大鼠脊髓半损伤后免疫荧光及超微结构的研究

目的:研究大鼠脊髓胸段半损伤后前角运动神经元区5-HT2AR免疫反应的变化,应用电镜观察胞体、髓鞘等结构的超微形态,为脊髓半损伤的病理、生理学变化提供形态学数据。方法:Wistar大鼠随机分成8 h、1、3、7、14、21、30 d七组,每一组又分为脊髓半损伤组和假手术组。脊髓半损伤组用改良Allens法制作大鼠胸段右半侧脊髓损伤模型,假手术组只去除椎板。经5-HT2A受体免疫荧光染色,用激光共聚焦显微镜观察摄片,电镜观察并摄片。结果:假手术组5-HT2A受体免疫反应阳性神经元的密度随时间的增加差异无统计学意义(P>0.05);脊髓半损伤组损伤侧与假手术组相比,损伤侧在1 d时5-HT2A受体阳性神经元的密度增加了2倍多,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05),并随时间的增加而逐渐增高,与假手术组相比差异显著(P<0.01);脊髓半损伤后早期超微结构改变以细胞器的退行性改变为主,兼有膜结构的异常,时间延长则超微结构改变明显。后期损伤段以下脊髓逐渐失去正常神经组织结构,代之以神经胶质细胞增加。结论:脊髓胸段半损伤后,损伤下段前角运动神经元5-HT2A受体逐渐增高,并且出现了显著性差异。丰富了脊髓损伤后超微结构变化的理论。

骨骼肌与心肌化学去细胞生物支架对大鼠脊髓半损伤脊髓修复的实验研究

目的探究与比较采用带血管蒂肌瓣贴附以及填充肌基膜和心肌,从而使得脊髓损伤缺血区的血液供应能力获得增强,同时使脊髓继发性损伤得以减弱的三种手术方法。方法本研究通过手术的方法,在Wistar大鼠脊髓损伤处的上方覆盖带蒂肌瓣,以及分别在脊髓损伤处填充肌基膜和心肌。然后,在手术结束后4周,对实验对象进行灌注处理,同时观察其组织学染色情况,最后使用电镜观察其轴突的变化情况。结果染色结果显示,进行带蒂肌瓣覆盖的Wistar大鼠的脊髓损伤处有血管生长,并且该血管从肌肉延伸到脊髓实质,另外进行肌基膜和心肌填充的Wistar大鼠同样出现有血管生成的现象,与此同时,电镜结果显示其都有神经轴突的生成,显示出Wistar大鼠的继发性损伤在很大程度上有所降低。结论三种方法均能够有效地加强血液在缺血区的供应,使继发性损伤程度降低,具有很好的临床应用前景。

NRG1基因修饰的骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓半横切损伤的修复作用及其机制

目的探讨移植神经调节蛋白1(NRG1)基因修饰的骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠脊髓半横切损伤(SCI)的修复作用及其可能机制。方法分离培养大鼠BMSCs,转染NRG1基因,采用ELISA法测定BMSCs裂解液和培养液上清中NRG1蛋白含量,细胞计数法检测BMSCs增殖活性。43只健康8周龄SD大鼠,随机分为对照组(n=10)、SCI模型组(n=10)、BMSCs组(n=10)与NRG1-BMSCs组(n=13)。建立大鼠脊髓半横切损伤模型后,原位移植BMSCs和NRG1-BMSCs。移植第1、7、14、21、28天,采用BBB评分、斜板实验评估大鼠后肢运动功能;移植第7天,应用荧光显微镜观察移植细胞迁移及分布情况;移植第28天,采用HE染色和Nissl染色观察大鼠脊髓组织病理学变化,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,Western blotting检测脊髓组织内质网应激相关蛋白[X-box结合蛋白1(XBP1)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、转录激活因子4(ATF4)、ATF6和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)]及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达。结果成功分离培养BMSCs,并转染NRG1基因。ELISA法检测结果显示,NRG1-BMSCs裂解液和培养液上清中NRG1蛋白含量明显高于BMSCs,且呈时间依赖性(P<0.05)。NRG1-BMSCs增殖活性明显高于BMSCs(P<0.05)。移植第21、28天,NRG1-BMSCs组BBB评分及斜板倾斜角度均高于SCI模型组和BMSCs组(P<0.05),但未恢复到对照组水平(P<0.05)。移植第28天,与SCI模型组和BMSCs组比较,NRG1-BMSCs组大鼠脊髓组织神经元核固缩减少,尼氏体密度增加,XBP1、CHOP、ATF4、ATF6、GRP78、Bax蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论移植NRG1基因修饰的BMSCs能够减轻SCI,促进大鼠运动功能恢复,其机制可能与增加BMSCs增殖活性、抑制脊髓组织细胞凋亡、减轻内质网应激反应有关。

美洲大蠊研粉干预脊髓半横断大鼠运动功能和自噬蛋白Beclin-1的表达

背景:脊髓损伤有氧化应激、炎症、凋亡、自噬等机制参与其中,激活自噬可改善脊髓损伤后的神经运动功能,对脊髓起保护作用。目的:探讨美洲大蠊研粉对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬蛋白Beclin-1的影响。方法:取30只6-8周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,每组10只:假手术组仅打开椎板,暴露脊髓后缝合;生理盐水组与美洲大蠊组均建立左侧脊髓半横断损伤模型,术后第1天开始分别灌胃给予生理盐水与美洲大蠊研粉,连续给药14 d。术后6 h及1,3,7,14 d行BBB评分,观察后肢运动功能的情况;给药14 d后处死大鼠,采用免疫组化染色、Western Blot检测、免疫荧光染色检测脊髓半横断损伤区域自噬蛋白Beclin-1的表达情况。结果与结论:①随着术后时间的延长,生理盐水组、美洲大蠊组大鼠BBB评分逐渐升高;与假手术组比较,生理盐水组、美洲大蠊组术后6 h及1,3,7,14 d的BBB评分均降低(P<0.05);美洲大蠊组术后7,14 d的BBB评分高于生理盐水组(P<0.05);②免疫组化染色显示,假手术组Beclin-1呈弱阳性表达,主要位于胞浆;生理盐水组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;美洲大蠊组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于生理盐水组(P<0.05);③Western Blot检测与免疫荧光染色显示,生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于生理盐水组(P<0.05);④结果表明,美洲大蠊研粉能够改善脊髓半横断损伤大鼠的后肢运动功能,机制可能是美洲大蠊研粉中的多糖类物质增加了自噬蛋白Beclin-1的表达。

脊髓半切损伤后髓鞘碱性蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的研究大鼠脊髓半切损伤后后肢运动功能恢复情况及损伤远端星形胶质细胞和近端少突胶质细胞反应性增生关系,探讨损伤后星形胶质细胞和少突胶质细胞反应性增生在脊髓损伤修复中的作用.方法将35只SD大鼠随机分成7组:对照组5只;实验组6组,每组5只,分别是伤后1天组,3天组,7天组,14天组,21天组,28天组.实验组动物均行T9左侧半切,分别于伤后1,3,7,14,21,28 d行后肢运动功能联合评分(CBS)及Basso-Beattle-Bresnahan(BBB)评分.每次评分后处死5只大鼠,进行HE染色及GFAP、MBP免疫组织化学检测.结果伤后后肢均有不同程度的恢复,1～2周时恢复幅度最大,2～3周时后肢运动功能继续恢复,3周时BBB评分最高达12分,3～4周运动功能无显著性恢复,损伤后1 d损伤远端3～6 mm处GFAP阳性星形胶质细胞开始增生肥大,3～4 d灰质中星形胶质细胞明显增多,2周时达到高峰,损伤近端3～6 mm处少突胶质细胞的增生反应过程与星形胶质细胞相似.结论脊髓损伤后近端少突胶质细胞和远端星形胶质细胞反应性增生可能有助于损伤的修复和再生.

植入式膈神经刺激器在兔颈脊髓半切损伤模型的应用研究

目的:应用兔C3脊髓半切损伤模型造成单侧膈肌瘫痪,观测植入式膈神经刺激器对膈肌功能恢复的有效性和组织相容性。方法:30只新西兰大白兔随机分为对照组(A组)和实验组(B组),每组15只,建立兔C3脊髓半切损伤模型造成单侧膈肌瘫痪,并植入膈神经刺激器。B组组每日施加电刺激干预(每日1次,每次8h),A组不施加电刺激干预。两组分别于颈髓损伤前、术后1、2、4周行血气分析检测;术后1、2、4周对膈肌、膈神经进行形态学观察,并对膈肌肌纤维细胞横截面的面积进行统计学分析。结果:颈髓损伤术后1周,两组PaO_2值都下降,PaCO_2都升高,但组间比较无统计学意义(P>0.05);术后2周A组PaO_2值开始回升,PaCO_2值无明显变化,B组PaO_2值继续降低,PaCO_2值继续增大,两组间比较存在统计学差异(P<0.05);术后4周B组PaO_2值明显升高(未恢复至正常水平),PaCO_2恢复至正常水平,与A组相比存在统计学差异(P<0.05)。术后1周两组膈肌细胞横截面积无显著差异(P>0.05),术后2周、4周A组膈肌细胞横截面积均较B组组明显减小,与B组存在统计学差异(P<0.05)。A组2周时膈肌细胞肌束膜及肌内膜边界不清,4周时局部肌细胞破坏;B组4周时肌细胞肌束膜及肌内膜边界仍清晰。A组术后1周时膈神经结构正常,2周时可见髓鞘增生,鞘索比例增大,数目减少;4周时可见髓鞘异常增生明显,神经间质水肿,微管微丝线粒体大量缺失。B组膈神经始终为正常结构。结论:植入式膈神经刺激器能够促进颈髓损伤后新西兰大白兔膈肌呼吸功能的恢复,其机制可能与膈神经刺激能够延缓颈髓损伤后膈肌萎缩和膈神经变性有关。

肌基膜管植入对大鼠脊髓半横断损伤模型的血管化作用

目的:观察肌基膜管移植治疗大鼠脊髓损伤的血管生成情况,为在脊髓损伤中应用肌基膜管作为组织工程支架提供理论和实验依据。方法:利用冻融法将大鼠骨骼肌制备成肌基膜管,将其移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中,分别于术后3、5、7、14和28 d取材,利用碱性磷酸酶染色观察各个时间点支架中血管生成情况,比较不同时间点(3、5、7、14和28 d)血管生成数量。结果:肌基膜管在移植入大鼠脊髓损伤区后,血管由脊髓和肌基膜管交界处长入肌基膜管内部,最终在肌基膜管内部形成血管网。新生血管面积比5 d组高于3 d组(P<0.05),7 d组高于5 d组(P<0.01),14 d组高于7 d组(P<0.01),28 d组高于14 d组(P<0.05或P<0.01)。结论:肌基膜管移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中具有良好的血管化作用,有望成为修复脊髓损伤理想的组织工程材料。

脊髓半切损伤后脊髓与大脑部分核团c-fos蛋白表达的实验研究

目的 :探索脊髓半切损伤后 ,脊髓、下丘脑室旁核 (PVN)和视上核 (SON)的c -fos蛋白表达的规律。方法 :将 5 6只大鼠随机分为脊髓损伤组 2 4只、假手术组 2 4只和正常组 6只 ,损伤组行左侧半脊髓横断术 ,损伤后 1,6,12 ,2 4h取脊髓、PVN和SON行冰冻切片 ,免疫组化法标记c -fos阳性细胞。结果 :脊髓半切损伤后 ,各时间点损伤侧脊髓灰质中有明显的c -fos阳性表达。PVN和SON在损伤后各时间点均有c -fos表达阳性细胞的增加 ,与假手术组、正常组比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :脊髓损伤后脊髓、PVN和SON可产生明显反应 ,PVN和SON以不同的反应特点影响着神经递质的改变。

骨髓单个核细胞移植对脊髓半横断大鼠损伤组织中髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的:研究骨髓单个细胞移植脊髓半横断大鼠脊髓损伤区域后髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达的影响。方法:取Wistar大鼠胫骨及股骨提取骨髓单个核细胞,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,制成细胞悬液。建立大鼠脊髓右半横断模型,造模后分为假手术组、模型组、骨髓单个核细胞移植组。于模型建立成功后7d,14d,21d,28d手术的大鼠进行BBB评分从而评估损伤脊髓神经功能恢复情况,利用RT-PCR观察MBP mRNA的表达变化。结果:术后各时间点假手术组BBB评分均明显高于骨髓单个核细胞移植组、模型组(P<0.05);术后随时间延长骨髓单个核细胞移植组、模型组BBB评分逐渐增加,14、21、28d时骨髓单个核细胞移植组BBB评分明显优于模型组(P<0.05)。PT-PCR测试各时间点骨髓单个核细胞移植组和模型组大鼠脊髓中MBP mRNA的表达量高于假手术组,且骨髓单个核细胞移植组高于模型组(P<0.05)。结论:骨髓单个细胞移植可提高脊髓组织中MBP的表达,有助于大鼠半横断脊髓损伤神经功能的恢复。

大鼠脊髓半横断损伤后肾上腺皮质酶组织化学变化

目的 观察大鼠脊髓半横断损伤后肾上腺皮质酶组织化学变化。方法 用组织化学方法和图像分析技术观察大鼠脊髓半横断损伤后肾上腺皮质琥珀酸脱氢酶 (SDH)和 3β 羟基类固醇脱氢酶 (3β HSD)的变化。结果 大鼠脊髓半横断损伤后 1d肾上腺皮质束状带和网状带细胞SDH和 3β HSD活性均显著强于对照组 (P <0 .0 1)和损伤后 15d组 (P <0 .0 5 ) ;脊髓半横断损伤后 15d大鼠肾上腺皮质束状带和网状带细胞 3β HSD和SDH活性稍高于对照大鼠 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 脊髓半横断损伤后 1d大鼠肾上腺皮质功能增强 ,并在损伤后

重复经颅磁刺激不同干预时机对脊髓半横断损伤大鼠运动功能的影响

目的：观察重复经颅磁刺激不同干预时机对脊髓半横断损伤大鼠运动功能的影响。方法：将42只SD大鼠随机分为正常对照组（n=6）、假手术组（n=6）、脊髓损伤组（SCI组，n=10）、急性期刺激组（ArTMS组，n=10）和亚急性期刺激组（SrTMS组，n=10），SCI组、ArTMS组和SrTMS组大鼠建立T10脊髓右半侧横断损伤模型，假手术组仅行椎板切开，不横断脊髓，正常对照组不行手术处理。ArTMS组和SrTMS组大鼠分别于术后4d和18d开始重复经颅磁刺激治疗，刺激强度为最大输出强度的35%，刺激频率为10Hz，每序列5s，间歇2min，连续10个序列，每日1次，每周5d，连续2周；正常对照组、假手术组和SCI组不行经颅磁刺激治疗。大鼠术前与术后3d、10d、17d、24d、31d和38d分别进行BBB评分和水平梯子实验评价右后肢运动功能；术后38d取右后肢胫前肌，采用ATP酶法（pH 4.6）行肌肉病理染色，观察肌肉形态并测量不同类型肌纤维直径。结果：5组大鼠术前BBB评分均为21分，水平梯子实验步态正确率均为100%。假手术组术后各时间点BBB评分和水平梯子实验步态正确率与术前比较无变化。SCI组、ArTMS组、SrTMS组术后３ｄ BBB评分和水平梯子实验步态正确率明显下降，与术前比较差异显著。SCI组和SrTMS组术后31ｄ和38ｄ BBB评分有所恢复，与术后３ｄ和10ｄ比较差异显著（P〈0.05），SCI组和SrTMS组术后24d、31d、38d水平梯子实验步态正确率与术后３ｄ和10ｄ比较差异显著（P〈0.05）。ArTMS组术后17d、24ｄ、31d、38d时的BBB评分和水平梯子实验步态正确率明显高于术后3d和10d（P〈0.05）。SCI组和SrTMS组术后3~38d各时间点BBB评分、水平梯子实验步态正确率组间比较无显著性差异（P＞0.05）；ArTMS组术后3d和10d BBB评分、水平梯子实验步态正确率与SCI组和SrTMS组比较无显著性差异（P＞0.05）。ArTMS组术后17d、24d、31d、38d BBB评分明显高于SCI组和SrTMS组（P〈0.05）；术后17d、24d、31d、38d水平梯子实验步态正确率明显高于SCI组（P〈0.05）；术后24d、31d、38d水平梯子实验步态正确率明显高于SrTMS组（P〈0.05）。术后38d时，SCI组大鼠右后肢胫前肌１型、2A型、2B型肌纤维直径与正常对照组和假手术组比较均明显变小（P〈0.05）；ArTMS组2A型肌纤维直径与正常对照组和假手术组比较变小（P〈0.05），2A型和2B型肌纤维较SCI组明显增粗（P〈0.05），1型与SCI组比较无显著性差异（P＞0.05）；SrTMS组大鼠2A型和2B型肌纤维与正常对照组和假手术组比较变细（P〈0.05），2B型肌纤维与ArTMS组比较明显变细（P〈0.05）。结论：重复经颅磁刺激早期干预可促进脊髓半横断损伤大鼠运动功能恢复，改善部分肌肉萎缩，急性期治疗效果明显优于亚急性期治疗的效果。

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Versican的变化

目的观察大鼠脊髓半横断损伤(hSCI)位点头尾段硫酸软骨素蛋白多糖Versican的表达变化,探讨其与脊髓损伤修复的关系。方法20只成年健康SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3d、7d和14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9～T10)模型。取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数各组前角中Versican阳性细胞数,采用计算机图像分析技术测量免疫阳性产物的平均光密度(A)值。结果Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,前角神经元和胶质细胞的胞浆中也有分布;损伤后前角中Versican阳性神经元和胶质细胞数较对照组明显减少(P<0.05),免疫阳性产物平均A值较对照组明显增加(P<0.05)。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的Versican很可能参与损伤后轴突生长被抑制的过程。

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓半切损伤的修复作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSC)移植对脊髓半切损伤大鼠运动功能的修复作用。方法:20只成年D大鼠随机分为移植组(n=10)和对照组(n=10),均进行脊髓半切损伤。伤后1周,移植组于伤处移植大鼠MSC,而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1天、1周、2周、3周、4周用BBB评分观测大鼠的运动功能,并于移植后4周进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果:移植后1周两组动物运动功能恢复无明显差异。移植后2周、3周、4周,与对照组比较,移植组显著提高运动功能。移植后4周,移植组损伤脊髓的结构修复明显优于对照组。结论:脊髓半切损伤大鼠经MSC移植后能明显改善其运动功能和神经形态,MSC移植对脊髓半切损伤大鼠有治疗作用。

猫脊髓半横贯损伤的电镜观察

用成年猫作脊髓半横贯切割损伤模型，即从SZ节段在右侧半切取约3mm长的脊髓。术后28天经左心室主动脉插管冲洗，然后经多聚甲醛戊二醛灌注固定。取L6、SZ、S4节段背侧Ⅱ板层电镜观察。术后SZ节段Ⅱ板层的简单终末（小、单突触）、粗细有髓纤维、Ⅰ型复合终末（电子密度较高，会大小不一分布均匀的突触小泡，线粒体量少）和Ⅱ型复合终未（电子密度较低，含大小相近但密度不一的突触小泡，粒线体数量多）均增多。左侧半从上至下（L6、SZ、S4）粗钢有髓纤维，简单终末数、Ⅰ型复会终未均逐步增多（Ⅱ型逐步减少）。右侧半，与术前SZ节相比，L6节的简单终未、细有髓纤维和髓鞘增厚且玻璃样变的粗有髓纤维大量存，同时有对称性突触的小偏平终末出现；S4节则无髓纤维和Ⅰ型复合终天增多，简单终末数减少，Ⅱ型复合终未很少。术后与术前相比，神经元胞质内溶酶体、线粒体、粗面内质网明显增多。线粒体脊变明显；神经胶质细胞胞突内的胶质丝明显增多。上述结果表明：满脊髓半横贯损伤后结构上是增生与演变同时存在，但增生在损伤侧以上和以下的节段及两侧之间有较大差别，即损伤平面以上及对侧半可能是来自后根的无髓纤维和下行的投射纤维的出芽同时发生，而损伤平面以下可能只有来自后根的无阻纤维出芽。

脊髓半横断损伤后trkB基因表达的变化

脊髓损伤后期trkB的变化及作用仍不清楚,本实验建立脊髓半横断损伤模型(hSCI),术后14天取损伤脊髓用定量PCR测定trkB表达水平。结果显示,与假手术组比较,损伤脊髓trkB mRNA水平明显下调。推测trkB减少可能是不利于修复的因素之一,值得重视。

恒河猴脊髓半横断损伤后脊髓腹角及对侧皮质前运动区胶质细胞源性神经营养因子的表达

目的:探讨恒河猴脊髓损伤后脊髓腹角及对侧大脑皮质前运动区胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的变化。方法:18只成年恒河猴随机分为假手术组和脊髓半横断损伤(hSCI)后7d、14d、1个月、2个月和3个月组,每组3只。假手术组术后24h取材;各损伤组于第11胸髓节段切断左侧半脊髓,在相应时间点取材。取脊髓损伤处近、远段5mm组织及损伤对侧大脑皮质前运动区组织,制作冰冻切片,采用免疫组织化学SP法检测GDNF,计数阳性神经元数目。结果:恒河猴hSCI后3个月内,损伤处脊髓近、远段损伤侧与未损伤侧腹角GDNF阳性神经元数均较假手术组减少(P<0.05),并且表现为先降低后增加,晚期逐渐减少;hSCI1个月以后损伤侧GD-NF阳性神经元数目多于未损伤侧;对侧皮质前运动区GDNF阳性神经元在损伤早期急剧减少,此后增加,至hSCI后3个月时恢复至正常数量。结论:损伤局部GDNF的缺乏是影响脊髓损伤后再生修复的原因之一;适时补充外源性GDNF可能会促进神经修复;应用GDNF治疗SCI的最佳时机在损伤早期。

电针在治疗大鼠脊髓半横断损伤后功能康复中的研究

目的探究电针治疗在大鼠脊髓半横断损伤后功能康复中的作用。方法成年Wister大鼠48只,雌雄不拘,随机分为4组,假手术组(A组)、假手术电针组(B组)、脊髓损伤组(C组)、损伤治疗组(D组)。A,C两组不进行电针治疗,B,D两组进行电针治疗。所有组大鼠于术后1,3,7,14d进行BBB行为学评分、斜板试验评定和测试大鼠后肢功能。14d后进行感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检测。结果所有组大鼠均进入结果分析。A,B两组的实验结果差异无显著性(P>0.05),C,D两组较A,B两组BBB评分明显减少,斜板角度明显降低,SEP和SEP的潜伏期延长,峰-峰值减小。1d时,BBB行为学评分和斜板试验A,B两组高于C,D组,A,B两组之间比较,差异无显著性(P>0.05);3d时,A,B组评分和斜板试验角度大于C,D两组;7d时,A,B两组结果趋于稳定,好于C,D两组;14d时,C,D两组结果明显变好,D组实验结果优于C组,且两组实验结果两两比较具有明显差异(P<0.01)。结论电针在治疗大鼠脊髓半横断损伤后功能康复中能促进脊髓损伤大鼠恢复。

小鼠胚胎干细胞在半横断猫脊髓损伤后急性期移植的实验研究

目的探讨猫脊髓半横断损伤后急性期移植小鼠胚胎干细胞后存活、迁移及对功能的影响.方法胚胎干细胞移植前进行培养诱导和记数绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞.取成年健康猫6只(正常移植组和半横断移植组,每组各3只),其中半横断组实施脊髓半横断手术.正常组和半横断组同时移植带有绿色荧光小鼠胚胎干细胞,7 d后灌注取材并行脊髓组织切片后,在倒置荧光显微镜下观察干细胞存活及迁移情况和对行为功能的影响.结果绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞的阳性率为38%,半横断移植组未见到荧光细胞,正常移植组可看到荧光细胞并迁移一段距离.结论小鼠胚胎干细胞能在成年猫的脊髓存活、迁移.但半横断脊髓损伤组未见荧光细胞,提示炎症急性期不利于移植的干细胞存活或者免疫排斥反应导致干细胞死亡.

嗅鞘细胞移植对脊髓半横断大鼠骨骼肌的影响

背景：现有研究表明嗅鞘细胞移植可促进脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的恢复，但多数实验是以动物行为学评分作为观察指标。目的：实验拟进一步观察嗅鞘细胞移植后6周脊髓半横断损伤大鼠后肢小腿三头肌组织形态学的变化。设计、时间及地点：细胞观察，于2006—10／2007—03在四川大学华西基础医学与法医学院神经生物学开放实验室完成。材料：清洁级2．5月龄雌性SD大鼠40只，由自四川大学华西医学中心提供。细胞培养过程中使用的阿糖胞苷为ROCHE产品。方法：5只大鼠麻醉后取出脑双侧嗅球，采用差速贴壁与阿糖胞苷抑制相结合的方法分离培养纯化嗅鞘细胞，第14天分别收集培养上清液和密度为1×10^10L^-1细胞悬液备用。剩余35只大鼠设立两组：正常组5只，不做任何处理；模型组30只，于T11-12节段建立脊髓半横断损伤模型后，又分为5个亚组：8只移植纯化的嗅鞘细胞悬液，6只移植纯化的嗅鞘细胞培养上清液，6只移植未纯化的嗅鞘细胞悬液（主要是嗅神经成纤维细胞），5只移植未纯化的嗅鞘细胞培养上清液，5只移植DMEM／F12培养液。移植量12μL/只，在脊髓半横断损伤上、下各1mm处多点注射移植4μL，同时在半横断处填充的明胶海绵内注入8μL。主要观察指标：移植后6周取左侧后肢小腿三头肌，苏木精-伊红染色观察肌细胞形态变化，图像分析软件测量肌细胞横截面积和直径。结果：①正常组肌细胞近似圆形或多边形，多核，核分布于外周。各移植组肌细胞均变小，核深染，其中移植DMEM／F12培养液组变化最为明显。②各移植组肌细胞横截面积及直径较正常组均明显减少（P〈0.05），其中移植纯化的嗅鞘细胞组减少程度最轻（P〈0.05），移植DMEM／F12培养液组减少程度最严重（P〈0.05），移植未纯化的嗅鞘细胞、纯化／未纯化的嗅鞘细胞培养上清液3组间无明显差异（P〉0.05）。结论：移植纯化的嗅鞘细胞悬液脊髓半横断损伤大鼠后肢小腿三头肌萎缩的程度最轻，肌细胞组织学变化最小。

大鼠坐骨神经夹伤与坐骨神经结扎后脊髓胞体分布区神经组织基因表达的比较

大鼠坐骨神经夹伤与坐骨神经结扎将产生两种不同的结局:前者可以再生,而后者不能再生。这二种不同的损伤对神经元的胞体分布区基因表达会产生什么样的影响尚不清楚。我们推测,外周神经损伤后再生与否可能会导致胞体基因表达的差异。这种差异是否与不可再生的中枢神经损伤后基因表达变化有共性?我们根据脊髓半横断损伤和坐骨神经损伤基因表达谱分析比较结果,选择部分表达有改变的基因,通过 RT—PCR 的相对定量方法在外周神经损伤后可再生与不可再生模型中进行了分析对比。