宁夏地区腹泻犊牛产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌的药敏试验及脉冲场凝胶电泳分型

为了解宁夏地区规模化牛场犊牛腹泻源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希氏菌耐药和遗传变异情况,对分离得到的17株产ESBLs大肠埃希氏菌,采用K-B纸片法进行药物敏感性试验,采用脉冲场凝胶电泳进行分型研究。结果显示,17株分离株对试验药物多数呈耐药状态,对头孢拉定、四环素、阿莫西林3种药物完全耐药,其他药物的耐药性为70.24%~94.12%,只对阿米卡星、诺氟沙星敏感性较高。分离菌株可分为17个PFGE型,菌株间的相似度为67.5%~85.7%,无优势带型。宁夏地区犊牛腹泻源产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性严重,遗传差异较大,但不同菌株存在着不同程度的亲缘关系。

脉冲场凝胶电泳分型技术应用于宋内志贺菌溯源分析

目的:分析四川省成都市2006年崇州、大邑两地相继暴发的宋内志贺菌食源性感染疫情中病人分离菌株之间,及其环境分离菌株之间的分子分型特征和遗传相关性,推断传染来源。方法:收集两地疫情暴发期间分离的宋内志贺菌株,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型,所得结果用BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果:共测试56株菌,用XbaⅠ酶切后PFGE可分为14个带型。其中崇州菌株38株,有26株带型完全相同(包括1株环境株);有37株菌分布于5种带型,其相似性在97%以上。大邑菌株18株,有10株带型完全相同;其余8株有7种带型,相似性较差。两地之间菌株分子分型差异明显,其相似性小于92%。结论:确证崇州、大邑两地确有宋内志贺菌食源性感染疫情的暴发,但两地之间无交叉传染关系;提示崇州的宋内志贺菌疫情是由食物凉拌菜引起;提示大邑本地有较高的宋内志贺菌流行水平和复杂的传染源。

四川省鸭和猪源鼠伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳分型与耐药比较分析

目的 比较研究四川省鸭和猪源鼠伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型与耐药特征,为分析鼠伤寒沙门菌食品来源提供支持。方法 将鸭和猪源监测中分离的47株鼠伤寒沙门菌进行PFGE分型,并采用最小抑菌浓度法测定9种药物敏感性。结果 鸭和猪源中分离的鼠伤寒沙门菌在PFGE分型和耐药上存在差异。鸭源菌株聚集于簇I,而猪源菌株聚集于簇II。簇II菌株对氨苄西林、环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、四环素、复方新诺明6种药物的耐药率高于簇I菌株。不同的PFGE分型鼠伤寒沙门菌在监测地区和耐药谱存在差异。SCSTm-10型菌株均分离于绵阳地区,SCSTm-11型主要分离于资阳地区。SCSTm-10型菌株对复方新诺明和环丙沙星的耐药率高于SCSTm-11型菌株。结论 PFGE分型可以获取四川省鼠伤寒沙门菌分离来源、分离地点和耐药的聚类信息,为鼠伤寒沙门菌食物中毒提供流行病学调查支持。

金黄色葡萄球菌肠毒素与脉冲场凝胶电泳分型分析

目的了解不同来源金黄色葡萄球菌(AS)携带葡萄球菌肠毒素(SE)基因种类与同源性,为防控AS性食物中毒提供依据。方法AS分离、鉴定和确认采用GB/T 4789.10方法;9种SE测定采用PCR法;PFGE分型采用CDC Pulse Net USA方法;药敏试验采用ABTGP-67卡法。结果63株AS检出9个SE基因型。中毒组检出a、b、d、e、h和j型6个SE;食品和院感组检出除d型外的8个SE基因,以b型检出最多,达74.60%。PFGE分型中毒组AS(包括食品分离株)其条带100%相同,食品和院感组分为12个PFGE型,有8株AS的PFGE带型与中毒组的带型相同。3种来源AS对青霉素G抗生素均有较高的耐药性。中毒组AS仅对青霉素G耐药;食品和院感组对7种抗生素耐药率超过50%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分别为12.00%和42.31%,以院感株耐药性最强,其次为食品株和中毒株。结论SE和PFGE对AS食物中毒病因关联性追踪有重要的意义,能快速查明食物中毒原因,提高食物中毒调查的查明率。

铜绿假单胞菌的血清分型、鞭毛分型和脉冲场凝胶电泳分型

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一种重要的人畜共患病原菌，给人畜健康带来威胁。细菌分型是揭示病原菌流行规律、传播机制以及制定相应防控措施的基础。选取水貂、人和羊源PA共78株分别进行O-抗原血清分型、H-抗原鞭毛分型以及脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型。结果显示，60株水貂源PA主要流行血清型为G型（73．3%），其次为I，M，B，E型；鞭毛A型和B型分别占91．7％和8．3％。16株人源PA以血清型E型（25％）为主，其他型别G，M，I，B，D，F，H零散分布，鞭毛A，B型分别占68．8％和31．2％。2株羊源PA血清型为I型（100％），且均为鞭毛B型。PFGE分子分型共分为14个谱型，24个亚型，其中B1、F3、G1、H1这4个亚型的菌株同源性达到100％。结果表明，水貂源PA感染与血清G型和鞭毛A型高度相关（P〈0．01）；人源PA感染优势血清型为E型且与鞭毛A型显著相关（P〈0．01）；2株羊源PA感染均为血清I型和鞭毛B型；不同来源的PA菌株其PF—GE分型呈现多样化和复杂性，相同来源的菌株其PFGE谱型有的完全相同，显示同一个克隆传播的可能，有的差异很大，显示不同分子克隆传播。本试验有助于阐明山东省3种来源PA的分子流行特征，为开展PA相关风险评估、控制及疾病诊治提供依据。

我国部分地区猪养殖场耐药基因mcr-1阳性大肠杆菌的PFGE和RAPD分型对比研究

耐药基因mcr-1严重威胁多黏菌素对多重耐药革兰氏阴性杆菌感染的治疗,该基因起源于动物养殖场,而且具有非常高的流行率。本研究从我国山东、青海、四川、北京、贵州、海南、江西、山西、新疆维吾尔自治区9个省市自治区的33个猪养殖场分离鉴定得到63株mcr-1阳性大肠杆菌,采用脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)和随机扩增多态性分析(RAPD)方法来解析上述菌株的亲缘关系,并对两种分子分型方法进行比较。结果显示,我国不同地域猪养殖场中的mcr-1宿主菌主要为大肠杆菌,并且其分子分型呈现多样性特征。63株菌共获得56种PFGE谱型,仅有7组菌株表现出克隆关系;RAPD分型则呈现55种谱型,有7组菌株表现出克隆关系。研究表明两种分型方法均可用于mcr-1阳性大肠杆菌的同源性分析,但PFGE的分辨力、稳定性、重复性都优于RAPD,在对菌株进行亲缘关系分析时推荐使用PFGE。对于缺乏高端设施的实验室,分离株进行分子分型时也可以考虑RAPD。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。

中国八省市食品来源单核细胞增生李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析方法对单核细胞增生李斯特菌（Lm）进行基因分型,初步建立中国Lm的基因分型数据库。方法 按照标准化的Lm-PFGE方法对来自国内8个省市、多种食品来源的118株Lm进行了PFGE分型。结果 118株Lm分成了39种带型,其中GX6A160004型有37株菌,占分析菌株的31．36%,是主要型别。结论 初步建立了中国单核细胞增生李斯特菌用于网络监测分析（PulseNet China）的基础数据库,发现同型菌株在全国多个地区广泛存在。

沙门氏菌PFGE分型非计量多维尺度分析法的研究

目的探讨沙门氏菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型非计量多维尺度分析法(NMDS)。方法从国内不同地区分离得到的24株沙门氏菌进行PFGE分型,然后以非计量多维尺度法对PFGE分型进行分析。结论将24株沙门氏菌显示在三维空间,从视觉上直接揭示了表型特征相近的不同国家和地区沙门氏菌之间的相关性,为PFGE谱图的分析提供了一种有用的工具。

纹带棒状杆菌临床分离株分子分型和耐药性分析

目的 揭示我国临床分离的纹带棒状杆菌分子分型及耐药性,为制定纹带棒状杆菌感染防治措施提供依据.方法 采用多中心横断面研究方法,收集广东、唐山、北京地区各一家三级甲等医院在2017年10月-2018年1月间从临床标本中分离的197株纹带棒状杆菌.用微量肉汤法检测最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);聚合酶链式反应检测菌株的氨基糖苷修饰酶基因[aph(3″)-Ⅰb、aph(6)-Ⅰd、aac(6′)-Ⅰb、aadA、aph(3′)-Ⅲa以及AC(6′)-Ⅰe-APH(2″)-Ⅰa、核糖体甲基化酶基因(ermX)、核糖体保护蛋白基因(tetW)、外输泵蛋白基因(tetL)以及碳青霉烯酶基因(blaIMP、blaVIM、blaOXA-48、blaNDM和blaKPC),目的产物经测序和BLAST比对并确定其基因型;采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对菌株进行分子分型,用Bio Numerics 软件对所有实验菌株的PFGE图谱进行聚类分析.结果 99.5%的被测菌株至少对一种抗生素表现耐药;庆大霉素耐药菌株中耐药基因aph(3″)-Ⅰb、aph(6)-Ⅰd、aac(6′)-Ⅰb和aadA检出率分别为89.3%(67/75)、84%(63/75)、57.3%(43/75)和4%(3/75);红霉素以及克林霉素耐药菌株中耐药基因ermX的检出率均为88.3%(153/173);四环素和多西环素耐药菌株中耐药基因tetW和tetL的检出率分别95.5%(105/110)、97.2%(70/72)和100%(110/110)、100%(72/72).197株临床分离纹带棒状杆菌共分为82个型别,每个型别分别包含1~27株菌,其中11个型别包含的菌株数大于5株,广东的菌株优势型别为CSS01.CN0058;唐山的菌株优势型别为CSS01.CN0035、CSS01.CN0051、CSS01.CN0052和CSS01.CN0048;北京的菌株优势型别为CSS01.CN0058、CSS01.CN0070、CSS01.CN0108和CSS01.CN0015.结论 我国纹带棒状杆菌临床分离株耐药情况严峻,而且存在多重耐药菌株的院内传播,需要开展更大范围的系统监测为制定控制措施提供实验依据.

山东某地区产气荚膜梭菌的分子型别与耐药特征

目的分析山东省某地区临床及动物中分离的产气荚膜梭菌的分子型别及耐药特征。方法对山东省56株产气荚膜梭菌进行PFGE、MLST分子分型、药敏试验和耐药基因检测,比较分析同一来源菌株内部和不同来源菌株间的型别和耐药特征。结果56株产气荚膜梭菌分为53个PFGE型,有50株菌表现出独特的型别。MLST分型将其分为46个ST型,其中40种ST型仅包含一株菌。本研究中菌株均对万古霉素,美罗培南和头孢西丁表现为敏感;对甲硝唑、青霉素、莫西沙星和氯霉素的耐药率相对比较低,分别为3.57%、7.14%、8.93%和1.79%;然而,对克林霉素的耐药率高达53.57%,人类来源菌株与动物来源菌株的耐药谱呈现出较为明显的差异。基于全基因组的耐药基因分析显示,所有56株产气荚膜梭菌均携带mprF基因,其次是tetA(P)(98.21%),tetB(P)(87.5%)以及ermQ(51.79%)。结论我国山东某地区临床来源与动物来源产气荚膜梭菌耐药谱存在显著差异,同一地区的菌株分子型别具有很强的多样性。需要开展更全面的的系统监测为制定控制措施提供流行病学依据。

北京市一些地区生肉标本中单增李斯特菌的分离及其分子流行病学特征分析

目的了解北京市一些地区生肉中单增李斯特菌的污染情况及其分子流行病学特征。方法采用北欧食品分析标准(NMKL)对北京市一些地区采集的340份牛、羊、猪、鸡和鸭生肉标本进行单增李斯特菌的分离鉴定,并对分离菌株进行血清学分型(Serotyping)、脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型及多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)分析。结果生肉标本中单增李斯特菌污染率为6.2%(21/340)。分离菌株含3种血清型(1/2a,1/2b和1/2c),以1/2c为优势血清型(占47.6%)。PFGE分析中,使用内切酶AscI酶切电泳将21株单增李斯特菌分为12个型别,可聚类为3个群。MLST分析将21株单增李斯特菌分为7个ST型,其中ST9型最多(10株)。结论北京市一些地区的生肉类食品中存在6.2%的单增李斯特菌污染率,这些单增李斯特菌以家系II菌株占据绝对优势(80.1%),其中1/2c型,GX6A16.CN0004和ST9型分别为血清型、PFGE带型以及MLST序列型的优势型别,与我国食源性单增李斯特菌的优势菌群特征一致。

2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌的病原学特征

目的 了解2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌分离株的血清型别、抗菌药物耐药性、毒力基因携带情况以及分子分型特征。方法 对广州市2010—2013年食源性疾病监测中分离到的108株副溶血性弧菌进行血清分型、药敏试验以及耐热直接溶血毒素基因（tdh）、耐热相关溶血毒素基因（trh）的PCR检测,并进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型。结果 2010—2013年广州市副溶血性弧菌的主要血清型为O3：K6（51株,47.2%）、O1：KUT（32株,29.6%）。药敏检测结果显示,分离株对氨苄西林（90.7%）和头孢吡肟（28.8%）耐药率较高,而对复方新诺明、氯霉素则100.0%敏感。多重耐药分析显示,2010—2013年分别有53.6%（15/28）、20.6%（7/34）、18.8%（3/16）、33.3%（10/30）的分离株同时耐受≥3种抗菌药物。毒力基因PCR检测显示,95.4%（103/108）的分离株为tdh＋trh-,4.6%（5/108）的分离株为tdh-trh＋。PFGE显示,108株副溶血性弧菌经NotⅠ酶切后的PFGE图谱可分为3个聚类,55个PFGE型别,相似值为60.2%~100%。优势血清型O3：K6和O1：KUT主要集中于聚类Ⅱ,O4：K8血清型主要集中于聚类Ⅲ。结论 2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌优势血清型为O3：K6和O1：KUT型,菌株对多数抗菌药物仍然比较敏感,但存在多重耐药现象,多数菌株携带tdh基因,PFGE结果提示广州市食源性监测副溶血性弧菌存在遗传多样性。

江西省猪和啮齿动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的了解江西省不同宿主动物中小肠结肠炎耶尔森菌的分布以及病原特征,为该菌防控提供科学依据。方法采集江西省不同年份的屠宰猪与鼠类标本,对foxA筛检阳性的标本进行分离培养,对分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清型、生物型、毒力基因与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果从1018份标本中分离到79株小肠结肠炎耶尔森菌,阳性率为7.76%(79/1018)。猪的阳性率为20.86%(63/302),均为O∶3血清型;鼠的阳性率为2.24%(16/716),血清型为O∶5、O∶8和未分型,生物型均为1A型。79株小肠结肠炎耶尔森菌中,致病性菌株均来自猪,占总分离菌株数的79.75%(63/79),其中59株(ystA^+、ystB^-、yadA^+、virF^+、ail^+、rfbc^+),4株(ystA^+、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^+、rfbc^+);非致病性菌株均来自鼠,占总分离菌株数的20.25%(16/79),其中12株(ystA^-、ystB^+、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)、4株(ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)。致病性菌株可分为6种带型,以K6GN11C30021为主要型别,占比80.95%(51/63)。结论在江西省的不同宿主动物中,致病性小肠结肠炎耶尔森菌的主要携带者为生猪。应加强江西地区以生猪为宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的监测。

厦门地区ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及同源性分析

目的 分析厦门地区ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药表型及同源性,为确定其感染流行特征和制定防控措施提供依据.方法 收集厦门地区3家综合性医院ICU患者分离的鲍曼不动杆菌,以K-B法检测16种抗菌药物的敏感性,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子生物学分型.结果 45株都属于多重耐药菌株,在16种抗菌药物中仅有个别菌株对阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦呈现中度敏感;PFGE分析可分为PT1~11共11个型别,其中在收集菌株期间导致某次感染暴发的菌株属于PT4型（26株,58%）.结论 厦门地区ICU存在多重耐药鲍曼不动杆菌流行,菌株PFGE带型分布离散性较大,不同医院在不同时期流行菌株型别不同.建议应合理使用抗菌药物,治疗首选头孢哌酮/舒巴坦,加强其耐药性变迁和流行菌型的监测,建议采用网络实验室的标准（PulseNet 标准）开展对优势流行菌型的监测.

美国《Emerging Infectious Diseases》2010年第16卷第11期有关人兽共患病论文摘译

我们确定了用于预测感染发生情况的肠炎沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型特征（也就是可作为判定暴发的标识）。明尼苏达州卫生局运用动态迭代模型对分型情况进行分析。在2001—2007年期间，344个群中共有43个群（12．5％）被归类。

秦皇岛市一起由副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件的检测和溯源分析

目的对一起食源性疾病暴发事件检出的目标菌进行血清分型、毒力基因、耐药性检测及分子分型检测,明确导致食源性疾病暴发事件的致病菌及可能性溯源。方法采集病例腹泻便及可疑环境样本进行致病菌的检测,对分离出来的可疑致病菌进行生化鉴定、血清分型、毒力基因检测及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型检测。结果4份腹泻便标本检出2株血清型为O5:K17的副溶血性弧菌,4份环境标本中检出1株血清型为O5:K17的副溶血性弧菌,毒力基因检测均为tlh和tdh基因阳性,trh基因阴性,将上述3株副溶血性弧菌进行PFGE分子分型检测,同源度高达100%。结论本次食源性疾病暴发事件由血清型为O5:K17的副溶血性弧菌污染餐盘所致。

漳州市2016—2019年公共场所嗜肺军团菌检测及分型分析

目的 了解漳州市公共场所分离出的嗜肺军团菌病源学特征,为卫生监督管理提供依据。方法 2016—2019年采集漳州市部分公共场所集中空调冷却水和淋浴场所的淋浴水445份,进行嗜肺军团菌检测和分型分析。结果 采集445份水样,嗜肺军团菌阳性114份,阳性率25.62%。不同年份嗜肺军团菌检出率差异有统计学意义(χ^(2)=30.303,P<0.001);冷却水与淋浴水嗜肺军团菌检出率分别为9.68%和29.83%,差异有统计学意义(χ^(2)=13.686,P<0.001);分离阳性菌株491株,鉴定为13种血清型,以LP1型和LP6型为优势菌型,占检出菌的35.38%(159/491)和23.47%(115/491);分离嗜肺军团菌阳性菌株66株,经PFGE聚类分析,可分为38种带型,菌株之间的相似系数26.50%~100%。结论 漳州市公共场所存在一定程度的嗜肺军团菌污染,应加强公共场所集中空调冷却塔和淋浴场所的淋浴管道的清洗、消毒和监管。