中国急性弛缓性麻痹(AFP)病例中脊髓灰质炎病毒疫苗株VP1区基因变异的研究

为研究中国急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (简称脊灰 )病毒分离株的分子特征 ,为中国继续维持“无脊灰野毒状态”提供理论依据 ,对 2 0 0 2年所有省级疾病预防控制中心送检的脊灰分离株 ,用PCR RFLP法及ELISA法进行型内鉴定。用PCR RFLP法筛查出与疫苗株相比有异常酶切图谱的毒株共 2 4株 ,其中Ⅰ型毒株 1株 ,Ⅱ型毒株 2 1株 ,Ⅲ型毒株 2株 ;用ELISA法筛查出与疫苗株相比有不同的抗原抗体反应的毒株共 2 2株 ,其中Ⅰ型毒株 7株 ,Ⅱ型毒株 4株 ,Ⅲ型毒株 1 1株 ,在 7株Ⅰ型毒株中有 3株为非疫苗类似株 (NSL) ,其余为双反应毒株 (DRV)。随后对这 4 6株毒株进行了全VP1区的基因序列分析。结果表明 :2 0 0 2年脊灰分离株都是疫苗株或疫苗衍生株 ,没有发现野毒株 ,中国继续保持着“无脊灰野毒状态” ;口服减毒活疫苗 (OPV)株与其它野毒株在稳定性性质方面是类似的 ,即通常是不稳定的 ,在人体肠道内有很强的选择性 ;在人体肠道内 ,病毒复制产生的基因变异导致毒力升高 ,是引起疫苗相关麻痹病例 (VAPP)的重要原因 ,但宿主本身的因素也有很大的作用 ;在局部地区有疫苗株的循环或脊灰疫苗衍生株 (VDPV)的存在 ;最终消除疫苗株引起的AFP病例可能还需要脊灰灭活疫苗(IPV)的介入。

急性弛缓性麻痹病例中Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗病毒变异株基因特征分析

研究Ⅱ型脊髓灰质炎（脊灰）疫苗变异株的基因特征，为我国使用口服脊灰减毒活疫苗／脊灰灭活疫苗使用策略，维持无脊灰状态和全球最终消灭脊灰提供科学依据。根据型内鉴定的检测结果，从2000-2001年AFP病例分离到的Ⅱ型脊灰疫苗变异株中选取有聚集性的5株病毒进行全基因组序列测定（贵州省3株、山东省2株），并进行核苷酸、氨基酸同源性分析。贵州省3株病毒全基因组序列完全一致，但与SabinⅢ型病毒发生重组，重组区域在3A区（nt5343-5353）；与疫苗株相比，Ⅱ型区域变异10个碱基，其中VP1区变异4个，与SabinⅡ型株核苷酸同源性为99．56％，氨基酸同源性99．34％；Ⅲ型区域变异9个碱基。山东省2株病毒全基因序列共享16个突变位点，没有发生重组，与SabinⅡ型株相比，VP1区分别变异7个和4个碱基，核苷酸同源性分别为99．22％和99．56％，氨基酸同源性分别为99．0％和99．67％。上述5株病毒在重要的减毒位点nt481、nt2909均发生突变。此研究中5株病毒分属于两个不同的传播链，但是共享nt481、nt2909、nt2992三个突变位点，这3个突变位点不在重组区域内，他们的共同作用可能是影响病毒传播力的重要因素，但目前尚无证据证明脊灰疫苗病毒型间重组会增加病毒的毒力及传播力。

1例脊髓灰质炎疫苗变异株病毒病例监测、诊断、处理分析

讨论脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例的监测、诊断、处理方法与预防脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例发生的策略。根据此病例的个案调查、预防接种相关信息、临床诊断、治疗与脊髓灰质炎实验室病毒检测等方面的资料进行分析。脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例监测、诊断、处理仍需改进,须严格把握Ⅰ+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗接种禁忌证,进一步改进消灭脊髓灰质炎免疫策略,预防脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例的发生。

一株基因Ⅲ型禽呼肠孤病毒变异株的分离及其灭活疫苗免疫原性初步评价

为了解禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)变异株在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,试验采集黑龙江省某企业送检的病鸡关节组织进行病毒分离,通过RT-PCR、序列分析及常见禽类外源病毒检测鉴定,进一步通过对体外复制能力、致病性、血清交叉中和能力及灭活疫苗免疫抗体水平检测,分析其致病性、抗原性和免疫原性。结果显示:成功从病鸡关节组织中分离到1株ARV,命名为ARV-HLJ21-1690401,该分离株位于基因Ⅲ型分支,与基因Ⅲ型参考株ISR5233和42563-4-2005遗传距离较近,氨基酸序列相似性为83.4%和81.7%,而与其他基因型分离株遗传距离较远;该分离株在LMH细胞上增殖良好,对鸡胚和SPF鸡均具有明显的致病性,可引起接种鸡胚90%死亡,接种6周龄SPF鸡可引起100%发病;该分离株具有良好的免疫原性,其制备的灭活疫苗免疫SPF鸡可诱导产生较好的抗体水平。综上所述,研究成功分离到一株具有致病性和良好免疫原性的基因Ⅲ型ARV变异株,为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要理论依据。

中国脊髓灰质炎病毒疫苗株基因特征及其神经毒力的初步观察

中国脊髓灰质炎（脊灰）病毒疫苗株普遍存在基因变异的现象，如重组、点突变等〔１〕。我们选出１０株有代表性的变异株，在具有人脊灰病毒受体基因的转基因小鼠ＰＶＲ－Ｔｇ２１〔２〕中做毒力分析，发现Ｓａｂｉｎ１基因型（ＶＰ１）与野毒基因型（３Ｄ）的重组株显示很强的神经毒力，其ＰＤ５０ｉｎＴＣＩＤ５０（简称ＰＤ５０）值为４．５，而Ｓａｂｉｎ１标准株的ＰＤ５０值大于８．０。另外两株Ⅰ型疫苗株只在关键性核苷酸位点发生突变，只在位点５２５－Ｕ发生突变的一株，其ＰＤ５０值为５．０，另一株在位点４８０－Ｇ及２７９５－Ａ突变，其ＰＤ５０值为５．８，均显示较强的神经毒力。一株Ｓａｂｉｎ２基因型（ＶＰ１）与Ｓａｂｉｎ３基因型（３Ｄ）的重组株，其神经毒力（ＰＤ５０≥５．９）亦明显高于Ｓａｂｉｎ２标准株（ＰＤ５０＞７．５）；而１株Ｓａｂｉｎ２基因型（ＶＰ１）与（Ｓａｂｉｎ１＋Ｓａｂｉｎ２）基因型（３Ｄ）重组株的神经毒力（ＰＤ５０＝７．５０）无明显提高。对Ⅲ型疫苗株的神经毒力分析发现，１株Ｓａｂｉｎ３基因型（ＶＰ１）与Ｎｏｎ－Ｓａｂｉｎ基因型（３Ｄ）重组株的神经毒力，高于仅在核苷酸位点４７２－Ｕ突变的一株疫苗株。值得提出的是，另一株Ⅲ型疫苗?

河北省疫苗变异脊髓灰质炎病毒1例调查分析

目的了解河北省疫苗变异脊髓灰质炎(脊灰)病毒1例的调查情况。方法急性弛缓性麻痹(AFP)病例按个案调查表进行调查,临床分类由省级AFP专家诊断小组会诊并做出最后分类。结果2007年7月河北省发生了1例疫苗变异脊灰病毒病例,临床表现类似脊灰,在对病例及接触者所分离到的脊灰病毒株进行核苷酸序列测定时,发现VP1区与脊灰疫苗(Sabin)株脊灰病毒相比有0.77%～0.88%的核苷酸变异。患儿发病前未接种口服脊灰减毒活疫苗(OPV),但与本村有免疫史健康儿童有接触史。结论各级卫生部门采取了包括AFP病例主动搜索、OPV强化免疫等多项措施,有效地控制了疫情的扩大和蔓延。

海南省脊髓灰质炎病毒疫苗株分离及相关资料分析

目的 了解海南省 1995～ 2 0 0 0年报告的 15岁以下急性弛缓性麻痹 (AFP)病例及密切接触者粪便标本中脊髓灰质炎病毒 (PV)疫苗株的分离情况 ,分析病例流行病学特征、PV型别分布等相关资料。方法 采用试管法分离肠道病毒 ,微量中和试验法鉴定脊灰病毒 ,国家脊灰实验室采用PCR -RFLP法进行型内鉴别。结果 海南省 1995～ 2 0 0 0年报告的 15岁以下急性弛缓性麻痹 (AFP)病例 177例及 6 85名密切接触者的粪便标本中 ,脊髓灰质炎病毒疫苗株的分离率分别为 10 80 %和 2 .48% ,3岁以内的儿童分别占 94 73%、47 10 %。 19例脊灰病毒疫苗株阳性的AFP病例中 ,31.5 8%的儿童无OPV免疫史 ,2 1.0 5 %的儿童有 1～ 2次免疫史 ,仅 47 37%完成了三次OPV全程免疫。其中 9例病例发病后 6 0天残留麻痹。结论 我国已进入“无脊灰状态” ,已无本土脊灰野病毒感染的病例 ,脊灰病毒疫苗株在人群中的循环及其致病性应进一步研究 ,同时 ,继续保持儿童高的OPV免疫覆盖率仍然是十分必要和有效的。

广东省1997～1999年AFP病例中脊髓灰质炎病毒Ⅱ型疫苗衍生株分子生物学特征及致病性分析

目的 了解广东省 1997～ 1999年急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型疫苗衍生株病毒的分子生物学特征及致病性。方法 从脊灰病毒感染的细胞悬液中提取总RNA ,将RT PCR扩增的产物进行RFLP分析及采用Sanger末端双脱氧终止法进行序列测定 ,并结合病例流行病学资料进行分析。结果 1997～ 1999年共从AFP病例中分离到 2 5例脊灰Ⅱ型疫苗株病毒 ,占分离到脊灰病毒病例总数的 37.9% ,其中S2×S3型重组病毒 18例 ,占 72 % ,S2×S1型 1例 ,非重组病毒 6例。S2×S3型重组病毒致残留麻痹 8例 ,占 4 4 .4 %。未服苗儿童感染S2×S3重组病毒致残留麻痹率(6 0 0 % )高于非重组病毒的残留麻痹率 (33 3% )。结论 Ⅱ型疫苗株脊灰病毒普遍存在基因重组现象 ,以S2×S3重组病毒多见 。

湛江市1994～2003年检出脊髓灰质炎疫苗株病毒的急性弛缓性麻痹病例流行病学分析

目的 了解湛江市检出脊髓灰质炎 (脊灰 )疫苗株病毒的急性弛缓性麻痹 (AFP)病例的流行病学特征及疫苗相关麻痹型脊灰 (VAPP)病例的发生情况。方法 对 1994～ 2 0 0 3年检出脊灰疫苗株病毒的AFP病例进行分析。结果 1994～ 2 0 0 3年共报告AFP 199例 ,其中检出脊灰疫苗株病毒16例 ,平均检出率为 8 0 4 %。对检出脊灰疫苗株的AFP病例分析结果显示 :病例以≤ 1岁儿童为主(14例 ) ,男性多于女性 ;地区分布无明显聚集性 ,发病季节高峰在每年 12～ 2月 ;检出的疫苗株以Ⅱ型病毒为主 (9例 ) ,残留麻痹率较高 ;VAPP发生率为 0 37/ 10 0万 ,服苗VAPP发生率为 0 2 2 / 10 0万 ,首次服苗发生率为 1 87/ 10 0万 ,接触者VAPP发生率为 0 15 / 10 0万。结论 脊灰疫苗株病毒可能在湛江市外环境发生循环 ,今后必须提高脊灰疫苗免疫覆盖率 ,以阻止脊灰疫苗株病毒的循环。

脊髓灰质炎病毒疫苗株和野毒株鉴别方法的研究进展

本文总结了实验室鉴别脊髓灰质炎病毒野毒株和疫苗株的方法及最新进展,特别对单克隆抗体(McAb)和核酸技术在鉴别脊髓灰质炎病毒性质的进展作了概述。

检出脊髓灰质炎疫苗株病毒病例的流行病学分析

黑龙江省最后一例脊髓灰质炎(脊灰)病例是在1992年,在无脊灰野病毒引起的临床麻痹病例以后,口服脊灰病毒疫苗(OPV)相关病例(VAPP)的发生就更引起我们的注意.黑龙江省1997-2001年的脊灰监测系统报告的急性迟缓性麻痹(AFP)病例中共检出了27例脊灰疫苗株病病毒例,并未进一步诊断是否为VAPP,本文就黑龙江省1997-2001年分离到脊灰疫苗株病毒的AFP病例情况分析如下.

感染复数对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响

目的观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响。方法分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果病毒感染Vero细胞后48h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达莞。Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)lgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)lgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现在接种后48～96h,3组MOI病毒最高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)lgCCID50/ml。结论不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MO(I0.001)制备疫苗。

RT—PCR快速鉴别脊髓灰质炎病毒野毒株和疫苗株的应用

脊髓灰质炎是一种严重急性瘫痪性的病毒性疾病。该病的预防通过大规模儿童免疫接种(脊灰活疫苗普服)。国外报道每400万剂减毒活疫苗会引起一例疫苗相关的麻痹病例,服减毒活疫菌后环境中也会有疫苗株病毒的扩散。同时,病毒基因组在自然传播过程中不断地在不同程度上发生变异,且有返祖的可能。因而,自然环境中存在疫苗株和野毒株循环流行。

4种甲醛对Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活动力学的比较

目的观察4种甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株的灭活效果。方法用4种甲醛(终浓度为92.5μg/mL)对3批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株进行灭活,微量滴定法测定病毒感染性滴度进行病毒灭活验证实验,绘制灭活动力曲线;酶联免疫吸附测定法检测灭活病毒液D抗原含量。结果 4种甲醛对3批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株灭活后,病毒感染性滴度均成下降趋势。在37°C灭活1 d滴度直线下降1 000 CCID50/mL以上,灭活到第4天均检测不到病毒;灭活后的病毒液D抗原含量回收率均大于80%,且4种甲醛对3批脊髓灰质炎病毒灭活后抗原影响无差异(P>0.05)。结论 4种甲醛对脊髓灰质炎病毒Sabin株样品灭活彻底,对脊髓灰质炎病毒Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分,为甲醛质量控制及供应商筛选提供依据。

脊髓灰质炎病毒Sabin株减毒的遗传学基础的研究进展

用Ｓａｂｉｎ株生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（ＯＰＶ）由１、２、３型组成，疫苗株是由强毒株经连续传代突变而来，对每种疫苗株而言只有少数位点与减毒有关，特别是５′端非编码区的第５个茎环结构。现已证实Ｓａｂｉｎ株病毒在人体中复制时由于病毒的回复突变或第２位点的抑制突变导致毒力回升，可能在疫苗接种者和接触者中引发脊髓灰质炎病例。用聚合酶链式反应和限制性内切酶酶切技术作突变分析（ＭＡＰＲＥＣ）对疫苗中的痕量回复突变进行定量分析已成为可能，正逐步用于从分子水平监测ＯＰＶ生产的连续性，成为评价３型ＯＰＶ质量的一个重要指标。

鉴别脊髓灰质炎病毒野毒株和疫苗株的分子生物学方法的研究进展

鉴别脊髓灰质炎病毒野毒株和疫苗株的分子生物学方法的研究进展刘巍综述王树声古绍文校自５０年代应用脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）灭活或减毒活疫苗以来，脊髓灰质炎（脊灰）的发病率已大幅度下降，为此ＷＨＯ提出２０００年在全球消灭脊灰，我国计划在１９９５年提前消灭，其...

脊髓灰质炎病毒抗原变异的研究进展

脊髓灰质炎(脊灰)病毒为正链单股RNA病毒,属小RNA病毒科,肠道病毒属成员,有三个血清型(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型)。近年来由于单克隆抗体(McAb)和分子生物学等新技术的应用,对该病毒的抗原结构,抗原部位的氨基酸序列,以及易发生突变的区域等均有进一步的阐明,为亚单位疫苗、重组疫苗或合成肽疫苗的开发奠定了基础。本文简要介绍脊灰病毒结构蛋白的免疫原性及抗原变异的研究进展。

52株脊髓灰质炎I型病毒的鉴别分析

脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒引起的以肢体麻痹为主要临床特征的急性肠道传染病。实践证明,脊灰疫苗可有效地预防脊灰的发病,从而使该病成为继消灭天花之后有可能被消灭的第二种传染病。然而,随着脊灰发病的控制,与服用青灰减毒活疫苗(OPV)有关的麻痹型脊灰病例(VAPP)将变得愈加突出。