高效阴离子交换色谱-脉冲电化学检测方法和应用

评述了高效阴离子交换色谱和脉冲电化学检测方法。内容包括:色谱柱和流动相;糖和氨基酸在色谱柱上的保留行为;脉冲安培法(PAD)和积分脉冲安培法(IPAD);方法在糖和氨基酸分析中的应用。

高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法分析注射液中的氨基酸

建立了高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测器同时分离并测定注射液中18种常见氨基酸、氨基己酸和牛磺酸含量的方法。注射液用20mg／L的NaN3溶液稀释1000倍，经0．22um尼龙膜过滤后直接进样分析。以一定浓度的NaOH和NaAc溶液为淋洗液，选择合适的梯度淋洗条件，20种氨基酸在AminoPacPA10阴离子交换色谱柱上在30min内很好地分离，并用脉冲安培检测器进行了测定。氨基酸的检出限在0．14～3．81pmol（25uL进样，峰面积定量）。

巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器指纹图谱研究

目的建立巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器(HPAEC-PAD)特征指纹图谱,为制定巴戟天药材质量标准提供参考数据。方法利用HPAEC-PAD,色谱条件为,Hamilton RCX-10(4.1 mm×250 mm,7μm),100 mmol.L-1 NaOH溶液(A)-100 mmol.L-1 NaOH,500 mmol.L-1 NaAc混合溶液(B)流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,柱温为30℃,检测电压0.1V,分析时间为40 min。结果建立了巴戟天药材寡糖化学成分的HPAEC-PAD指纹图谱,并标定出巴戟天药材20个共有峰,其中3个峰经与对照品比对为蔗果三糖、耐斯糖(nystose)、1F-果呋喃糖基耐斯(1F-fructo-furanosylnyslose),经指纹图谱系统解决方案软件(ChromafingerTM)生成共有模式,并进行相似度和主成分分析。不同产地巴戟天药材均含有以上共有峰,但在共有峰的峰高上有差异,并可用于区别巴戟天及其常见混伪品。结论利用该方法建立的巴戟天寡糖类化学成分的指纹图谱特征性和专属性强,且该方法快速、灵敏、可靠,可用于控制巴戟天药材的质量。

阴离子交换色谱积分脉冲安培法测定鱼粉和玉米粉水解液中氨基酸

将高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培直接检测法应用于鱼粉和玉米粉水解液中的氨基酸的分析测定.该方法使用Dionex AminoPac PA10阴离子交换柱为分析柱,控制柱温为35℃,以NaOH和NaAc的强碱性溶液为淋洗液,在合适的梯度条件下,可以实现对17种常见氨基酸的高效分离.在强碱性条件下,获得良好分离的各个氨基酸可在配有金工作电极的电化学检测器上以积分脉冲安培法获得高灵敏度的检测.在优化的测定条件下,该方法对这17种氨基酸的检出限在0.21～3.38 pmol之间;峰面积校正曲线的线性范围为2～3个数量级;5次平行测定的峰面积的相对标准偏差RSD在0.32%～4.7%之间.该方法应用于玉米粉和鱼粉水解液中氨基酸含量的测定,结果良好.对玉米粉和鱼粉水解液标准加入的回收率分别在81.9%～108.0%和90.0%～108.0%之间.

高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法替代微生物检定法测定硫酸新霉素效价的研究

目的建立用于测定硫酸新霉素效价的高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法(HPLC-PAD)。方法建立并验证HPLC-PAD法,测定硫酸新霉素各主要组分含量及相关物质;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定硫酸新霉素杂质谱,结合组分活性研究确定了硫酸新霉素的主要活性组分;采用半制备液相色谱-蒸发光散射检测器串联制备硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波谱手段进行结构确证;采用质量平衡法测定二者的纯度;采用三剂量抗生素微生物检定法测定B、C精制品各自的效价值,推导公式计算出硫酸新霉素的量效转换系数,设计实验进行交互作用考察及实际样品的验证。结果建立的HPLC-PAD方法在分离能力及方法的稳定性上均优于《欧洲药典》(EP)方法,适用于硫酸新霉素各组分的准确定量及有关物质检查;在线膜抑制脱盐技术成功地去除了流动相中的三氟乙酸,对硫酸新霉素的杂质谱进行研究,结合活性研究结果,确定新霉素B和新霉素C为新霉素的主要活性组分;成功制备获得新霉素B、C精制品,通过实验和计算获得了硫酸新霉素的量效转换系数,并通过了验证。结论初步实现了仪器法对微生物生物检定法的替代,基本完成了多组分氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的量效一致性研究工作。

乳制品中乳糖的高效液相色谱-脉冲式安培电化学检测

提出了一种采用高效液相色谱-脉冲式安培电化学检测法测定乳制品中乳糖的方法。样品经乙酸锌和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质、离心、过滤。氨基色谱柱(250 mm(2.0 mm,5(m)分离,乙腈-水(75+25,体积比)作流动相,流速0.2 mL/min,以0.5 mol/L氢氧化锂溶液碱液做柱后衍生,流速0.4 mL/min,分流进入脉冲式安培电化学检测器检测,外标法定量。结果表明,标准工作液在浓度50.0~1000.0 mg/L范围内,峰面积与浓度成良好的线性关系,线性相关系数(0.999,样品在0.1%,5.0%,50.0%添加水平的回收率为79.0%~99.9%,相对标准偏差为1.2%~6.8%(n=8),方法检出限为0.1%(S/N】10)。本法可满足乳制品中乳糖的定量检测需要。

高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量

目的建立高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量。方法采用CarboPacTM PA20阴离子分离柱(3 mm×250 mm)和PA20保护柱(3 mm×50 mm);以去离子水为淋洗液A、200 mmol/L的氢氧化钠溶液为淋洗液B、1 mol/L的醋酸钠为淋洗液C,进行梯度洗脱,流速为0.5 ml/min;积分脉冲安培检测器(金工作电极、pH-Ag/Agcl参比电极);检测器温度30℃;柱温30℃,进样量25μl。结果葡萄糖和门冬氨酸两种成分线性范围分别为0.7952μg/ml^25.4470μg/ml(r=0.9996)和0.1122μg/ml^7.1808μg/ml(r=0.9998);葡萄糖和门冬氨酸两种成分高、中、低3种浓度的回收率分别在98.77%~100.14%之间和98.15%~100.05%之间,相对标准偏差分别为0.6%(n=9)和0.5%(n=9)。结论该法操作简便、专属性强、门冬氨酸和葡萄糖的分离效果好,可用于门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量测定。

LC-PED法测定硫酸依替米星注射液及硫酸依替米星氯化钠注射液中有关物质

目的建立硫酸依替米星注射液及硫酸依替米星氯化钠注射液有关物质检查的液相色谱-脉冲安培电化学（LC—PED）检测方法，并与2015版《中国药典》收载硫酸依替米星有关物质第二法——HPLC-ELSD法进行比较。方法新建立方法以0．2mol／L三氟乙酸（含0．05％五氟丙酸，1．5g／L无水硫酸钠，用NaOH调节pH值至3．5）-乙腈=96：4为流动相，柱温为35℃，流速为1．0mL／min，四电位波形检测，柱后加碱（50％氢氧化钠溶液1→25），流速0．5mL／min。HPLC-ELSD法按照2015版《中国药典》硫酸依替米星有关物质第二法实验。结果新建立方法的LOD（S／N=3）为2ng，LOQ（S／N=10）为6ng；方法精密度良好；依替米星在0．24-451．t8：／mL（r=0．9997）内线性关系良好；与HPLC-ELSD法相比，分离能力更强，灵敏度更高，结果更加准确。结论该方法选择性更好，灵敏度更高，可作为硫酸依替米星注射液与硫酸依替米星氯化钠注射液有关物质检查的常规方法。

芝麻香型白酒酒醅中游离氨基酸分析方法探讨

用离子色谱-积分脉冲安培检测器分离并测定芝麻白酒酒醅中常见氨基酸的方法,以探讨多粮及大曲在发酵过程中蛋白质转化氨基酸,再由氨基酸转化为芝麻香型白酒微量香味成分的反应机理。该方法无需衍生,简便、快速、灵敏度高,适用于酒醅中游离氨基酸的测定。

芝麻香型白酒酒醅中多元醇分析方法探讨

多元醇是形成白酒中甜味的主要来源,用高效离子色谱-积分脉冲安培色谱分析方法,测定芝麻香型白酒酒醅中10种多元醇或糖,以探讨芝麻香型白酒酒醅在发酵过程中多元醇的变化规律和生成机理,有针对性的对发酵过程进行调控,提高芝麻香型白酒的酒体质量。该方法无需衍生、简便、快速、灵敏度高,适用于酒醅中多元醇的测定。

离子色谱法测定青霉胺片的含量及有关物质

目的:建立离子色谱法测定青霉胺片的含量及有关物质。方法:采用Dikma Spursil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为5.3 g无水磷酸二氢钠和0.25 g己烷磺酸钠,加去离子水1000 mL使溶解,用磷酸调节pH至2.85,加乙腈9 mL;流速1.0 mL·min^-1;柱后溶液为21 g·L^-1的氢氧化钠溶液;柱后流速为0.3 mL·min^-1;柱温为30℃;检测器为脉冲积分安培电化学检测器,工作电极为金电极(直径1 mm),检测电位为六电位。结果:青霉胺质量浓度在0.04988~0.1995 mg·mL^-1范围内线性关系良好,回收率范围为98.4%~101.5%,含量结果为97.6%~101.5%;有关物质测定,青霉胺质量浓度在3.118~49.88μg·mL^-1范围内线性关系良好,青霉胺二硫化物质量浓度在1.616~19.39μg·mL^-1范围内线性关系良好;青霉胺及青霉胺二硫化物检测下限均为0.02μg,青霉胺二硫化物含量为0.4%~0.8%,最大单个杂质含量为0.9%~2.9%,其他杂质总量为2.4%~7.3%;各杂质与青霉胺峰均能完全分离。结论:该方法准确灵敏,可用于青霉胺片的质量控制。

硫酸依替米星注射液中有关物质测定方法的比较

目的系统比较电喷雾检测器、蒸发光散射检测器、脉冲安培生化学检测器3种方法测定依替米星注射液的有关物质,建立有关物质检测方法。方法建立的HPLC-CAD方法以0.2 mol·L^(-1)三氟乙酸-甲醇(95∶5)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,雾化温度30℃,气压0.24 MPa,HPLC-ELSD和HPLC-PAD方法采用《中国药典》2015年版条件。结果 HPLC-CAD方法与HPLC-ELSD方法相比,分离度和灵敏度更高;与HPLC-PAD法比较,杂质测定结果更准确。结论建立的HPLC-CAD法分离能力强,检测出的杂质更多,可作为硫酸依替米星注射液有关物质测定的常规方法。

高效离子色谱法测定氨基葡萄糖类化合物

目的：建立快捷、灵敏检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐的离子色谱法。方法：采用离子色谱-积分脉冲安培检测法检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量,以NaOH淋洗液梯度淋洗,在CarboPac PA10高效阴离子交换柱（HPAEC）上实现分离,用Au工作电极、Ag/AgCl参比电极的脉冲安培检测器测定N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐。结果：N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐在0.02～20 mg/L范围内线性相关良好,相关系数r2分别为0.9999和0.9995。进样25μl、S/N=3时,方法检出限分别为0.005 mg/L和0.01 mg/L。精密性实验相对标准偏差为0.35%和0.76%;两种糖的加标回收率均在95.3%～101.6%之间。结论：建立的离子色谱-脉冲安培检测法检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐,方法可靠、无需衍生、简便快捷、分离效果好、灵敏度高,可以在15 min内完成定量分析。

离子色谱法测定硫酸庆大霉素片的C组分及有关物质

目的:建立离子色谱法测定硫酸庆大霉素片的C组分含量及有关物质。方法:采用ThermoAcclaim^(TM) AmG C_(18)(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,流动相为0.7%三氟乙酸(含0.025%五氟丙酸,50%氢氧化钠4 mL,用50%氢氧化钠溶液调节pH至2.6)-乙腈(96.5∶3.5);流速为1.0 mL·min^(-1),柱后溶液为2%的氢氧化钠溶液,柱后流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃;检测器为脉冲安培电化学检测器,工作电极为金电极(直径3 mm),检测电位为四电位。结果:硫酸庆大霉素片C_1、C_(1a)、C_2、C_(2a)分别在1.328～132.8、1.606～160.6、7.378～737.8、1.276～127.6μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,回收率范围为98.2%～101.8%;有关物质测定,西索米星在2.632～52.64μg·mL^(-1)、小诺霉素在2.006～25.07μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,西索米星检测下限为0.01μg,小诺霉素检测下限为0.02μg;各杂质与硫酸庆大霉素各C组分色谱峰间均能完全分离。结论:该方法准确灵敏,可用于硫酸庆大霉素片的质量控制。

注射用盐酸大观霉素有关物质两种测定方法的比较

目的分析比较注射用盐酸大观霉素有关物质测定的高效液相色谱脉冲安培检测法(HPLC-PAD)和高效液相色谱蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD),并采用两种方法测定了31批次样品。方法两法色谱柱均为Apollo C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相均为0.1 mol·L^(-1)三氟乙酸溶液,柱温均为30℃,进样量均为20μL。PAD检测:检测电极为金电极(3 mm),Ag-AgCl参比电极,钛合金对电极,积分安培检测器,四波形检测电位。ELSD检测:漂移管温度110℃,载气流速2.6 L·min^(-1),增益1。结果两法专属性一致,检出有关物质种类和个数一致;PAD检出限为2.4 ng,ELSD检出限为72.8 ng(以S/N=3计);PAD为直接线性关系,质量浓度范围为0.15~150μg·mL^(-1);ELSD为双对数线性关系,浓度范围为17~170μg·mL^(-1)。两法测定31批次样品有关物质,杂质D和杂质E结果一致,杂质A、4R-双氢大观霉素和总杂差异较大;PAD中杂质A采用校正因子校正后,杂质A和总杂结果均与ELSD一致。结论两种方法均可有效检出有关物质,达到控制大观霉素有关物质的目的。HPLC-PAD需对杂质A和4R-双氢大观霉素进行响应因子校正,ELSD需采用双对数线性回归。

两种方法测定硫酸庆大霉素组分和有关物质的比较

目的采用《中国药典》2010年版和BP2012中收载的两种测定方法,测定硫酸庆大霉素中的组分及其有关物质并进行比较。方法采用两国药典方法分别测定硫酸庆大霉素及其注射液中的组分和有关物质,并进行方法专属性、灵敏度、溶液稳定性和耐用性的比较。结果 BP2012中收载的离子色谱法(HPLC-IPAD)与《中国药典》2010年版中收载的HPLC-ELSD法所测定组分的结果一致;HPLC-IPAD法虽然比较灵敏,但HPLC-ELSD的进样量更大,可检测到更多的有关物质。结论《中国药典》中的HPLC-ELSD法简便、实用,可用于硫酸庆大霉素原料及其制剂的质量控制。

离子色谱法测定硫酸庆大霉素颗粒中的C组分

目的采用离子色谱法测定硫酸庆大霉素颗粒中C组分的含量。方法采用Thermo AcclaimTMAm G C18色谱柱(150mm×4. 6 mm,3μm),流动相为0. 7%三氟乙酸(含0. 025%五氟丙酸、4 m L 50%氢氧化钠,用50%氢氧化钠调p H2. 6)-乙腈(96. 5∶3. 5),流速1. 0 m L·min-1,柱后溶液为2%氢氧化钠,柱后流速0. 3 m L·min-1,柱温35℃,检测器为脉冲安培电化学检测器,工作电极为金电极(直径3 mm),检测电位为四电位。结果硫酸庆大霉素颗粒C1、C1a、C2、C2a组分的线性范围分别为1. 328~132. 8、1. 606~160. 6、7. 378~737. 8、1. 276~127. 6μg·m L-1,回收率为98. 1%~101. 9%。结论所用方法准确,可用于硫酸庆大霉素颗粒的质量控制。

硫酸西索米星注射液有关物质分析方法的比较

目的建立HPLC-PAD测定硫酸西索米星注射液有关物质的方法并与法定方法进行比较。方法采用IonPac AMG C_(18)(4.0 mm×150 mm,3μm)色谱柱,以0.1 mol·L^(-1)三氟乙酸(含体积分数0.025%五氟丙酸,不含碳酸盐的质量浓度50%氢氧化钠溶液5 mL,用质量浓度50%氢氧化钠溶液调节pH值至2.3)-乙腈(95∶5)为流动相,流速0.7 mL·min^(-1);柱后碱液为0.76 mol·L^(-1)氢氧化钠,流速0.35 mL·min^(-1);柱温30℃,用脉冲安培检测器检测,检测池温度35℃,工作电极金电极(直径3 mm),参比电极Ag/AgCl电极,检测电位为四电位,测定硫酸西索米星有关物质,并将测定结果与法定方法测定结果进行比较。结果西索米星峰能与庆大霉素C_(1a)峰和奈替米星峰完全分开,其他各杂质峰之间能有效分离,空白无干扰,方法的LOD(S/N=3)为2 ng,LOQ(S/N=10)为6 ng,进样精密度RSD(n=6)为0.9%。法定方法与HPLC-PAD法测定得到的硫酸西索米星注射液总杂(%)、最大单杂(%)和含量(%)进行配对样品的t检验,得到P=0.034、P=0.364和P=0.605。结论与法定方法比较,该法专属性好,灵敏度高,精密度好,测定结果准确可靠,可用于硫酸西索米星注射液有关物质测定。

离子色谱法测定硫酸阿米卡星及其制剂的有关物质

目的:建立离子色谱法测定硫酸阿米卡星及其制剂的有关物质。方法:采用YMC ODS-Aq C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为1000 mL无二氧化碳的去离子水中加20 mL三氟乙酸,300μL五氟丙酸,300μL七氟丁酸,50%(v/v)氢氧化钠溶液8 mL,用50%(v/v)氢氧化钠溶液调节pH为3.3,最后加乙腈10 mL;流速为1.0 mL·min^(-1);柱后溶液为42 mL·L^(-1)的50%(v/v)氢氧化钠溶液;柱后流速为0.3 mL·min^(-1);柱温为35℃;检测器为脉冲安培电化学检测器,工作电极为金电极(直径3 mm),检测电位为糖四电位。结果:阿米卡星质量浓度在0.4985~9.9691μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,阿米卡星检测限为2.0 ng;各杂质与阿米卡星峰均能完全分离。8批次硫酸阿米卡星原料总杂含量为1.2%~1.7%,77批次硫酸阿米卡星注射液总杂含量为1.1%~2.3%;10批次注射用硫酸阿米卡星总杂含量为1.2%~2.2%。结论:该方法准确、灵敏,可用于阿米阿星及其制剂的质量控制。

氨基糖苷类抗生素组分控制进展

笔者先概括性介绍目前临床常用氨基糖苷类抗生素的来源、分类、化学结构、组分多样性及原研单位等基本信息,然后回顾氨基糖苷类抗生素组分分析技术发展历程,通过对比分析,讨论常见氨基糖苷类抗生素组分分析方法的优缺点,分析液相色谱脉冲安培电化学检测方法在氨基糖苷类抗生素组分分析应用中优势,最后介绍与氨基糖苷类抗生素组分分析相关的新技术和新理念,探讨其未来的发展方向。