脊髓小脑性共济失调3型/Machado-Joseph病ICARS与SARA评分相关因素分析(英文)

目的:探讨国际协作共济失调评估量表(ICARS)与共济失调等级量表(SARA)评估脊髓小脑性共济失调3型/M achado-Joseph病患者的相关因素。方法:应用ICARS与SARA对126例基因检测明确诊断为脊髓小脑性共济失调3型患者进行评估,分析ICARS评分、SARA评分与发病年龄、病程、CAG重复次数的相关性。结果:ICARS总评分(Y1)、SARA总评分(Y2)与病程(X2)呈正相关(r=0.586,P<0.05;r=0.643,P<0.05),回归方程分别为Y1=13.072+2.388X2(F=68.874,P<0.05),Y2=4.403+0.961X2(F=87.254,P<0.05)。ICARS总评分、SARA总评分与年龄的比值分别与CAG重复次数呈正相关(r=0.328,P<0.05;r=0.335,P<0.05)。ICARS各项评分、SARA各项评分与病程均呈正相关(r=0.257～0.589,P<0.05;r=0.432～0.623,P<0.05)。ICARS各项评分、SARA各项评分与年龄比值分别与CAG重复次数呈正相关(r=0.263～0.403,P<0.05;r=0.189～0.366,P<0.05)。ICARS总评分、SARA总评分均随着病情严重程度增加而增加。结论:ICARS与SARA评分量表均能够有效地反映共济失调患者的病情严重程度,研究者可根据实际需要选用合适的量表。

脊髓小脑共济失调症相关蛋白-3、转移抑制基因23和磷酸酯酶与张力蛋白同源物在胶质瘤术后组织中的表达及意义

目的检测脊髓小脑共济失调兆(Ataxin)-3、转移抑制基因(nm23)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)在胶质瘤中的表达及其临床价值。方法 89例胶质瘤并进行手术治疗的患者作为观察组,70例正常脑组织作为对照组,应用免疫组化检测两组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达。结果观察组Ataxin-3、nm23和PTEN表达的阳性率明显低于对照组。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达与肿瘤的体积、有无坏死及分级密切相关。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达无相关性。结论胶质瘤中Ataxin-3、nm23和PTEN均低表达,三者起到的抑制肿瘤生长的作用。联合检测Ataxin-3、nm23和PTEN的表达可能是判断肿瘤生物学行为的重要指标。

脊髓小脑共济失调3型患者脑脊液及血浆中γ-氨基丁酸和谷氨酸水平检测

目的:研究脊髓小脑共济失调3型(SCA3)患者脑脊液及血浆中γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)的水平,探讨二者在SCA3发生中的作用及临床意义。方法:使用超高效液相色谱-质谱联用法检测24例SCA3患者及9例正常对照脑脊液及血浆中GABA、Glu水平。对24例SCA3患者行国际共济失调评定量表(ICARS)评分。分析SCA3患者GABA和Glu水平与年龄、CAG重复数及ICARS评分的关系。结果:与正常对照比较,SCA3患者脑脊液与血浆中GABA水平较低,Glu水平较高(P<0.05)。SCA3患者脑脊液中GABA水平与ICARS评分呈负相关(r=-0.412,P<0.05),SCA3患者脑脊液与血浆中Glu与CAG重复数呈正相关(r=0.414、0.485,P<0.05)。结论:脑脊液中GABA水平可反映SCA3患者病情严重程度。

4例脊髓小脑性共济失调3型患者的临床特征及遗传学分析

目的:探讨安徽南部地区4例脊髓小脑性共济失调3型(SCA3)患者的临床特点及遗传学特征。方法:详细收集4例住院治疗SCA3家系患者临床病史资料,对其临床特点进行归纳分析,利用基因测序方法检测患者及家系成员的ATXN3基因(CAG)n突变特征。结果:4例SCA3患者,包括3例家族遗传发病和1例散发起病,均以进行性共济失调为首发症状,包括共济失调步态、辨距不良、吞咽困难等显著症状,伴随病理征阳性、反射亢进、肌张力升高等锥体及锥体外系体征,部分患者出现明显的眼部症状,甚至肌肉痛性痉挛,皮肤感觉功能障碍和认知功能障碍等少见临床表现,还有肌肉萎缩等晚期疾病表现。基因测序证实4例患者(CAG)n扩增数均大于60次,诊断脊髓小脑性共济失调3型明确。结论:脊髓小脑性共济失调3型患者临床表现复杂,基因检测仍是疾病诊断的金标准。

线粒体与脊髓小脑性共济失调3型

脊髓小脑性共济失调3型/马查多-约瑟夫疾病(SCA3/MJD)被人们所熟知已有近20年,但它的确切发病机制不明确,对这类慢性神经系统退行性疾病,目前,尚无有效的治疗策略。越来越多的证据表明,线粒体功能改变与脊髓小脑共济失调3型/马查多-约瑟夫疾病的发生、发展密切相关。笔者就这方面的研究进展进行综述。

脊髓小脑共济失调3型(SCA3)认知功能障碍的研究进展

脊髓小脑共济失调3型(SCA3)是遗传性共济失调的最常见的类型,主要通过损害小脑、脑桥及其相应的核团和通路而导致患者产生共济失调等运动症状和认知功能障碍等非运动症状。本文就SCA3患者产生认知功能障碍的临床表现、病理学基础、发病机制及治疗方法等方面予以综述。

激活泛素-蛋白酶体系对脊髓小脑共济失调7型细胞模型中共济失调蛋白-7的作用研究

目的探索在脊髓小脑共济失调7型(SCA7)细胞模型中,1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮(IU-1)激活泛素-蛋白酶体系(UPS)后对多聚谷氨酰胺(PolyQ)共济失调蛋白-7(ATXN7)的作用。方法在稳定表达ATXN7突变蛋白及非突变蛋白的ATXN7-Q65和ATXN7-Q10神经细胞模型中,利用5×10^(4)μmol/L IU-1和0.2μmol/L环氧甲酮四肽分别增强和抑制UPS的降解作用,进而观察ATXN7突变蛋白对细胞的毒性作用。利用蛋白质印迹技术和斑点过滤杂交法检测ATXN7突变蛋白的表达,2-(4-磺苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐(WST-1)法分析细胞存活率。结果在构建的两组神经细胞模型中,ATXN7-Q65细胞表达的ATXN7蛋白及其聚合体随着诱导时间的延长而明显增加,且与ATXN7-Q10细胞相比,在诱导12 d后ATXN7-Q65细胞的存活率明显下降,细胞凋亡率增加(P<0.05);当加入Dox抑制剂后,与ATXN7-Q10细胞相比,ATXN7-Q65细胞可溶性ATXN7蛋白在24 h内降解缓慢,ATXN7聚合体水平不变。在ATXN7-Q65细胞中,加入IU-1增强UPS活性,12 d后细胞毒性降低,存活率升高;而用环氧甲酮四肽抑制UPS活性,12 d后细胞毒性增高,存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论UPS可有效清除突变蛋白ATXN7,IU-1激活UPS活性能增强突变蛋白ATXN7的清除并降低细胞毒性。

SUMO-1共价修饰ataxin-3

为了探讨ataxin-3的正常生理功能以及脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机理,采用酵母双杂交技术,选择polyQ扩展突变型ataxin-3全长构建诱饵质粒,筛选成人脑cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白质,筛选到互作蛋白smallubiquitin-likemodifier1(SUMO-1).进一步运用免疫共沉淀技术证实,SUMO-1在哺乳动物细胞中共价修饰野生型和polyQ扩展突变型ataxin-3.免疫荧光共定位实验发现,polyQ扩展突变型ataxin-3形成的核内蛋白聚合体与SUMO-1共定位.研究提示,ataxin-3的正常生理功能可能受SUMO-1的调节,SUMO-1可能参与了脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机制.

脊髓小脑共济失调症相关蛋白Ataxin-3抑制张力蛋白同源基因通过蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路促进睾丸癌细胞增殖的机制

目的探究脊髓小脑共济失调症相关蛋白(Ataxin)-3在睾丸癌(TC)组织中的表达及促进TC细胞增殖的机制。方法选取2015年1月至2019年5月在濮阳市人民医院泌尿外科接受睾丸切除术患者的TC组织及癌旁组织标本共38对,以免疫组化染色、实时荧光定量PCR检测Ataxin-3表达,以CCK8实验检测TC细胞增殖情况,并以免疫印迹检测Ataxin-3过表达或敲除后张力蛋白同源基因(PTEN)及蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路相关蛋白水平。结果Ataxin-3蛋白和mRNA在TC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),Ataxin-3表达与TC患者的年龄、病理类型无关(P>0.05),而与临床分期及转移明显相关(P<0.05)。当Ataxin-3蛋白在TCam-2细胞中过表达时可促进细胞增殖,而在TCam-2细胞中转染siRNA,敲除Ataxin-3后可抑制细胞增殖和侵袭。Ataxin-3过表达时TCam-2细胞中PTEN蛋白表达明显抑制,而敲除后PTEN表达上调。进一步检测AKT/mTOR信号相关蛋白的表达及磷酸化,显示Ataxin-3过表达时AKT、mTOR无明显变化,但AKT、mTOR磷酸化明显上调,真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)磷酸化明显下降;而Ataxin-3敲除后,p-AKT、p-mTOR表达明显抑制,4E-BP1磷酸化明显上调。结论Ataxin-3在TC组织中呈高表达,且与TC进展有关,其可能机制为Ataxin-3抑制抗癌基因PTEN通过激活AKT/mTOR信号通路而促进TC细胞增殖。

187例脊髓小脑性共济失调3型患者的临床表型与遗传学特点

目的分析脊髓小脑性共济失调3型（SCA3）患者的基因型和表型特点，并探讨基因型．表型相关性。方法收集上海交通大学医学院附属瑞金医院自2005年7月至2015年12月收治的来自160个家庭的187例基因诊断明确的SCA3患者临床资料，以及ATXN3基因型检测结果。对患者临床表型及ATXN3基因CAG病理拷贝数进行统计分析。结果187例SCA3患者中男性100例，女性87例；平均发病年龄（35．43±11．17）岁。CAG病理拷贝数范围为65～86次，平均（74．11±3．56）次。CAG病理拷贝数与发病年龄呈负相关（r=-0．815，P=-0．000）。CAG病理拷贝数较低者（≤74次1和较高者（〉74次1腱反射减退的发生率分别为28．9％和6．O％，肌强直的发生率分别为27．8％和49．4％，差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论SCA3是一种具有高度临床表现异质性和遗传学异质性的神经系统退行性疾病。ATXN3基因CAG病理拷贝数与发病年龄以及腱反射减退、肌强直的发生存在明显关联。

过表达PINK1改善SCA3/MJD转基因果蝇模型的线粒体功能

脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD),是一种因致病基因MJD1编码区内CAG异常重复扩增所致的常染色体显性遗传迟发性神经退行性疾病.已知PINK1蛋白可通过抗氧化稳定线粒体,阻止帕金森疾病的发生,但其在SCA3/MJD中的作用尚不清楚.本文旨在探索过表达PINK1对SCA3/MJD转基因果蝇模型的保护作用.本研究利用Mhc-Gal4启动子表达致病蛋白质片段(MJDtr-Q78)获得SCA3/MJD果蝇模型,分别运用过表达PINK1和RNA干扰PINK1研究其在SCA3/MJD果蝇模型中的功能.结果显示,疾病模型组翅膀异常率增高,线粒体呈过度融合状态,ATP值降低;PINK1 RNA干扰组翅膀异常率明显增高,线粒体呈显著过度融合状态,ATP值明显降低;PINK1过表达组翅膀异常率明显降低,线粒体清晰、完整,ATP值明显升高.本文的结果提示,过表达PINK1对SCA3/MJD转基因果蝇模型起保护作用,而RNA干扰PINK1表达加重SCA3/MJD转基因果蝇模型病情.PINK1在SCA3/MJD果蝇模型中的功能可能通过改善细胞内线粒体功能实现.

MJD1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的:分别构建野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的真核表达载体;明确atax-in-3的多聚谷氨酰胺扩展突变是否可导致细胞核内蛋白聚合体形成。方法:分别以pAS2-1-M JD20Q和pAS2-1-M JD68Q为模板,通过PCR扩展野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的编码序列。PCR产物经BamH I和Hind III双酶切后连入pcDNA3.1-Myc-H is(-)B,通过酶切以及DNA测序鉴定重组质粒pcDNA3.1-Myc-H is(-)B-M JD20Q和pcDNA3.1-Myc-H is(-)B-M JD68Q。重组质粒转染SH-SY5Y细胞,通过W estern印迹验证ataxin-3的表达,应用激光共聚焦显微镜观察转染细胞的核内蛋白聚合体形成情况。结果:酶切和DNA测序证实目的基因已被克隆入pcDNA3.1-Myc-H is(-)B;其在转染细胞中的表达亦经W estern印迹得以验证;SH-SY5Y细胞转染pcDNA3.1-Myc-H is(-)B-M JD68Q后可见核内蛋白聚合体形成,而转染pcDNA3.1-Myc-H is(-)B-M JD20Q后未见核内蛋白聚合体形成。结论:成功构建了MJD1的真核表达质粒;ataxin-3的多聚谷氨酰胺扩展突变可导致细胞核内蛋白聚合体形成。

SCA3/MJD与SPG4的弥散加权成像对比研究

目的:探讨弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)在遗传性脊髓小脑型共济失调3型/马查多-约瑟夫病(hereditary spinocerebellar ataxia 3 and the Machado Joseph disease,SCA3/MJD)及遗传性痉挛性截瘫4型(hereditary spastic paraplegia 4,SPG4)的诊断及鉴别诊断中的价值。方法:对13例SPG4患者,30例SCA3/MJD及27名年龄匹配的健康志愿者进行DWI检查,经数据后处理获得了表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值。将以上数据分组进行对比研究。结果:SCA3/MJD起病患者的ADC值在中央前回、内囊后肢、大脑脚、桥脑、小脑皮层及小脑白质区域较正常对照组升高。SCA3/MJD未起病患者的ADC值仅在小脑齿状核位置较正常对照组增高。SCA3/MJD起病患者仅在小脑皮层较SCA3/MJD未起病患者ADC值明显升高;SCA3/MJD起病患者的ADC值在内囊后肢、小脑皮层、小脑白质及桥脑较SPG4患者明显增高。在中央前回,SPG4患者的ADC值较正常对照组明显增高。结论:DWI对于SCA3/MJD与SPG4的鉴别诊断有一定的应用前景。

食蟹猴脊髓小脑性共济失调模型的制作研究

目的探讨食蟹猴脊髓小脑性共济失调（SCAs）模型的制作。方法选取2只成年雄性食蟹猴，在不同的时间段内分别采用腹腔注射3-乙酰吡啶（3-AP）、静脉注射3-AP及立体定向注射3-AP损毁小脑中央核群f顶核、齿状核、栓状核）的方法制作食蟹猴SCAs模型，并建立行为学评价体系（行为学评定、取食实验、水平旋转实验等）用于食蟹猴共济运动的评估。结果首先采用腹腔注射3-AP8倍有效剂量并观察12周，行为学评价体系结果未出现有关共济失调的症状；再次采用静脉注射3-AP6倍的有效剂量并观察12周，行为学评价体系结果未出现有关共济失调的症状：最后立体定向注射3-AP损毁小脑中央核群，行为学评价体系结果统计分析显示造模后8周内均较造模前差异有统计学意义（P〈0．05），而造模后12周起又逐步恢复至造模前状态。结论立体定向注射3-AP损毁小脑中央核群方法可以制作食蟹猴SCAs的急性模型，行为学评定、取食实验、水平旋转实验适用于该模型的评价。

马查多-约瑟夫病:从发现到最新治疗进展

马查多-约瑟夫病(MJD)又称为脊髓小脑共济失调3型(SCA3),是常见的显性遗传性共济失调。临床表现多以共济失调为主,伴有眼球活动异常、构音障碍,以及锥体系、锥体外系和精神障碍等症状。近些年来,伴随着基因检测技术的长足进步,该病确诊数量正快速上升,但国内对该病研究报道不多。本文对MJD的疾病发现、神经遗传特征、临床特征及药物治疗进行介绍,并着重对新技术的应用作一综述。

ataxin-3相互作用蛋白的筛选及鉴定(英文)

目的筛选ataxin3的相互作用蛋白并进行互作结构域分析,探讨ataxin3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多约瑟夫病的发病机理。方法应用酵母双杂交系统3,从成人脑cDNA文库中筛选和鉴定突变型ataxin3的互作蛋白,构建ataxin3蛋白羧基端Bait质粒,进行互作结构域分析。应用激光共聚焦显微镜观察ataxin3与所筛到的互作蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果分离获得5个新的ataxin3互作蛋白,视紫红质二磷酸鸟苷解离抑制因子α、苏素1、氨氯吡嗪脒敏感性神经元阳离子通道2和2个未知新序列。结构域分析显示除1个未知蛋白与ataxin3蛋白羧基端互作外,其余4个均与氨基端互作。在SHSY5Y细胞的细胞核内,野生型ataxin3与苏素1共定位,突变型ataxin3所形成的核内蛋白聚合体也与苏素1共定位。结论发现1个未知蛋白可能与ataxin3蛋白羧基端互作,苏素1可能与ataxin3蛋白氨基端互作,苏素化可能参与了ataxin3蛋白的翻译后修饰和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多约瑟夫病的发病过程。

Ataxin-3和MMP-11在结直肠癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨脊髓小脑共济失调症相关蛋白3(Ataxin-3)与基质金属蛋白酶-11(MMP-11)在结直肠癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法选取2015年1月至2017年1月间粤北人民医院收治的80例结直肠癌患者的肿瘤组织标本为观察组,距癌组织>5cm的癌旁正常组织标本为对照组。采用免疫组化法检测两组组织中Ataxin-3和MMP-11的表达,分析Ataxin-3和MMP-11的表达与临床病理特征之间的关系及两者表达的相关性,采用ROC曲线分析Ataxin-3和MMP-11表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果观察组标本Ataxin-3阳性率显著低于对照组,MMP-11阳性率显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组标本Ataxin-3和MMP-11表达与年龄、性别和肿瘤直径无关(P>0.05),与淋巴结转移、Dukes分期和脉管浸润有关(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,Ataxin-3和MMP-11在结直肠癌组织中的表达呈负相关(P<0.05)。ROC分析表明,Ataxin-3和MMP-11的敏感度(Se)分别为0.83和0.90,特异度(Sp)分别为0.83和0.69,AUC值分别为0.89和0.85。结论在直肠癌组织中,MMP-11呈现高表达,Ataxin-3呈现低表达,两者呈负相关关系。Ataxin-3和MMP-11的表达与淋巴结转移、Dukes分期及脉管浸润相关,两者具有较高的诊断价值。