坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对大鼠脊髓后索损伤修复的影响

目的:研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中mi RNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响。方法:39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组。A组(n=12)坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组(n=12)仅进行T10节段脊髓后索损伤造模,C组(n=12)仅进行坐骨神经损伤造模,D组(n=3)不进行任何造模操作。A组和B组分别于脊髓后索损伤造模后4h、3d、7d、14d取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测,于脊髓后索损伤造模后14d取损伤中心脊髓组织行神经丝蛋白200(NF-200)免疫组织化学染色和HE染色;C组于A组各时间点取材的同时取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测;D组取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测。对A、B两组各时间点背根神经节mi RNA表达谱进行微阵列芯片分析和生物信息学分析,观察与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的mi RNA,选出A组中与B组相比变化倍数明显、经过生物信息学分析靶蛋白为Dusp4的mi R-199a-5p进行研究。并用RT-q PCR技术对各组mi R-199a-5p及A、B和D组Dusp4 m RNA表达进行检测,用Western blot技术检测各组Dusp4蛋白以及A、D组p38蛋白和p-p38蛋白,对A组和B组脊髓后索损伤中心脊髓组织用NF-200免疫组织化学染色及HE染色观察损伤脊髓的恢复情况。结果:芯片分析结果显示mi R-199a-5p在A组各个时间点表达与D组相比明显下调,B组mi R-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调,3d、7d和14d的表达量无明显变化。RT-q PCR结果显示A组各时间点mi R-199a-5p表达与D组相比下调(P<0.05),B组mi R-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调(P<0.05),3d、7d和14d的表达量与D组比较无明显变化,C组各时间点mi R-199a-5p表达与D组比较无明显变化。A组和B组各时间点Dusp4 m RNA表达与D组相比无明显变化。A组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后各个时间点与D组比较均有上调且存在统计学差异(P<0.05)。B组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比显著下调(P<0.05),脊髓后索损伤后3d、7d、14d与D组比较无明显差异。C组Dusp4蛋白在各时间点的表达水平与D组比较无明显差异。A组p38蛋白及p-p38蛋白的表达变化趋势与mi R-199a-5p趋势一致。在脊髓后索损伤后14d,与B组比较A组损伤中心尾端脊髓NF-200表达明显增加,且损伤中心尾端脊髓白质纤维束形态规整、后索纤维束排列有序。结论:大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中mi R-199a-5p表达下调可以促进脊髓后索损伤的修复。

微小RNA-199a-5p下调后通过c-jun氨基端激酶通路促进脊髓后索损伤修复的研究

目的 从微小RNA（miRNA,miR）表达谱（miRNomes）角度探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制.方法 39只雌性Wistar大鼠随机分为坐骨神经预损伤组、单纯脊髓后索损伤组、单纯坐骨神经损伤组和对照组.用微阵列芯片技术和生物信息学方法研究坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的相关miRNA,并用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot、免疫组织化学以及苏木素-伊红（HE）染色等技术进行生物学验证.结果 miR-199a-5p在坐骨神经预损伤组各时间窗表达下调,其靶基因促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶2（MKP2）的蛋白表达上升,进而抑制c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化.坐骨神经预损伤组脊髓后索损伤中心尾端脊髓神经丝蛋白明显增加且白质纤维束形态规整.单纯损伤坐骨神经并不改变miR-199a-5p和MKP2蛋白表达.结论 miR-199a-5p表达下调增加了MKP2阻断JNK磷酸化的作用,是坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制之一.

坐骨神经预损伤下调脊髓后索损伤大鼠背根神经节miR-182进而促进CREB蛋白表达的实验研究

目的从microRNA（miR）组学角度探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制，以期寻找关键治疗靶点。方法健康雌性Wistar大鼠48只，按随机数字表法分为坐骨神经预损伤＋脊髓后索损伤组（15只）、单纯脊髓后索损伤组（15只1、单纯坐骨神经损伤组（15只）和对照组（3只1。在脊髓后索损伤前7d切断大鼠双侧坐骨神经，脊髓后索损伤后4h、1d、3d、7d每组取3只大鼠处死并取与双侧坐骨神经对应的背根神经节，miR芯片分析miR表达谱：实时定量逆转录聚合酶链式反应依T—qeCR）检测miR-182、cAMP应答元件结合蛋白fCREB）mRNA的表达；Western成blotting、ELISA分别检测CREB、p-CREB蛋白的表达和cAMP含量：脊髓后索损伤后14d取损伤段脊髓，HE染色，免疫组化染色检测脊髓后索神经丝蛋白NF-200的表达。结果与对照组相比，坐骨神经损伤＋脊髓后索损伤组、单纯脊髓后索损伤组大鼠损伤后不同时间共有681个miRNA表达发生变化。与单纯脊髓后索损伤组比较，坐骨神经损伤＋脊髓后索损伤组损伤后3d和7dmiR．182表达下调；与对照组相比，单纯坐骨神经损伤组大鼠背根神经节miR-182、坐骨神经损伤＋脊髓后索损伤组背根神经节CREBmRNA的表达均无明显变化，差异无统计学意义（胗0．051；与对照组比较，坐骨神经损伤＋脊髓后索损伤组大鼠损伤后3d、7d背根神经节CREB和P-CREB蛋白表达，4h、1d、3d、7d背根神经节cAMP的含量均增加，差异均有统计学意义（氏0．05）。免疫组化染色检测显示坐骨神经损伤＋脊髓后索损伤组脊髓后索损伤中心尾端NF200表达比单纯脊髓后索损伤组增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤的修复．机制与背根神经节中miR-182下调、cAMP上调．从而导致磷酸化CREB蛋白增加有关．