中国急性弛缓性麻痹(AFP)病例中脊髓灰质炎病毒疫苗株VP1区基因变异的研究

为研究中国急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (简称脊灰 )病毒分离株的分子特征 ,为中国继续维持“无脊灰野毒状态”提供理论依据 ,对 2 0 0 2年所有省级疾病预防控制中心送检的脊灰分离株 ,用PCR RFLP法及ELISA法进行型内鉴定。用PCR RFLP法筛查出与疫苗株相比有异常酶切图谱的毒株共 2 4株 ,其中Ⅰ型毒株 1株 ,Ⅱ型毒株 2 1株 ,Ⅲ型毒株 2株 ;用ELISA法筛查出与疫苗株相比有不同的抗原抗体反应的毒株共 2 2株 ,其中Ⅰ型毒株 7株 ,Ⅱ型毒株 4株 ,Ⅲ型毒株 1 1株 ,在 7株Ⅰ型毒株中有 3株为非疫苗类似株 (NSL) ,其余为双反应毒株 (DRV)。随后对这 4 6株毒株进行了全VP1区的基因序列分析。结果表明 :2 0 0 2年脊灰分离株都是疫苗株或疫苗衍生株 ,没有发现野毒株 ,中国继续保持着“无脊灰野毒状态” ;口服减毒活疫苗 (OPV)株与其它野毒株在稳定性性质方面是类似的 ,即通常是不稳定的 ,在人体肠道内有很强的选择性 ;在人体肠道内 ,病毒复制产生的基因变异导致毒力升高 ,是引起疫苗相关麻痹病例 (VAPP)的重要原因 ,但宿主本身的因素也有很大的作用 ;在局部地区有疫苗株的循环或脊灰疫苗衍生株 (VDPV)的存在 ;最终消除疫苗株引起的AFP病例可能还需要脊灰灭活疫苗(IPV)的介入。

2012-2015年江西省脊髓灰质炎疫苗相关株急性弛缓性麻痹病例分析

目的了解江西省急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监测脊髓灰质炎(脊灰)疫苗株的状况,分析江西省近年来人群中脊灰病毒的变化趋势。方法对江西省2012-2015年分离出脊灰疫苗株的AFP病例进行流行病学和病原学分析。结果 2015年脊灰阳性率明显高于前3年;2013年出现1例VDPV病例,其型别为Ⅱ+Ⅲ混合型毒株,在连续采集的15份粪便标本中,主要分离得到Ⅲ型为VDPV,Ⅱ型有部分VDPV。结论 2012-2014年每年的疫苗相关株分离率较平稳,没有明显的优势株,对脊灰病毒在人群中的变化趋势进行分析,可以预测脊灰疫苗衍生株(VDPVs)的流行和发生,可为提前采取防控措施提供依据,消灭脊灰过程中,尽早实现使用脊灰灭活疫苗、直至停止使用脊灰疫苗很有必要。

江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病原学监测分析

目的通过对江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病原学监测,为证实江西省消灭脊髓灰质炎提供准确的、可靠的科学依据。方法采用L20B、RD细胞继续脊髓灰质炎病毒分离,脊髓灰质炎毒株通过ITD方法进行型内鉴定,若为复合型毒株再经过血清中和实验分单型后,送至国家脊髓灰质炎实验室进行序列测定。结果 2013年至2015年共接收1058份AFP病例粪便标本,其中有28份分离出脊髓灰质炎病毒,83份分离出非脊髓灰质炎肠道病毒,分离率分别为2.65%,7.84%;接收AFP病例接触者粪便标本57份,分离出脊灰病毒2份和非脊灰肠道病毒7份,平均分离率分别为3.51%,12.28%;在2013年分离出一例疫苗衍生株病例,未发现脊灰野病毒。结论江西省脊髓灰质炎病毒学监测处于较高的水平,江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病中未发现脊灰野病毒,但检出VDPV,提示我们要警惕疫苗株的变异,应继续加强监测。

湖南省1例免疫缺陷疫苗衍生脊髓灰质炎病毒病例的流行病学调查和处置

目的分析湖南省首例患原发性免疫缺陷的疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Immunodeficiency-associated Vaccine-derived Poliovirus,i VDPV)病例,探讨控制策略。方法对该i VDPV病例进行流行病学调查,检测脊灰抗体,测定免疫功能,并定期采集粪便标本分离病毒,对病例所在地及医院进行急性弛缓性麻痹病例主动搜索,对病例所在地进行接种率调查和人群抗体水平检测,开展风险评估。结果病例最终分类诊断为i VDPV病例,当地适龄儿童常规免疫接种率较高,人群具有较高的脊灰抗体水平,粪便标本未分离到疫苗衍生脊灰病毒(VDPV)。在病例所在地及相邻地区开展脊灰疫苗查漏补种。结论病毒未在当地造成循环,高水平的免疫屏障、高效率的监测系统、及时有效的应急处置是防范野病毒输入和VDPV传播的保障。但随着全球消灭脊灰的进展,应对患免疫缺陷的儿童采取针对性的策略和研究。

2名健康儿童检出脊髓灰质炎疫苗衍生病毒的调查

[目的]评价上海市徐汇区2名健康儿童检出脊髓灰质炎疫苗衍生病毒(VDPV)的调查处置措施。[方法]分别对2名病毒携带者进行个案调查、粪便消毒处置、测定免疫功能,采集粪便标本分离病毒。对密切接触者和周围健康儿童粪便标本进行带毒调查、儿童脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)接种率调查、OPV查漏补种及医疗机构急性弛缓性麻痹(AFP)病例主动搜索。[结果]2名健康儿童分别检出Ⅲ型VDPV和脊灰疫苗高变异株病毒。当地儿童OPV免疫接种率较高,粪便标本均未检出阳性病毒。未发现VDPV病例。[结论]VDPV未在当地造成循环。

实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应脊灰型内鉴定新方法在脊灰实验室的应用

目的在河北省脊髓灰质炎(脊灰)实验室首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)对脊灰病毒(PV)进行鉴定,并对该方法进行评估,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法做准备。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对河北省既往分离的PV和WHO发放的PV株进行型内鉴定(intratypic differentiation,ITD)和疫苗衍生PV(vaccine-derived PV,VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果不能完全相符,有2株Ⅱ型脊灰病毒被错判为NSL,假阳性率为6.9%(2/29)。结论 Real time PCR脊灰型内鉴定方法可以在河北省脊灰实验室用于脊灰病毒的常规监测。

脊灰病毒分离和鉴定新检测流程的应用

目的缩短检测脊灰病毒的时限,及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV)。方法对河北省2013年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者的粪便标本用L20B和RD两种细胞进行病毒分离,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,rRTPCR)对分离到的L20B阳性分离物进行型内鉴定和血清型鉴定。结果从送检的334例AFP病例及接触者粪便标本中检测出L20B阳性分离物26株,用real-time PCR法进行了病毒血清型鉴定和型内鉴定,共监测到脊灰疫苗类似株(sabin-like,SL)19株,其中Ⅰ型9株、Ⅱ型1株、Ⅲ型6株、混合型3株;将混合型进行单型分型后共得24株,进行VP1区核苷酸序列测定,发生高变异的两株出现在Ⅰ型,均为6个核苷酸变异。结论 2013年分离到的脊灰疫苗病毒有部分变异,没有发现疫苗衍生脊灰病毒。