食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型分析

对石家庄地区食源性金黄色葡萄球菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,建立石家庄市金黄色葡萄球菌PFGE分型的数据库,探讨引起食物中毒金黄色葡萄球菌菌株和其他食源性金黄色葡萄球菌的分子特征。利用PFGE分型技术对2010至2012年石家庄市的75株食源性金黄色葡萄球菌进行全基因组分析,DNA酶切图谱用BioNumerics软件进行聚类分析。75株食源性金黄色葡萄球菌的PFGE图谱的相似性系数在54%～100%之间,经聚类分析得到45个PFGE型别,6起食物中毒的金黄色葡萄球菌分别由PFGE01型、PFGE02型、PFGE11型、PFGE12型、PFGE15型和PFGE45型引起。建立的金黄色葡萄球菌PFGE分型数据库分子型别较多,且存在差异明显的多个克隆系,对石家庄地区金黄色葡萄球菌引起食物中毒的防控和溯源工作有重要意义。

农村宴席沙门菌食物中毒脉冲场凝胶电泳溯源及药敏分析

目的 对引起食物中毒的21株沙门菌进行表型分型以确定该菌型别,并进行脉冲场凝胶电泳分型溯源,查明事件暴发原因,了解菌株的耐药状况。方法 21株沙门菌采用全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定,采用沙门菌属诊断血清对该菌株进行血清学鉴定。对21株沙门菌以限制性内切酶XbaⅠ酶切后进行脉冲场凝胶电泳,得到的图谱用生物分析软件BioNumerics进行同源性分析,微量肉汤稀释法对沙门菌进行耐药性检测。结果 本起食物中毒的沙门菌经过生化复核、血清学检测确定为肠炎沙门菌。来源于患者的15株肠炎沙门菌和分离至食品的6株肠炎沙门菌指纹图谱经BioNumerics软件分析具有极高相似性。该肠炎沙门菌对青霉素类的氨苄西林、β-内酰胺类的氨苄西林/舒巴坦、头孢类的头孢唑啉、喹诺酮类的萘啶酸、氨基糖苷类的庆大霉素、大环内酯类的红霉素与阿奇霉素耐药。结论 引起宴席食物中毒的病原为肠炎沙门菌。通过药敏检测发现该菌多重耐药。来源于患者的菌株和食品的菌株有高度同源性,结合流行病学调查结果判断为餐饮从业人员在加工食品环节中受到肠炎沙门菌污染所致。

肉牛屠宰过程中分离出沙门氏菌的脉冲场凝胶电泳分子溯源分析

为确定沙门氏菌在肉牛屠宰过程中不同工序间传播路径与交叉污染情况,应用脉冲场凝胶电泳(pulsedfield gel electrophoresis,PFGE)技术对分离于肉牛屠宰过程6个工序点(粪便、皮毛、去皮后、喷淋后、排酸后、分割肉)的沙门氏菌进行分子溯源分析。结果证实,PFGE比血清分型具有更高的分辨率,48 株沙门氏菌的PFGE图谱相似度为48.0%~100.0%,所有菌株在95.7%的相似度下划分为22个基因型,不同工厂(地域)间未发现高度相似的基因型。宰前动物的皮毛和粪便间存在严重的交叉污染现象,部分来源于粪便、皮毛的沙门氏菌已经突破屠宰企业的防控屏障,对胴体(洁净区)造成了污染,具有进一步污染下游产品的可能性。因此,应加强宰前管理,减少宰前交叉污染对企业内部防控措施造成的压力,并对去皮后的胴体设置喷淋减菌的干预程序,以有效扼制沙门氏菌由动物胃肠道向屠宰线的传播。

脉冲场凝胶电泳在白色假丝酵母菌基因核型分析中的应用

目的应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法研究白色假丝酵母菌DNA核型,评价其作为分子流行病学监测手段的价值。方法从11例患者中分离出白色假丝酵母菌14株,采用PFGE法进行基因核型测定,MircroScan WalkAway96 RY-ID快速生化鉴定板进行菌种鉴定。结果14株白色假丝酵母菌有9种不同基因核型。其中从同一例患者不同部位标本中分离出的4株白色假丝酵母菌基因核型完全一致,表明其来源于同一菌株的不同克隆亚型;来源于不同患者的其他10株菌中有3株具有完全相同的基因核型,而其余7株菌具有不同的基因核型。结论PFGE可很好地显示出不同来源的白色假丝酵母菌菌株间的同源性及多态性,可作为其分子流行病学研究的有效手段。

鼠疫耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 对鼠疫菌的全DNA进行酶切 ,了解我国各别生态型的鼠疫耶尔森氏菌在核酸水平上的差异。方法 用脉冲场凝胶电泳 (PFGE)方法进行分析。结果 用PFGE可将 2 0株鼠疫菌分成 5个核型 ,Ⅰ型为布氏田鼠型和青海田鼠型菌 ;Ⅱ型为滇闽居民区型菌和滇西丛谷型菌 ;Ⅲ型为祁连山型、青藏高原型和 1株分离自四川患者的鼠疫菌。西藏仲巴地区的 2株菌各为一个型。

脉冲场凝胶电泳在副溶血性弧菌食物中毒的同源性分析

目的应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对一起食物中毒分离的副溶血性弧菌进行同源性分析。方法将食物中毒患者肛拭标本中分离的7株副溶血性弧菌用限制性内切酶NotⅠ酶切后进行PFGE分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析。结果患者样本分离的7株副溶血性弧菌PFGE图谱条带一致,相似性为100%。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于食物中毒事件分离菌株的同源性分析。

江苏省1999—2005年霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的了解江苏省1999-2005年间分离的霍乱弧菌核酸特征,及O139群与O1群霍乱弧菌在基因组水平上的关联。方法 NotⅠ酶切霍乱弧菌基因组,脉冲场凝胶电泳(PFGE)得到指纹图谱,并进行比较分析。结果 PFGE指纹图谱将全部136株霍乱弧菌分为6类,PFGE-A型由1株临床来源El Tor、120株临床来源和9株环境来源的O139组成,PFGE-B型由1株临床来源的El Tor组成,PFGE-C型由1株临床来源的El Tor和1株临床来源的O139组成,PFGE-D型由1株环境来源的El Tor组成,PFGE-E型由1株环境来源的O139组成,PFGE-F型由1株临床来源的O139组成。结论PFGE指纹图谱提示O139起源于不同克隆的El Tor霍乱弧菌,为了解O139的进化路线和流行规律提供了有效证据。作为高分辨率的基因分型工具,PFGE可用于追踪霍乱弧菌的暴发流行传染源,并在其分子流行病学研究中发挥重要作用。

烧伤病区多重耐药铜绿假单胞菌DNA的脉冲场凝胶电泳分析

目的:了解烧伤病区铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染的分子流行病学特征。方法:采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法,对15株分离自烧伤临床病人的多重耐药PA染色体组DNA进行分析。结果:15株检测菌株中有9株菌分别属于两种不同的PFGE图谱类型,具有同源性的菌株占测试菌株的60%。结论:导致我院烧伤患者感染多重耐药的PA中有同源性的比例较高,提示在烧伤救治中采取有针对性的措施,防止烧伤病房内的交叉感染对于降低烧伤感染率、提高烧伤救治水平具有重要意义。

脉冲场凝胶电泳技术对一起聚集事件病原学回顾性分析

目的对一起多因素引起腹痛、腹泻聚集事件调查中采集的样本进行致病菌检验,利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)从分子水平对该起事件的病原学进行回顾性分析。方法依据相关标准对采集的样品进行病原菌分离、鉴定,选用SmaⅠ酶切事件中分离的可疑致病菌株,对菌株进行聚类分析。结果从44件可疑样品中检出蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus,Bc)17株,对可疑食品中分离的10株蜡样芽胞杆菌进行PFGE分子分型检测,其中7株为相同带型。结论 PFGE图谱佐证了Bc作为本次聚集事件病原的新证据,采集的食品并非被一个单克隆蜡样芽胞杆菌污染,而是存在多种Bc克隆,PFGE可有效应用于暴发事件溯源分析及分子流行病学研究。

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

广东省伤寒沙门菌株的脉冲场凝胶电泳分型研究

目的运用脉冲场凝胶(PFGE)电泳研究广东省伤寒沙门菌的分子流行病学。方法用PFGE对菌株进行分子分型,所得结果用Bionumerisc V4．0软件进行聚类分析。结果来自广东省6个地区的51株伤寒沙门菌,根据电泳图谱分析,可分为45个PFGE型别,菌株间的相似值在38．27％～100．00％,6个地区间没有同源的菌株,同一个地区不同年份也没有同源的菌株,而同一地区同一年份可出现同源的菌株。结论PFGE是一种敏感的研究伤寒沙门菌分子流行病学的基因分型方法。

脉冲场凝胶电泳对不同牛舍中大肠杆菌的分析鉴定

为了研究奶牛场不同牛舍牛群间大肠杆菌的传播情况,采用Andersen-6级空气微生物样品收集器,分别在现代化奶牛场的泌乳牛舍、青年牛舍和犊牛舍收集空气样品,并采集泌乳牛的粪便,分离、鉴定大肠杆菌相似性,运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,进行同源性鉴定分析后,可知从泌乳牛的粪便中分离到的大肠杆菌与从牛舍内空气中分离到的部分大肠杆菌(23%)相似性可达85%以上。结果表明,从泌乳牛的粪便中分离的大肠杆菌能够对环境造成生物污染,在泌乳牛舍中形成环境微生物气溶胶,并在不同牛舍间随空气传播,该结果对奶牛场牛舍环境消毒具有理论指导作用,并具有公共卫生学意义。

脉冲场凝胶电泳技术及其在细菌感染性疾病中的应用

为研究细菌的流行特征、追踪传染源，国内外广泛采用的方法是对相关菌株进行分型，分析菌株间的同源性关系。细菌分型方法分为表型分型和基因分型两种，表型分型主要有根据菌落形态和生化特征等的生物分型、抗菌药物药敏谱分型、血清分型、噬菌体分型，基因分型包括质粒分型、核糖体分型、染色体DNA限制性内切核酸酶图谱分析（REA）、限制片段长度多态性分析（RFLP）、脉冲场凝胶电泳分型（pulsedfield gel electrophoresis，PFGE）、随机引物PCR（AP-PCR）、重复片段PCR分型、多位点序列分型（MLST）等，其中PFGE是分子分型技术的“金标准”，其结果重复性好，分辨率高，易于标准化，被国内外研究者广泛接受。本文就PFGE技术及其在细菌感染性疾病中的应用进行综述。

脉冲场凝胶电泳分子分型追溯霍乱传染源研究

目的了解湖南省2005年霍乱疫情分离菌株与常规监测的外环境和水产品中霍乱弧菌分离株之间的遗传相关性,追溯传染源,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法采用PCR检测霍乱菌毒力基因,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株的分子分型。结果所有菌株均具有CT基因,20株菌的PFGE为1个型。结论20株霍乱弧菌均是产毒株,具有致病性;湖南省从甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与同期流行的O139群霍乱弧菌分型的带型一致,分子流行病学分析提示甲鱼可能是湖南省近年霍乱疫情主要传染来源之一。

脉冲场凝胶电泳技术对一起痢疾暴发的分型研究

目的运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对痢疾暴发进行分析。方法对辽宁省某市暴发痢疾进行血清学鉴定后,进行PFGE分析,观察引起暴发的菌型是否为同一个分子分型。结果7株暴发菌株的PFGE型别相同。结论此次痢疾的暴发流行为同一菌株引起,PFGE可以作为暴发流行中对细菌进行鉴定的分析技术。

奇异变形杆菌的脉冲场凝胶电泳分型研究

[目的]了解2006年度深圳市南山区疑似食物中毒分离的奇异变形杆菌菌株的脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因型,探讨奇异变形杆菌的分布、流行及变异情况。[方法]奇异变形杆菌单个菌落增菌后定量,制备琼脂糖菌体包埋胶块,蛋白酶K等消化处理,限制性内切酶SfiI酶切,制备琼脂糖凝胶,脉冲场凝胶电泳获取菌株指纹图谱,图谱条带进行分子量标化,用统计软件进行聚类分析。[结果]以80﹪相似度为标准,39株奇异变形杆菌被分成24个不同的PFGE基因型.同起疑似食物中毒菌株基因型相似度高,不同起疑似食物中毒菌株基因型有交叉但存在较大差异。[结论]PFGE基因分型技术在确定菌株之间的分子流行病学关系方面是一种有效、稳定的方法,疑似食物中毒样品中分离到的奇异变形杆菌PFGE基因型别呈现多样性,同起食物中毒部分菌株存在着不同程度的亲缘关系,不同起间存在差异。

乳酸杆菌脉冲场凝胶电泳分子分型的条件优化

目的:通过将脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法应用于乳酸杆菌分型研究,以建立乳酸杆菌PFGE分型的最优方法。方法:针对不同内切酶、酶切浓度、酶切时间、脉冲时间等影响PFGE分型结果的重要因素进行优化,使用优化后的条件对乳酸杆菌22株标准菌株进行分型研究。结果:在乳酸杆菌的PFGE分型研究中,选择AscI为内切酶、酶切浓度为30U/150μL、酶切时间为4.5h、脉冲时间为1～15s为PFGE电泳的最优条件,在所分析的22株乳酸杆菌标准菌株中,5种乳酸杆菌的PFGE图谱各不相同,但种内不同株电泳图谱的区别并不稳定。结论:PFGE方法可用于乳酸杆菌的基因分型研究。

用脉冲场凝胶电泳方法对O139霍乱弧菌分型的研究

目的:利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术探讨O139群霍乱弧菌的分子分型方法。方法:用SfiⅠ酶和NotⅠ酶切O139群霍乱弧菌染色体DNA,经脉冲场凝胶电泳进行片段分离。结果:14株O139群霍乱弧菌经SfiⅠ酶切后电泳分离可得一个PFGE型,用NotⅠ酶切电泳可分为2个PFGE型。结论:脉冲场凝胶电泳技术分析O139群霍乱弧菌,分型发现微小差别有助于分析追踪疫情和来源。

食品中单增李斯特菌的血清分型及脉冲场凝胶电泳分型

对进口食品和国内食品中的单增李斯特菌进行血清学分型和分子分型研究,探讨不同来源菌株之间的遗传相关性及不同分型方法之间的联系。对分离的单增李斯特菌进行血清学分型和脉冲场凝胶电泳分型。69株单增李斯特菌分为4种血清型,主要血清型为1/2a(3a)型,脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型分为55种带型,主要型别为GX6A12.CN0018。食品中的单增李斯特菌分子型别呈现多态性,进口食品分离株和国内食品分离株之间无相关性。

脉冲场凝胶电泳技术对一起变形杆菌引起的食物中毒的分型研究

目的:运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对变形杆菌进行分析。方法:对本地区一起由奇异变形杆菌引起的食物中毒进行常规鉴定后,对分离到的菌株进行PFGE分析,观察引起食物中毒的菌型是否为同一菌株引起。结果:此次食物中毒共分离到6株奇异变形杆菌,其中4株肛拭子中分离,2株剩余食品中分离,除一株从肛拭子分离的外,其余5株的PFGE型别相同。结论:此次食物中毒的爆发为同一株奇异变形杆菌引起,PFGE可以作为食物中毒中对细菌进行鉴定的分析技术。