建立稳定转染FMR1的He La细胞系。方法采用PCR扩增出人FMR1的c DNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入p EGFP-N2真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。用脂质体将验证的重组质粒转染至He La细胞,通过G418筛选建立FMR1稳定转染的He La细胞系。进一步运用Western blot法、免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术鉴定FMR蛋白(FMRP)在He La细胞中的表达及定位。结果双酶切和DNA测序结果表明p EGFP-N2-FMR1真核表达质粒构建成功。Western blot和激光共聚焦显微镜结果显示GFP-FMRP融合蛋白在He La细胞中成功表达且主要定位在细胞质。结论成功建立FMR1稳定转染的He La细胞系并可以表达FMRP。

卵巢功能早衰与脆性X智力低下1基因的关系

卵巢早衰(POF)是指女性在40岁以前卵巢功能丧失并伴有卵泡刺激素水平升高(FSH>40IU/L)和/或雌激素水平下降的一种生殖内分泌疾病,其病因涉及环境因素、遗传背景、自身免疫、代谢,以及医源性因素等。然而,大多数POF患者的病因仍不清楚。有研究发现X染色体上的脆性X智力低下1(FMR1)基因5'末端非编码区CGG序列重复数增加至前突变(重复数55～200个)与POF的发生存在密切关系。本文将分析FMR1基因的结构和功能,并探讨CGG重复序列数目与POF发生的潜在相关关系。

卵巢早衰与脆性X智力障碍基因1CGG异常重复扩增相关性的研究进展

脆性X综合征(FXS)常表现为遗传性智力障碍和自闭症等多系统疾病。脆性X智力障碍基因1(FMR1)为卵巢早衰(POF)发病相关的重要遗传学因素。患POF的女性仍有一定受孕概率,且FMR1基因CGG重复异常的携带者可能性较高,导致其生殖功能改变和不明原因复发性流产发生率增高。本文对POF与FMR1基因CGG异常重复相关研究进行综述,以期为遗传咨询和生育指导提供理论基础,进而降低生育缺陷。

FMR1基因在脆性X综合征诊断及治疗中的应用进展

脆性X综合征(FXS)除表现为语言发育不良和癫痫发作外,患者还可能出现严重的行为改变,包括多动、冲动和焦虑等。FXS是一种三核苷酸重复障碍,其中脆性X智力障碍1(FMR1)基因超过200个CGG基序重复会导致基因沉默,并导致其产物脆性X智力低下蛋白丢失。针对FXS的发病机制如激活FMR1基因表达、非编码RNA以及病毒载体介导的FXS基因治疗被认为是具有研究潜力的病因学治疗方法,但尚处于研究阶段。针对高危人群进行产前诊断及筛查是减少FXS患儿出生的有效方法。在未来的研究中,针对FMR1基因进行早期诊断和治疗将会是FXS研究的主要方向。

脆性X智力低下1基因与女性生殖能力的关系研究进展

卵巢是女性重要的生殖与内分泌器官,其周期性分泌激素与排卵,维持女性的生殖健康。正常的卵巢功能是一个连续过程的结果,该过程始于原始生殖细胞的形成、增殖和迁移,通过在胚胎期卵泡单位的发育,延伸到新生儿期和成年时期,随着卵泡持续减少或闭锁,最终以生理性卵巢功能不全或绝经结束。卵巢功能受到多种因素的影响,包括遗传因素、吸烟、环境和医学因素,如子宫内膜异位症、化疗、放疗或卵巢手术等[1]。研究发现,脆性X智力低下1基因(FMR1)的突变是导致原发性卵巢功能不全/卵巢早衰(POF)的原因之一[2],严重影响女性的身体健康[3]。本文在国内外研究的基础上,对FMR1基因的CGG重复序列与卵巢功能和妊娠结局之间的关系进行阐述,以明确FMR1基因的筛查对降低出生缺陷的重要意义。

甲基化特异性PCR检测FMR1和XIST基因甲基化实验方法的建立

建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(Xchromosome inactivation,XIST)甲基化的方法.用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰.以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对:1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因(CGG)n重复序列区、FMR1和XIST基因的启动子区.PCR产物进一步克隆、测序.以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物.测序结果表明,FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基不改变.成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法.

脆性X相关蛋白Ⅰ的研究进展

脆性X相关基因I(FXR1)发现于1995年,位于3号染色体3q28。其产物脆性X相关蛋白1(FXR1P)与脆性X智障蛋白1 (FMR1P)、脆性X相关蛋白2(FXR2P)形成一个RNA结合蛋白家族。目前认为这三种蛋白能输送mRNA分子并调控其翻译过程。FXR1的翻译产物(FXR1P)分子中存在两个KH结构域和一个RGG结构域,这两种结构域与FXR1P分子的RNA结合作用有关。FXR1P的表达具有较高的组织特意性,在横纹肌中表达最高。合适的动物模型对于一种蛋白的功能研究具有十分重要的意义,目前,FXR1敲除的各种动物模型如小鼠、斑马鱼、非洲爪蟾的近亲Xenopus tropicalis已经在不同的实验室建立。本文主要介绍了FXR1P的结构特点、功能及其实验动物模型。

GSK3抑制剂氯化锂对脆性X综合征模型小鼠避暗行为的干预作用

目的探讨糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase3,GSK3)抑制剂氯化锂对脆性X综合症小鼠模型的避暗行为的干预作用及机制。方法通过对30日龄脆性X综合症小鼠连续腹腔注射不同剂量氯化锂5 d,用药第4天和第5天进行避暗实验;同时用免疫印迹技术检测Fmr1 knockout(KO)及wild type(WT)小鼠的海马和皮层总GSK 3β和磷酸化GSK 3β(P-GSK3β)的变化。结果在避暗实验中,KO鼠与WT鼠,两者潜伏期及错误次数分别为(56±32)s,(83±24)s;(7±3)次,(3±2)次;免疫印迹实验结果:KO鼠皮层及海马P-GSK3β表达平均灰度值分别为69,63;WT鼠皮层和海马均为100。注射氯化锂后,KO鼠和WT鼠总GSK3β无明显改变,而KO鼠60 mg/kg,120 mg/kg,200 mg/kg组皮层P-GSK3β表达平均灰度值分别为:147,151,234;海马P-GSK3β分别为108,111,146,较空白组增多;P<0.05。WT鼠用氯化锂后,潜伏期和错误次数以及P-GSK3β表达变化无统计学意义。结论氯化锂能改善KO鼠的学习记忆能力,可能与氯化锂导致的P-GSK3β的表达增加有关,对脆性X综合征基因敲除小鼠有治疗作用。

脆性X综合征的临床特征及遗传特点

脆性X综合征[fragile x syndrome Fra（x）],又称Martin—Bell综合征,是最常见的家族性智力低下疾病.在遗传性智能障碍疾病中,发病率仅次于先天愚型,占非特异性智力低下患者的2%一6%;在X连锁智力低下中占40%.人群中男性发病率为 1/250、女性为1/2500.其细胞遗传学的典型特征是在缺乏叶酸及胸腺嘧啶的培养条件下,或加入诱导剂如氨甲蝶吟（MTX）,5一氟尿嘧啶核苷（FudR）和过量胸苷均可诱导脆性X的表达,其表达频率高的可达80%,可在X染色体长臂末端(xq27.3)

脆性X位点的突破

三个研究组各自从酵母人工染色体(YAC)中分离出跨越脆性X位点的基因片段,并且证明患者该位点发生两步突变:即围绕CpG岛的甲基化以及由插入或扩增引起(CGG)n重复的延长(正常n<40)。脆性X基因很可能编码一种DNA结合蛋白。

180例不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征检出情况

目的通过检测脆性X智力低下1(FMR1)基因突变情况,分析不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征(FXS)检出情况。方法纳入180例不明原因智力障碍儿童,采用PCR微流控毛细管电泳技术对其及部分FMR1基因突变患儿家系成员进行FMR1基因突变分析,并采用Southern印迹杂交法进行验证。结果在180例智力障碍儿童中,共检出FMR1基因全突变型4例、中间型1例、正常型175例,FXS的检出率为2.22%(4/180);正常型最常见的CGG重复次数是28次和29次。4例全突变型病例中,家系1先证者CGG重复数为190/248/370次,母亲为25次和134次,妹妹为39次和148/218/554次,姨妈为29次和29次;家系2先证者CGG重复次数为859次;家系3先证者CGG重复次数为529次,母亲为31次和76次,姐姐为29次和130次;家系4先证者CGG重复次数为525次。4例FMR1基因全突变型病例样本经Southern印迹杂交法验证,结果都显示有>5.8 kb条带(全突变条带),两种方法基因分型结果完全一致。结论在不明原因智力障碍儿童中存在一定比例的FXS患儿。PCR微流控毛细管电泳技术高效、快速,适合用于智力障碍人群FXS大规模筛查,有助于避免该病患儿的出生。

fmrl基因敲除小鼠中间神经元发育研究的新方法

目的:通过杂交技术获得能表达GAD67-GFP的fmrl基因敲除小鼠模型。方法:fmrl基因敲除(fmrl-ko)雌性小鼠(X^-X^-)和GAD67-GFP敲入基因杂合雄性小鼠(2^+2^-)杂交。鼠尾巴提取基因组DNA,用PCR方法鉴定所有子代基因型。对杂交后代小鼠进行行为学观察,并行脑组织切片观察绿色荧光蛋白在γ-氨基丁酸能神经元的表达。结果:PCR方法证实通过杂交繁殖出四种基因型小鼠:同时带有杂合fmrlko及GAD67-GFP位点的雌性小鼠(X^+X^-/2^+2^-)、带有纯合fmrl-ko及GAD67-GFP位点的雄性小鼠(X^-Y/2^+2^-)、不带有GAD67-GFP的雌性和雄性小鼠(X^+X^-/2^-2^-,X^-Y/2^-2^-)。观察发现X^-Y/2^+2^-小鼠具有fmrl-ko小鼠类似的行为学表现,同时在显微镜下观察到X^-Y/2^+2^-小鼠脑组织切片有发绿色荧光的GABA神经元。结论:该杂交小鼠成功表达了GAD67-GFP,为研究γ-氨基丁酸能神经元在脆性X综合征发病机制中的作用提供一种可靠的模型。

FMR1基因敲除对雌性小鼠生殖功能的影响

目的利用FMR1基因敲除小鼠,研究FMR1基因缺失对雌性小鼠生殖功能的影响,并对其影响机制进行探讨。方法将成年的KO纯合子、KO杂合子、WT雌鼠分别和成年的WT雄鼠合笼,观察合笼时间及产仔数;随机取10周的上述3种基因型雌鼠,HE染色观察卵巢形态;免疫组化测定NPY和GABA在下丘脑的分布,Image Pro Plus 6.0分析平均光密度值;ELISA测定血清NPY水平。结果 3组小鼠中,KO纯合子雌鼠的产仔数少于WT雌鼠(6.39±2.30)、(7.60±2.69)和(8.00±1.88);KO纯合子雌鼠的卵泡总数少于WT雌鼠(36.00±5)、(39.33±7.87)和(45.45±7.85);KO纯合子雌鼠下丘脑NPY的表达弱于WT雌鼠(0.27±0.016)、(0.29±0.04)和(0.31±0.041);血清NPY及下丘脑GABA的表达三组间差异均无显著性(P>0.05)。结论FMR1基因敲除可导致雌鼠生育功能下降,FMR1基因可能是通过下调NPY的表达来降低其生殖功能的。

应用多聚酶链式反应快速分析FMR-1基因突变

为了建立一种在先天性智力低下患儿中快速分析脆性X综合征智力低下基因1(Fragile X mentaI retardation gene 1, FMR-1)突变的方法,对先天性智力低下儿童进行脆性X综合征的大面积筛查和诊断,应用复式多聚酶链式反应一次性扩增FMR-1基因的(CGG)n的重复区,分析CGG重复序列的大小,判断FMR-1基因状态(正常、突变前、突变后),对脆性X综合征可疑患儿快速筛查。在113例不明原因的先天性智力低下患儿中,分析有脆性X综合征携带者(FMR-1基因前突变者)7例(2男5女),脆性X综合征患者(FMR-1基因突变者)5例。应用多聚酶链式反应可以对脆性X综合征可疑患儿进行大面积初筛,确定携带者和患者。

FMR1基因与卵巢功能下降的相关性研究进展

脆性X智力障碍1号基因(FMR1)与卵巢功能的相关性得到越来越多的关注,其前突变与早发性卵巢功能不全(POI)明确相关,但POI患者中FMR1前突变携带率存在人种差异,两者的相关性在西方国家人群中尤为明显,在亚洲人群中的研究受到质疑。我国POI患者前突变的发生率稍高于健康女性,前突变可能与卵巢储备功能下降有关。FMR1前突变导致脆性X相关的POI相关机制主要与mRNA毒性有关,高浓度mRNA干扰卵泡发育,对颗粒细胞呈现毒性作用。未来开展卵巢功能下降患者的FMR1基因筛查可为其提供生育指导,具有临床应用价值。