柑橘脉突病毒基因组全长cDNA克隆及其侵染性鉴定

【目的】构建柑橘脉突病毒(citrus vein enation virus,CVEV)侵染性克隆,为从分子水平解析其致病机理打下基础。【方法】利用SMARTer®RACE(rapid amplification of cDNA ends)试剂盒对CVEV的5′序列进行RACE,并依据序列分析结果及CVEV分离株VE-1保守序列,设计CVEV基因组全长cDNA扩增引物。以CVEV毒源植株的总RNA为模板,通过EV25-F/EV5983-R引物扩增CVEV基因组全长cDNA。利用In-Fusion重组连接线性化pXT1和CVEV全长cDNA。通过菌液PCR及测序分析鉴定CVEV基因组全长cDNA克隆。通过农杆菌介导的真空浸润接种摩洛哥酸橙(Citrus aurantium)、邓肯葡萄柚(C.paradisi)、尤力克柠檬(C.limon)、枳柚(C.paradisi×Poncirus trifoliata)、Rusk枳橙(P.trifoliata×C.sinensis)、枣阳小叶枳(P.trifoliata),进一步通过RT-PCR检测、症状观察鉴定所构建CVEV全长cDNA克隆的侵染性。【结果】建立了CVEV的基因组全长RT-PCR扩增体系,获得基于双元载体pXT1的CVEV基因组全长cDNA克隆10个。随机选取的6个全长cDNA克隆CVEV1901—CVEV1906的序列一致性为99.35%。其中,CVEV1901基因组全长5983 nt,由5个开放阅读框、5′端207 nt和3′端198 nt的两个非翻译区、以及ORF2和ORF3之间122 nt的基因间隔区组成。序列分析结果显示,CVEV1901与浙江分离株XZG及四川SM分离株的序列一致性分别为99.98%和99.11%;与西班牙VE-1分离株、美国加州VE701分离株和日本IBK分离株基因组序列一致性在96.89%—98.61%;与同属中豌豆耳突花叶病毒(pea enation mosaic virus)和紫花苜蓿耳突病毒(alfalfa enamovirus)的序列一致性约90%。通过农杆菌介导的真空浸润将CVEV1901接种至6个不同的柑橘品种,接种后120 d的RT-PCR检测结果表明摩洛哥酸橙、邓肯葡萄柚、尤力克柠檬、枳柚、Rusk枳橙和枣阳小叶枳阳性植株/接种植株(阳性率)分别为16/17(94.12%)、12/14(85.71%)、16/21(76.19%)、15/19(78.95%)、13/14(92.86%)和0/18(0)。其中,部分摩洛哥酸橙出现典型CVEV侵染症状,叶片侧脉和支脉产生耳状小突起,叶背有相应的凹陷;部分邓肯葡萄柚和尤力克柠檬出现叶片皱缩现象。【结论】建立了CVEV的基因组全长RT-PCR扩增体系,获得了CVEV基因组全长cDNA侵染性克隆,通过农杆菌介导的真空浸润接种可引起摩洛哥酸橙、邓肯葡萄柚和尤力克柠檬的CVEV侵染症状。

浙江黄岩柑桔脉突病毒病的发生与生物学鉴定

在浙江黄岩桔区一些商品化柑桔品种和杂种如本地早、早桔、木曼桔、少核本地早、柑、温州蜜柑、朱红、乳桔、北京柠檬、华盛顿脐橙和红玉柑等的田间植株的叶片上观察到由柑桔脉突病毒（ＣＶＥＶ）引起有特征性的叶脉突起症状。通过兰卜来檬、墨西哥来檬、巴西酸橙、代代酸橙、粗柠檬和本地早等指示植物实生苗的嫁接接种，以及用无毒株心系的伏尔默柠檬芽高接到田间病树等方法，在上述品种的植株上出现柑桔脉突病毒症状。生物鉴定的潜育期较长，一般需６～８周以上。

柑桔脉突病研究进展

柑桔脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV)引起的柑桔脉突病是一种危险性柑桔病害。该病可侵染大多数柑桔种类,且对以粗柠檬、兰普来檬等做砧木的柑桔幼苗影响较大,造成植株树势衰弱,生长减缓。为增进对该病的认识,根据国内外的研究报道,对CVEV的分类地位、生物学和分子生物学特性进行了总结,并介绍了CVEV的检测技术和防治方法。

福建特有树种突脉青冈木材结构特征

为科学识别鉴定和合理利用福建特有树种突脉青冈(Quercus elevaticostata)木材,借助连续变倍体视显微镜、生物数码显微镜和扫描电子显微镜观察突脉青冈木材宏观和微观结构特征,测定并分析木材解剖定量特征。结果表明,突脉青冈木材心边材区别不明显,散孔材,单管孔,管孔呈溪流状径向排列,管间纹孔互列;导管组织比量为5.06%,平均管孔密度为3.43个/mm^(2),管孔平均弦向直径为172.83μm;导管分子平均长度为619.31μm,长宽比为3.67。木纤维组织比量为53.96%,细胞平均长度为1381.4μm,长宽比为57.52,壁腔比为1.13。轴向薄壁组织发达,组织比量为23.27%,为离管带状,排列规整,宽1~7个细胞;大多数结晶体出现在轴向薄壁细胞中。木射线组织比量为17.70%,非叠生;为同形单列木射线和宽木射线,其中同形单列木射线高3~23个细胞,宽木射线高许多细胞,常超出切片范围,宽木射线平均宽度为371.61μm;导管-射线间纹孔式主要为刻痕状,少数大圆形;具环管管胞,胞间道缺如。

柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用

为了快速、灵敏地检测柑橘脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV),通过设计特异性引物(EVq F4/EVq R4),优化反应条件,建立了CVEV的实时荧光定量RT-PCR检测体系。该方法特异性良好;检测灵敏度比常规RT-PCR高100倍;标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992,扩增效率101.8%;检测组内和组间变异系数均小于2.85%,重复性较好。利用所建立的实时荧光定量方法对柑橘植株进行检测发现,‘代代酸橙’和‘象山红’植株中CVEV分布不均匀,其中根部病毒滴度最高,分别为162.52和45.32拷贝·ng^(-1) RNA,皮及叶部病毒滴度相对较低。

突脉秋海棠组织培养及快速繁殖研究

通过对突脉秋海棠(Begonia retinervia)叶片的离体培养和快速繁殖实验,探讨突脉秋海棠愈伤组织诱导,及不定芽的分化、增殖和生根的最佳培养条件。结果表明:以突脉秋海棠叶片为外植体,愈伤诱导率最高可达87.92%;适于突脉秋海棠叶片愈伤组织诱导的培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1;适于愈伤组织分化成不定芽及不定芽继代的培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1,诱导分化率为89.32%,20 d继代倍数达6倍以上;适于生根的培养基为1/2MS+NAA 0.8mg·L-1+AC 0.1%,生根率达95.00%。研究确定了突脉秋海棠的组织培养配方并初步建立起一套较为完善的快速繁殖技术体系。

突脉青冈造林效果与土壤特征研究

对福建省屏南县故峰林场的突脉青冈造林试验研究，探讨不同处理的突脉青冈林分早期的生长效果及其林地土壤各性状的变化趋势．结果表明：突脉青冈适宜栽植于立地条件较好、中下坡位置，最佳造林密度应在３０００～３６００株／ｈｍ２，造林技术宜采用带宿土造林，早期生长对林地土壤的营养元素的增加效果显著，不同处理的林分均能提高林地的水稳性团聚体，改善土壤的物理性状和化学性状，提高了土壤肥力。

突脉青冈林分水文效应研究

对突脉青冈林分结构各层次持水能力及其林地土壤的持水能力和渗透性能的分析，结果表明：突脉青冈纯林中，密度为３０００株ｈｍ－２的林分林冠层持水量最大为９．４０４ｔｈｍ－２；若以林分的持水能力即地上部分与土壤的持水能力总量为指标，以４０５０株ｈｍ－２的林分为最好，总持水量最大，为１４９．５７２ｔｈｍ－２．

突脉青冈木材物理力学性质的研究

本文通过对突脉青冈木材物理力学性质进行测定和分析，结果表明：突脉青冈木材的密度和综合强度中等、干缩小，与同属其它树种木材有较大的差别，其木材具有广泛的用途．

亚热带山地突脉青冈群落能量的研究

对突脉青冈（Ｃｙｃｌｏｂａｌａｎｏｐｓｉｓｅｌｅｖａｔｉｃｏｓｔａｔａ）群落植物体各组分的热值、群落能量现存量、能量年净固定量和太阳能转化效率的研究结果表明：该群落植物体各组分样品的干重热值具有一定差异，树皮热值最高，细根热值最低。突脉青同群落的能量现存量８５２０５８ｋＪｍ－２，其中地上部分７４１４１６ｋＪｍ－２，占总量的８７．０１％；地下部分１１０６４２ｋＪｍ－２，占１２．９９％。突脉青冈１９９６年群落能量净固定量为２８２７３ｋＪｍ－２，林地太阳光有效辐射能转化效率１．３５％。

闽东山区不同密度突脉青冈人工林土壤肥力的分形研究

针对闽东山区造林树种针叶化且连栽引起生产力下降和地力退化问题,开展乡土阔叶树种突脉青冈密度选择试验。运用分形理论对造林密度分别为2400、3000、3600和4050株/hm2的突脉青冈人工林的土壤结构和理化性质进行研究,以荒山为对照。结果显示:突脉青冈土壤分形维数与土壤水稳性团聚体、团聚体含量、结构体破坏率及土壤理化性质呈显著回归关系,分形维数与>0.25 mm土壤颗粒含量线性负相关,与结构体破坏率呈线性正相关;不同密度的突脉青冈土壤团粒结构的分形维数大小顺序表现为荒山>4050株/hm2>3600株/hm2>2400株/hm2>3000株/hm2。上述表明:分形维数可用于表征土壤肥力大小,突脉青冈造林密度为3000株/hm2时的土壤结构、稳定性及肥力最好,是最佳造林密度;运用分形理论研究林地肥力状况为林地质量评价提供了一种新思路。

突脉青冈纤维特征和化学成分研究

对突脉青冈纤维形态和化学成分的测定和分析，揭示了突脉青冈纤维形态和化学成分的特征及其纤维形态随树龄的变化规律，结果表明：突脉青冈木材可作为林产工业的纤维材料使用。

黔中贵定阳宝山临济禅宗突空系法脉传承揭谜

黔中贵定阳宝山早在明代即为西南佛教名山,山中临济禅宗法脉源远流长。然而,长期以来学界一直没有厘清阳宝山临济禅宗法脉到底属于临济中的何支何派,致使阳宝山塔林诸多塔铭碑文无法破解。经过艰苦考证,发现山中有一支临济禅宗法脉属于突空智板一系,明万历年间白云大师来阳宝山上接湘西突空一系,下开阳宝白云二十三字辈,自成阳宝山突空系一支临济禅宗法脉传灯系统,从明季开始,直至民国末年,影响深远。三百年来,其法脉之流长,人数之众多,体系之复杂,塔林之盛大,在贵州乃至中国禅宗佛教史上都是极为罕见的。

突脉青冈群落乔木层优势种群生态位研究

采用统计学、数学方法对突脉青冈群落乔木层生态位状况进行定量分析,揭示突脉青冈群落优势种群生态位特征,以恢复其退化生态系统的树种结构和生态功能。结果表明,突脉青冈和米槠生态位较宽,其生态位值分别为0.96和0.83,群落内其它树种的生态位宽度在0.2-0.4之间。生态位相似比例和生态位重叠值表明生态位宽度较大的种,在群落中与其他种生态位相似比例和生态位重叠值较高。说明突脉青冈和米槠2个树种是群落中的优势种群,能更好地适应当地环境,充分利用群落中的资源。该群落继续向前发展,可能发展成为突脉青冈和米槠占优势的顶级群落。

突脉青冈人工林合理密度的研究

采用平均标准本法和样方收获法，对8年生突脉青冈各密度林分的生物量及其分配情况进行了研究。结果表明：以3000株／hm2林分的生物量最高，达68．32t／hm2；该密度的林分营养空间分布均比较合理，有利于林分的生长。

突脉青冈群落学结构特征研究

突脉青冈是珍贵的用材树种之一．本文通过应用点——四分法进行样地的群落调查，测定了群落８种主要树种的重要值，并对群落的结构和动态进行了分析和研究．研究结果表明突脉青冈群落比较稳定。

突脉金丝桃的花器官发生及其系统学意义

利用扫描电镜(SEM)观察了突脉金丝桃(Hypericum przewalskii)(金丝桃科)的花部器官发生发育过程。结果表明,突脉金丝桃2枚苞片原基首先发生,花原基在苞片原基的包裹中完成发育。在苞片原基发生后,5枚萼片原基沿2/5圆周依次发生。萼片原基发生近完成时,5枚雄蕊—花瓣共同原基在萼片原基之间的角隅处近同时发生,此后,雄蕊—花瓣共同原基下部向外伸展形成花瓣原基,上部向上凸起形成与花瓣原基相对的雄蕊原基,之后雄蕊原基由内向外依次分化发育产生次生雄蕊原基,随着次生雄蕊原基的发育和数目的增多,形成了5束雄蕊。次生雄蕊原基发生的同时,5枚心皮原基近同时发生。突脉金丝桃雄蕊束的发生方式表明,金丝桃属的雄蕊束可能起源于5基数的单轮雄蕊。金丝桃科与藤黄科植物花瓣及雄蕊原基发生方式的显著不同,支持了APGⅢ系统将金丝桃亚科从藤黄科中独立为金丝桃科的观点。

突脉青冈栽培生物学的初步研究

室内发芽和场圃播种育苗试验结果表明，突脉静冈宜于１２月中旬采种．育苗试验结果表明，播种时间对苗高生长没有显著影响，切根处理对苗高生长、主根数、侧根数及其鲜重均有显著或一定水平的影响，月平均气温和月积温是苗高生长的主导因子．造林试验结果表明，苗木不同处理对造林成活率、幼树高生长、地径生长、冠幅生长、主根分布深度及侧根数均有较显著或显著或极显著的影响，其中均以带宿土苗木造林的为最大；幼树高径生长均属全期生长型，一年有两次生长高峰，月平均气温、月降雨量和月积温是幼树生长的主导气象因子，２月上旬平均气温升到８℃以上树液就开始流动，１２月上旬平均气温降到８℃以下树液就停止流动．