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脆性X智力障碍蛋白靶向DDX5调控Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞上皮-间质转化发生
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作者 曹佳 王晶 +3 位作者 石斌 马小兰 吴伟超 王南 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1138-1149,共12页
目的探讨脆性X智力障碍蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)促进乳腺癌细胞迁移、上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)发生及其可能的作用机制。方法采用RT-PCR、Western blot方法,分析FMRP在正常乳腺... 目的探讨脆性X智力障碍蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)促进乳腺癌细胞迁移、上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)发生及其可能的作用机制。方法采用RT-PCR、Western blot方法,分析FMRP在正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和4种乳腺癌细胞系(MCF-7、BT474、MDA-MB-231、HCC1937)中mRNA和蛋白表达,免疫组化染色检测FMRP在乳腺癌组织中的表达;GEO数据库分析FMRP基因在乳腺癌中的表达及与临床预后的关系;采用慢病毒感染和siRNA干扰技术分别构建FMRP过表达及干扰载体,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,设置对照组(Control)、干扰空载体组(NC)、敲低载体组(si FMRP)以及过表达空载体组(Lv-NC)、过表达载体组(Lv-FMRP);划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测各组细胞中EMT标志物[上皮标志物E-cadherin,间质标志物N-cadherin、vimentin、ZEB1(zinc finger E-box binding homeobox 1)、Slug(snail family zinc finger 2)]表达;免疫共沉淀联合质谱分析(IP-MS)验证FMRP与DEAD box RNA解旋酶-5(DEAD-box helicase5,DDX5)蛋白的互作关系,利用蛋白合成抑制剂放线菌酮(cycloheximide,CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132检测FMRP对DDX5蛋白表达的调控作用;同时转染si DDX5载体,观察DDX5是否可以逆转FMRP过表达对细胞迁移、EMT的影响;采用免疫荧光染色检测β-catenin的定位及表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路核心标志物蛋白表达。结果FMRP在乳腺癌组织及细胞中呈高表达(P<0.05),FMRP高表达组总生存和无进展生存低于FMRP低表达组(P<0.05);敲低FMRP后MCF-7细胞迁移能力减弱,过表达FMRP促进细胞迁移(P<0.05);敲低FMRP后E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin、ZEB1、Slug表达降低,抑制EMT发生,而过表达FMRP则促进EMT进程(P<0.05);FMRP与DDX5蛋白互作,且通过阻断泛素-蛋白酶体途径促进DDX5蛋白稳定性;敲低DDX5逆转FMRP过表达对细胞迁移及EMT的促进作用(P<0.05),且有效抑制β-catenin核转位,降低β-catenin核分布;进一步发现DDX5下调后p-β-catenin、GSK3β、Axin2蛋白表达升高,C-myc蛋白表达降低(P<0.05),而联合FMRP过表达逆转上述蛋白的表达(P<0.05)。结论FMRP靶向DDX5通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞迁移和EMT进程。 展开更多
关键词 脆性x智力障碍蛋白 DEAD box RNA解旋酶-5 上皮-间质转化 WNT/Β-CATENIN信号通路
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FMRP影响小鼠小脑皮质神经元发育与迁移的实验研究
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作者 孙晓红 董玉霞 +3 位作者 冯昱 宋卫科 何悦 何志义 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期420-421,共2页
目的观察脆性X智力障碍蛋白(FMRP)对小鼠小脑皮质神经元发育与迁移的影响。方法构建FMRPmutant-pEGFP与pEGFP质粒;将质粒转染到胚胎小鼠脑内并鉴定转基因脆性X综合征(FXS)小鼠类型;Nissl染色及免疫荧光组织化学染色观察小脑皮质神经核... 目的观察脆性X智力障碍蛋白(FMRP)对小鼠小脑皮质神经元发育与迁移的影响。方法构建FMRPmutant-pEGFP与pEGFP质粒;将质粒转染到胚胎小鼠脑内并鉴定转基因脆性X综合征(FXS)小鼠类型;Nissl染色及免疫荧光组织化学染色观察小脑皮质神经核团发育及神经元迁移的形态学变化。结果 Nissl染色显示实验组小脑深部核团明显缩小且被白质分隔;Purkinje细胞呈现非极性紊乱排列,部分细胞滞留于内颗粒细胞层;免疫荧光染色显示实验组小脑单极刷状缘细胞迁移路径改变,细胞在侧脑室区聚集。结论 FMRP缺乏导致小鼠小脑皮质神经元发育与迁移异常。 展开更多
关键词 脆性x智力障碍蛋白 小脑深部核团 单极刷状缘细胞 浦肯耶细胞
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人外周血淋巴细胞FMRP的免疫细胞化学分析方法的建立
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作者 富显果 廖娟 +3 位作者 郭小燕 严爱贞 张朵 兰风华 《国际检验医学杂志》 CAS 2012年第20期2527-2528,共2页
目的建立免疫细胞化学方法检测脆性X智力障碍蛋白(FMRP),进而实现脆性X综合征(FXS)的初步筛查。方法对20份正常样本及疑似FXS患者的标本进行免疫细胞化学染色和免疫荧光染色并计数阳性率。结果带绿色荧光的FMRP在淋巴细胞胞浆中表达与... 目的建立免疫细胞化学方法检测脆性X智力障碍蛋白(FMRP),进而实现脆性X综合征(FXS)的初步筛查。方法对20份正常样本及疑似FXS患者的标本进行免疫细胞化学染色和免疫荧光染色并计数阳性率。结果带绿色荧光的FMRP在淋巴细胞胞浆中表达与免疫组化相一致,正常标本正常阳性表达率范围为82%~96%,该疑似FXS患者的阳性细胞表达率为90%。结论可采用外周血淋巴细胞FMRP免疫细胞化学方法进行FXS的初步筛查。 展开更多
关键词 脆性x综合征 脆性x智力障碍蛋白 免疫细胞化学
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FMRP促进胚胎小鼠大脑皮层神经元发育与迁移 被引量:4
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作者 孙晓红 董玉霞 +3 位作者 冯昱 宋卫科 何悦 何志义 《解剖科学进展》 CAS 2010年第3期200-203,共4页
目的观察脆性X智力障碍蛋白(FMRP)对胚胎小鼠大脑皮层神经元发育与迁移的影响。方法应用基因定点突变技术构建pEGFP-FMRPmutant与pEGFP质粒;采用子宫内胚胎鼠电极针刺技术将质粒转染到胚胎鼠侧脑室并用PCR和Southern analysis技术鉴定FX... 目的观察脆性X智力障碍蛋白(FMRP)对胚胎小鼠大脑皮层神经元发育与迁移的影响。方法应用基因定点突变技术构建pEGFP-FMRPmutant与pEGFP质粒;采用子宫内胚胎鼠电极针刺技术将质粒转染到胚胎鼠侧脑室并用PCR和Southern analysis技术鉴定FXS小鼠类型;尼氏染色与荧光免疫组织化学双染技术分析大脑皮质各细胞层神经元分布数目并进行统计学分析。结果尼氏染色确定胚胎小鼠大脑皮质各细胞层,荧光免疫双染共聚焦显示实验组胚胎小鼠侧脑室区/侧脑室下区(VZ/SVZ)(1.76倍,P=0.035)和中间带(IZ)(1.71倍,P=0.002)表达标记EGFP(绿色)的神经元数目比对照组显著增多;实验组小鼠VZ/SVZ(5.48倍,P=0.006)和IZ(2.16倍,P=0.043)同时表达标记EGFP(绿色)和Nestin(红色)神经元数目亦比对照组显著增多。结论 FMRP促进胚胎小鼠大脑皮层神经元前体细胞的分化发育与迁移,FMRP缺乏时神经元发育及迁移滞后。 展开更多
关键词 脆性x智力障碍蛋白 基因突变 侧脑室区/侧脑室下区 迁移 小鼠
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