在我国流行的脊髓灰质炎中发现脊灰病毒Ⅰ型自然重组株

消灭脊灰是预防医学的重要课题,1991年时我国仍是世界上脊灰流行区之一,其主要病原为Ⅰ型脊髓灰质炎病毒(PV1),为弄清PV在我国的流行情况,我们组织全国主要省区防疫站协作自选进行“我国PV1野毒株的分子流行病学研究”课题。地方同志负责脊灰病人粪便样品的采集、病毒的分离和部分病毒血清型检定,本实验室负责从各地的PV分离株中用RT—PCR和打点杂交方法区别疫苗相关株或野毒株。

1例重组脊灰病毒引起的AFP病例调查

目的 对贵港市2006年7月报告的1例疫苗重组脊髓灰质炎（脊灰）病毒引起的急性弛缓性麻痹（AFP）病例进行流行病学词查，为维持无脊灰状态提供依据。方法 按照卫生部下发的《高危和聚集性AFP病例词查指南》进行。结果AFP病例粪便标本分离出脊灰Ⅲ型病毒，国家脊灰实验室型内鉴定为“VP1区4个核苷酸变异”，属疫苗重组脊灰病毒（VRPV），患儿发病60天后残留麻痹，“零剂次”免疫，患儿所在村屯0-11岁儿童免疫水平较低，5名密切接触儿童的粪便标本未分离出脊灰病毒。结论 本例为VRPV引起的脊灰临床符合病例，未引起地区流行或循环。虽VRPV差异〈1％，但毒力有所增强，仍可在“零剂次”免疫儿童中引起AFP，出现脊灰症状。提高OPV接种率是保护儿童免受脊灰野病毒、疫苗衍生脊灰病毒、VRPV的侵袭，阻止其流行或循环的有效措惑。

中和法与反向被动血凝法用于脊灰病毒定型的比较

脊灰病毒的定型通常采用中和法,但此方法操作繁琐,影响因素多,实验时间长。为了寻找一种特异、简便、快速的定型方法,我们用近年来由中国医科院基础所推出的反向被动血凝法(简称RP-HA),对本省1986年～1993年5月脊灰疑似病人粪便标本中分离的阳性标本与用中和法作了比较,用RPHA法对阳性标本不同的细胞传代数做了定型。现将结果报导如下:

温冷细胞培养快速分离脊灰病毒和分子生物学型内鉴别研究

研制温冷培养一代体外存活20天的RD(来源于人横纹肌瘤细胞)细胞株和单层细胞管备用，快速提供AFP，密切接触者粪便标本中和生活饮水中脊灰病毒分离鉴定。采用高新分子生物学技术，改变传统法用：(1)RT-PCR(逆转录一聚合酶链)反应和组合单克隆抗体直接检测AFP(急性驰缓性麻痹)

经灭活脊髓灰质炎病毒免疫后再服减毒脊灰病毒的过程中有毒脊灰病毒转化的排泄情况

为研究先用EIPV(灭活脊髓灰质炎病毒)免疫后,对再接触活的病毒疫苗者大便中转化病毒的排泄是否有影响,我们进行了两组实验。第一组选用2个月,2～4个月及2、4个月和18或20个月的婴幼儿;分别服1剂、2剂和3剂以上OPV(减毒脊灰质病毒)后,再服OPV进行实验。第二组选择的实验对象同上。

疫苗性脊灰病毒的排泄量可确定印度口服疫苗儿童血清中和抗体应答的滴度

口服脊灰疫苗(OPV)在肠道内的复制(即疫苗接种)与血清阳转和抗脊髓灰质炎的保护作用有关。作者用定量聚合酶链反应分析法测定300名 6~11 月龄血清阴性婴儿和218名1~4岁血清阴性幼儿,在接受单价或双价OPV后 7 d他们的疫苗排泄情况。发现排苗的数量与疫苗接种后21、28 d测得的血清中和抗体应答量相关。这提示,对OPV的免疫应答是连续性的,而不是全或无表象,免疫应答取决于疫苗病毒的有效复制。

1987—1991年徐州市脊灰病毒分离和血清抗体水平的实验分析

1987—1991年,本实验室从567份疑似脊灰患者的粪便中共分离到207株病毒,病毒分离阳性率为36.51％,经脊灰标准免疫血清鉴定,91.79％为脊灰病毒。其中1989年脊灰病毒流行,分离到Ⅰ型病毒占82.60％,在其他四年中,以分离的Ⅰ型病毒为主。 1989年和1991年,我们两次测得4岁以下儿童血清中和抗体和GMT,1991年与1989年相比,Ⅰ型有明显改善,Ⅱ、Ⅲ型抗体变化不大。

之前给予口服疫苗的儿童单剂灭活脊灰疫苗接种对其抗脊灰病毒肠道免疫的影响

背景：口服脊髓灰质炎病毒疫苗（OPV）诱发的肠道免疫并不完善,会随着时间的推移而减弱,而OPV也可以通过接种免疫的儿童进行传播。灭活脊髓灰质炎病毒疫苗（IPV）不引起肠道黏膜的免疫应答,但可以提高儿童通过之前接种OPV诱发的黏膜免疫的保护力。我们旨在评估IPV对于已接种OPV的儿童的肠道免疫的影响。

改良的脊灰病毒可杀死脑瘤细胞

科学家们目前利用一种具有杀伤力的减毒病毒来杀死更致命的强敌——恶性脑肿瘤。在对小鼠的研究中,Duke大学的微生物学家Mattias M Gromeier及其同事对活的脊髓灰质炎病毒进行改良,以诱导该病毒攻击和消灭小鼠大脑中的肿瘤细胞。

2007-2008年河北省急性迟缓性麻痹病例脊灰病毒核苷酸变异情况分析

目的及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV)。方法对河北省2007-2008年急性弛缓性麻痹(AFP)病例的粪便标本进行病毒分离和血清定型。所有标本用L20B、RD细胞同时进行病毒分离,用PCR-RFLP法做型内鉴定。结果从报告的763例AFP病例粪便标本中分离到42株脊髓灰质炎病毒株(PV),其中Ⅰ型4株,Ⅱ型11株,Ⅲ型11株,混合型13株,PV+NEPV共3株;将混合株进行单型分离后,共得到58株,以Ⅲ型PV为主,均为疫苗变异株;发病年龄在1岁以内儿童占84.48%,男性发生变异39株,女性发生19株。结论河北省2007-2008年分离到的脊髓灰质炎疫苗病毒有部分变异,未发现疫苗衍生脊灰病毒。

2002年云南非脊灰病毒测序定型和ECHO13病毒基因特征分析

目的对云南省2002年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒情况及埃柯病毒13型(echovirus 13,E13)的基因特征进行描述。方法按Obster等介绍的方法,对2002年云南省脊灰实验室分离到的21株NPV进行基因测序定型。结果 2002年云南省共报告267例AFP病例,共采集到<15岁AFP病例的合格粪便标本257份,257份便标本中共检测到NPV43株(带毒率为16.7%),其中脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)22株(阳性率8.6%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;检测到非脊灰病毒(NPV)21株(阳性率8.2%)。21株EV中,12株为人类肠道病毒B组(HEV-B,11个血清型,其中3株为E13),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,1个血清型),未分离到HEV-A和HEV-D组病毒。结论 2002年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率不高。对3株常见的E13进行基因进化分析,表明E13病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。

2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒的测序定型和ECHO7病毒的基因特征分析

目的分析云南省2003年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒状况和埃柯病毒7型(echovirus 7,E7)的基因特征。方法按Obster等介绍的方法,对2003年云南省脊灰实验室分离到的18株NPV进行基因测序定型并对埃柯7病毒的基因特征进行分析。结果 2003年共采集到<15岁AFP病例粪便标本215份,在34株阳性标本(带毒率为15.8%)中,脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)16株(阳性率4.7%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;非脊灰病毒(NPV)18株(阳性率8.4%),其中1株为人类肠道病毒A组(human enterovirus A,HEV-A,1个血清型),14株为人类肠道病毒B组(HEV-B,9个血清型,其中3株为埃柯病毒7型,echovirus7,E7),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,2个血清型),未分离到HEV-D组病毒。结论 2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率(8.4%)与往年持平,3株E7病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。

脊灰病毒分离和鉴定新检测流程的应用

目的缩短检测脊灰病毒的时限,及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV)。方法对河北省2013年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者的粪便标本用L20B和RD两种细胞进行病毒分离,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,rRTPCR)对分离到的L20B阳性分离物进行型内鉴定和血清型鉴定。结果从送检的334例AFP病例及接触者粪便标本中检测出L20B阳性分离物26株,用real-time PCR法进行了病毒血清型鉴定和型内鉴定,共监测到脊灰疫苗类似株(sabin-like,SL)19株,其中Ⅰ型9株、Ⅱ型1株、Ⅲ型6株、混合型3株;将混合型进行单型分型后共得24株,进行VP1区核苷酸序列测定,发生高变异的两株出现在Ⅰ型,均为6个核苷酸变异。结论 2013年分离到的脊灰疫苗病毒有部分变异,没有发现疫苗衍生脊灰病毒。

Ⅱ型脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究

目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VP1蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SDS-PAGE确认表达产物,再通过动物免疫、Western blot、免疫荧光和病毒血清抗体中和试验分析嵌合蛋白的免疫学性质。结果:成功构建了以VP6为载体的PV2抗原表位嵌合蛋白6F/PV2N1,并且在E.coli系统中高效表达,嵌合蛋白免疫的豚鼠血清抗体对RV和PV2具备较好的中和活性。结论:以RV VP6为载体构建的嵌合蛋白具有较好的免疫原性,免疫豚鼠产生血清抗体可中和RV和PV2在体外细胞上的感染;进一步为研发RV/PV2嵌合疫苗提供了较好的基础。

小鼠诱导转基因传代细胞对AFP粪便标本中脊灰和其他肠道病毒的分离鉴别研究

报告４６份ＡＦＰ粪便标本用Ｌα、ＲＤ和Ｈｅｐ－２三种细胞作病毒分离，阳性率分别为２６．０９％、６０．８７％、４３．４８％。同步分离出脊灰病毒Ⅰ型３株，Ⅱ型２株，Ⅲ型４株，Ⅰ＋Ⅱ型１株，Ⅰ＋Ⅲ型１株，混合Ｐ２＋Ｅ１株。脊灰病毒总分离阳性率为２８．９５％。非脊灰肠道病毒分离阳性率分别为０％、３６．９６％、２３．９１％。从６份第１次分离结果阴性的高危病例和高度临床病例粪便标本重新分离出１株Ⅲ型脊灰病毒和３株非脊灰肠道病毒。应用Ｌα细胞不仅能作型别鉴定。