乳腺癌患者人乳头状瘤病毒感染与癌组织凋亡相关蛋白雌激素受体、孕激素受体、表皮生长因子受体-2表达水平相关性分析

目的:探究乳腺癌患者人乳头状瘤病毒(HPV)感染与癌组织相关蛋白雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及表皮生长因子受体-2(C-erbB-2)表达水平之间关系。方法:选取宜都市人民医院2020年12月~2023年1月134例乳腺癌患者及同期56例乳腺良性病变患者为研究对象,所有患者均行手术治疗,手术期间收集患者病灶组织,术后病理检查测定组织中HPV感染率以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erbB-2蛋白表达情况,分析HPV感染与ER、PR、C-erbB-2表达情况之间关系。结果:乳腺癌组织HPV16/18感染率显著高于乳腺良性病变,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织ER、PR阳性率低于乳腺良性病变,C-erbB-2蛋白阳性率显著高于乳腺良性病变,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌HPV16/18感染患者ER阳性率、PR阳性率低于无HPV16/18感染患者,C-erbB-2阳性率高于无HPV16/18感染患者,差异有统计学意义(P<0.05);多元Logistic回归分析结果显示ER、PR、C-erbB-2阳性率是宫颈癌组织HPV16/18感染影响因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV感染、ER、PR、C-erbB-2表达与乳腺癌发病关系密切,HPV感染后其可能经由调节癌组织凋亡相关蛋白ER、PR、C-erbB-2表达水平介导乳腺癌发生以及进展。

M型磷脂酶A2受体及其抗体在乙肝病毒相关性膜性肾病中的临床意义

目的:研究M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)在乙肝病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus-associated membranous nephropathy,HBV-MN)患者血液及肾组织中的表达情况,并探讨肾组织PLA2R阳性表达在乙型肝炎相关性肾小球肾炎(hepatitis B virus associated glomerulone nephritis,HBV-GN)患者中的临床和病理特点。方法:选取经肾活检确诊的49例HBV-MN患者。检测血清抗PLA2R抗体以及肾组织PLA2R的表达,将患者分为肾组织PLA2R表达阳性组和阴性组,比较两组间临床指标、病理改变、血抗PLA2R抗体表达水平的差异。结果:17例患者存在肾组织PLA2R阳性表达,其中10例患者血清抗PLA2R抗体阳性。肾组织阳性组较阴性组24 h尿蛋白水平升高,血白蛋白水平下降,血清Hbs Ag阳性比例更高(70.5%),肾组织Hbs Ag表达比例更高(71%)。结论:肾组织PLA2R以及血清抗PLA2R抗体在HBV-MN患者中有一定表达,其表达可能与HBV-MN患者血清以及肾组织中Hbs Ag沉积有关。肾组织PLA2R阳性患者肾小球慢性损伤可能相对更重。

世界卫生组织宣称对消除2型脊髓灰质炎取得重大胜利

2015年10月23日，卫生领域专家向世界卫生组织提议，应停止给儿童接种2型脊髓灰质炎疫苗。目前口服疫苗是预防脊髓灰质炎的主要措施，该类病毒株主要有l型、2型和3型。但自1999年以来，世界范围内未再检出2型脊髓灰质炎病毒株。另外，口服疫苗接种者排出的病毒也可能感染未接受疫苗的人群。近期在疫苗低覆盖地区如老挝、乌克兰、马达加斯加及几内亚等地已出现多起与使用疫苗相关感染。

重组人高密度脂蛋白B族Ⅰ型清道夫受体基因腺相关病毒血清型2/1杂合载体在HepG2肝细胞的表达

【目的】构建含绿色荧光蛋白(EGFP)重组人高密度脂蛋白B族I型清道夫受体(SR-BI)基因腺相关病毒(rAAV)2/1杂合载体,观察其在HepG2肝细胞的表达。【方法】以pCMV.SPORT6-SR-BI质粒为模板PCR扩增目的基因cDNA,将其克隆至pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa载体中,经酶切及测序鉴定后,脂质体介导转染BHK21细胞,经G418筛选得到含SR-BI基因的BHK/SR-BI-IRES-EGFP载体细胞株,用携带rep2-cap1基因的辅助病毒(rHsv/r2cl)感染该细胞株。通过细胞孵育、裂解和病毒纯化,得到杂合载体rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒。免疫荧光显微镜检测绿色荧光表达,计算转染效率,Western Blot检测转染后SR-BI蛋白的表达。【结果】酶切鉴定表明pSNAV2.0-SR-BI-IRES-EGFP重组成功,基因测序显示装入pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa质粒中的SR-BI基因正确;成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒载体。转染HepG2肝细胞后免疫荧光显微镜检测最佳MOI值为1×105时,以此值转染HepG2肝细胞荧光高效表达;Western Blot检测未转染组及rAAV2/1-IRES-EGFP组HepG2肝细胞均有SR-BI蛋白表达,rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP组SR-BI蛋白表达水平较rAAV2/1-IRES-EGFP组及未转染组显著增加。【结论】成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP杂合载体系统,转染后SR-BI蛋白在HepG2肝细胞高效表达,为SR-BI生理学作用机制及临床应用的深入研究奠定基础。

M型磷脂酶A2受体抗体及免疫球蛋白IgG亚型在乙型肝炎病毒相关膜性肾病中的检测

目的通过比较原发性膜性肾病(IMN)和乙型肝炎病毒相关膜性肾病(HBV-MN)患者血清中M型磷脂酶A2受体抗体(PLA2R)水平及肾活检组织中IgG亚型沉积情况,探讨PLA2R抗体和IgG亚型对HBV-MN诊断的意义。方法应用ELISA法检测了10例IMN患者和25例HBV-MN患者血清中浓度,以同期7例微小病变肾病(MCD)患者血清检测作为阴性对照。通过免疫荧光方法检查免疫球蛋白IgG亚型在IMN和HBV-MN患者肾活检组织中的沉积。结果在IMN组,患者血清M型PLA2R抗体浓度显著高于HBV-MN组患者,分别是(15.4±7.2)和(10.3±5.7)μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。IgG亚型(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)在IMN组和HBV-MN组患者肾活检组织肾小球毛细血管壁的沉积无显著性区别。结论检测血清M型PLA2R抗体水平对区分HBV-MN和IMN患者具有一定价值,而IgG亚型在HBV-MN和IMN患者肾活检组织的分布则未发现明显不同。

慢性乙型肝炎患者Toll样受体2与乙型肝炎病毒DNA表达水平相关性研究

目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者Toll样受体2(TLR2)与乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)表达水平的相关性。方法:选择CHB患者123例为肝炎组,选择同期健康体检者123例为对照组。检测两组HBV-DNA与TLR2表达水平,以及肝功能指标[包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)等]水平,并进行比较与相关性分析。结果:对照组无检出HBV-DNA,肝炎组均检出HBV-DNA。肝炎组TLR2相对表达水平高于对照组(P<0.05)。肝炎组ALT、AST、AFP、GGT、ALP高于对照组(均P<0.05)。在肝炎组中,Pearson相关性分析显示HBV-DNA水平与TLR2、ALT、AST、AFP、肝脏炎症病理分级、ALP存在相关性(均P<0.05)。Logistic回归分析显示TLR2、ALT、AST、AFP、肝脏炎症病理分级均为CHB患者HBV-DNA水平的影响因素(均P<0.05)。结论:CHB患者多伴有TLR2高表达,与HBV-DNA水平呈正相关,是影响CHB患者病情与肝功能的重要指标。

2型腺相关病毒载体介导的apoAⅠ和SR-BⅠ双基因表达对动脉硬化模型鼠保护效应的研究(英文)

重组腺相关病毒载体(AAV)具有很多安全方面的特性,有利于其在动脉硬化方面的治疗研究.尽管如此,传统的介导单个基因的治疗效果并不是很理想,这都归因于动脉硬化疾病的发生是由于多种基因的缺陷而不是单单某一特定基因.为了克服这个问题,尝试了重组腺相关病毒载体介导的双基因对动脉硬化的治疗研究.实验大鼠分为动脉硬化模型鼠和正常饮食组(即正常对照组),动脉硬化组大鼠被随机分为3组,分别进行AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ,AAV-apoAⅠ,与AAV-GFP尾静脉注射,同时正常饮食组尾静脉注射PBS作为对照.其中目的基因mRNA检测采用RT-PCR方法,蛋白质表达的检测采用Western blotting和ELISA.由饮食诱导的动脉硬化和高胆固醇的大鼠模型在尾静脉注射后8周进行冰冻切片的荧光检测.重组AAV载体显示出较强的表达活性.尾静脉注射治疗8周后,AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ与AAV-apoAⅠ治疗组血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度与AAV-GFP治疗组相比有了明显下降(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇浓度各组之间没有明显差异,彩色多普勒超声检测发现,AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ与AAV-apoAⅠ治疗组的腹主动脉的内中膜厚度相对于AAV-GFP治疗组有了明显下降(P<0.05),血清hs-CRP和SOD的水平有了明显上升(P<0.01),血清MDA的水平有了明显的下降(P<0.01).同时也检测了动脉硬化相关基因mRNA水平的表达.结果显示,rAAV-hapoAⅠ-IRES-hSR-BⅠ治疗后可能是通过抑制NF-κB的活性发挥抗炎作用减少炎症因子的释放,增加动脉硬化板块的稳定性以及降低血浆胆固醇含量的.总之,利用2型腺相关病毒载体介导的基因转移过度表达人载脂蛋白AⅠ和SR-BⅠ可能对饮食诱发大鼠高胆固醇血症和动脉硬化的产生有利影响.这些结果可能为动脉粥样硬化基因治疗提供了一种新的研究思路.

可溶性HLA-G和Toll样受体2、Rta基因在传染性单核细胞增多症中的表达及相关性分析

目的分析可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)和Toll样受体2(TLR2)、EB病毒复制转录激活子(Rta)基因在传染性单核细胞增多症中的表达及相关性。方法选取2018年1月—2019年12月中国人民解放军陆军第八十二集团军医院血液内分泌科诊治传染性单核细胞增多症患儿80例作为观察组,另外选取同期于医院行健康体检的80例健康儿童作为健康对照组,采集健康对照组、观察组(急性期、恢复期)血液样本,检测sHLA-G、TLR2、Rta表达,并分析三者相关性。结果观察组sHLA-G表达水平及TLR2、Rta mRNA表达量均高于健康对照组(t/P=47.670/0.001、44.640/0.001、22.700/0.001)。观察组sHLA-G、TLR2 mRNA、Rta mRNA表达量末期>后期>中期>前期(F/P=7.866/0.001、42.680/0.001、33.681/0.001),sHLA-G、TLR2 mRNA、Rta mRNA表达量急性期均高于恢复期(t/P=10.390/0.001、19.880/0.001、27.000/0.001)。sHLA-G与TLR2、Rta mRNA之间均呈正相关(r/P=0.404/0.001、0.240/0.032),TLR2 mRNA与Rta mRNA呈正相关(0.271/0.015)。结论sHLA-G、TLR2 mRNA、Rta mRNA在传染性单核细胞增多症中均为异常高表达,且三者相关,共同参与该病的发生发展。

采用慢病毒载体干扰TRAF2表达的MH7A细胞稳转株的构建及意义

目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-shRNA干扰序列,通过PCR对引物进行退火,通过双酶切PLKO.1-puro获得线性载体,将线性化载体与退火后引物通过Solution I连接,连接产物导入感受态细胞,涂板,挑取阳性菌落进行测序。构建3种不同的PLKO.1-TRAF2-shRNA慢病毒重组质粒,借助慢病毒包装质粒对对数生长期的HEK 293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液感染MH7A细胞,同时使用嘌呤霉素对TRAF2低表达的MH7A稳转株进行筛选。使用CCK-8法、Western blot、qPCR检测MH7A中肿瘤坏死因子TNF-α诱导TRAF2低表达的MH7A增殖功能及下游信号TRAF2、P65蛋白表达和mRNA水平。结果 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1)、PLKO.1-TRAF2-shRNA(2)和PLKO.1-TRAF2-shRNA(3)慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro,将3个TRAF2-shRNA慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro分别与慢病毒包装质粒导入HEK 293T获得病毒液,将病毒液感染MH7A细胞后,经嘌呤霉素(2.00μg/ml)筛选,2 d得到MH7A稳转株;qPCR和Western blot结果显示,PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株中TRAF2 mRNA和蛋白的表达较阴性对照组明显下降;CCK-8和Western blot结果表明,MH7A中TRAF2敲低后,TNF-α诱导的TRAF2低表达的MH7A细胞增殖和P65的磷酸化水平明显下降。结论 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号活化介导RA滑膜细胞异常增殖中的作用。

携带NMU2R shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其评价

构建稳定表达 NMU2R shRNA的重组腺相关病毒载体,制备并纯化靶向性沉默 NMU2R 表达的高滴度重组腺相关病毒。首先设计合成 NMU2R shRNA,退火形成双链与pAAV-ZsGreen-shRNA质粒 Bam H I和 Hin d III双酶切产物相连接构建形成质粒pAAV-ZsGreen-r NMU2R shRNA,经双酶切和测序鉴定证实,重组质粒克隆正确,将重组质粒转染到AAV-293包装细胞中包装成腺相关病毒载体,成功制备重组腺相关病毒rAAV5-ZsGreen-r NMU2R shRNA,经测定纯化所得rAAV5病毒滴度为1×10^12 vg/mL。最后将rAAV5-ZsGreen-r NMU2R shRNA感染大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12,检测 NMU2R shRNA基因沉默效果,利用空病毒载体pAAV-ZsGreen-shRNA作对照,Real-time PCR及Western Blot方法测得 NMU2R mRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著下降。综上,成功构建了高滴度携带 NMU2R shRNA重组腺相关病毒载体rAAV5-ZsGreen-r NMU2R shRNA。

肾移植后多瘤病毒相关性肾病

背景:多瘤病毒感染是导致多瘤病毒相关性肾病和移植肾失功的重要原因之一。目的:观察分析多瘤病毒相关性肾病的临床特征及其病理学特点。方法:121例患者移植肾活检行多瘤病毒大T抗原染色,发现9例阳性诊断为多瘤病毒相关性肾病,利用SV-40大T抗原免疫组织化学染色,对确认为多瘤病毒相关性肾病患者进行临床、病理、免疫荧光、免疫组织化学观察。结果与结论:多瘤病毒相关性肾病组肾活检时检测霉酚酸-AUC0-12和他克莫司血药浓度均明显高于同期非多瘤病毒相关性肾病组(P<0.05)。9例活检组织经SV-40大T抗原染色,肾皮质和髓质均可见散在的肾小管多瘤病毒阳性。免疫荧光IgG,IgM,IgA,C3,C4,C1q和C4d全阴性,所有肾组织病理均可见肾间质大量聚集的CD3,CD4,CD8,CD68阳性细胞,1例合并排斥反应者,人白细胞DR抗原和白细胞介素2受体高表达;不合并排斥者人白细胞DR抗原和白细胞介素2受体表达多小于5%。9例多瘤病毒相关性肾病患者随访均超过半年,移植肾失功1例,3例好转,2例稳定,3例恶化。结果表明,多瘤病毒相关性肾病的诊断主要依赖于移植肾活检组织病理;利用SV-40大T抗原免疫组织化学染色可提高多瘤病毒相关性肾病的诊断率;移植肾组织C4d、白细胞介素2受体和人白细胞DR抗原检测对多瘤病毒感染相关性肾病的鉴别诊断具有极其重要的临床价值。

腺病毒、腺相关病毒载体转导心肌细胞的研究

目的和方法 :构建含人 β2 肾上腺素能受体 (β2 AR)基因的重组腺病毒 (rAd)和腺相关病毒 (rAAV) ,并感染体外培养的心肌细胞 ,检测目的基因在心肌细胞内的表达。结果 :RT PCR检测结果显示感染的心肌细胞均表达人β2 ARmRNA ;western印迹杂交显示感染的心肌细胞可表达人 β2 AR蛋白 ;放射性配基检测表明两种重组病毒感染的心肌细胞的 β AR密度无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但均高于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :腺相关病毒 (AAV)

鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤与EB病毒感染的相关性

目的检测鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)组织EB病毒(EBV)感染情况,以及EBV基因型别和LMP1编码基因的变异情况,初步探讨ENKTCL的发生与EBV感染的相关性。方法采用原位杂交技术检测75例ENKTCL组织标本中EBER1的转录,筛选鉴定出EBV阳性标本;PCR技术检测EBV 1/2分型,PCR结合限制性片段长度多态性(RFLP)分析检测EBV C/D分型和F/f分型;PCR技术检测LMP1缺失型和野生型基因。结果 75例瘤组织中有67例ERER1阳性,阳性率为89.3%。56例EBV阳性标本的EBV基因分型结果:1型80.4%,2型19.6%;F型87.5%,f型12.5%;C型66.1%,D型33.9%。48例EBV阳性肿瘤组织标本中,野生型8例(16.7%),缺失型40例(83.3%)。结论本地区ENKTCL存在高水平EBV感染;肿瘤组织中感染的EBV的主要基因型别为1型、F型和C型;LMP1基因缺失型可能在ENKTCL的发生中发挥重要作用。

神经肽Y对海人酸致痫大鼠中NR1、NR2A受体的影响

目的探讨重组腺相关病毒载体神经肽Y(r AAV2/1-NPY-EGF-P)干预前后海人酸致痫大鼠海马中NR1、NR2A表达的变化。方法将36只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组、海人酸致痫大鼠组(KA组)以及神经肽Y(NPY)干预组(NPY组)各12只。KA组和NPY组均在海马CA3区注射海人酸建立为慢性癫痫模型,造模成功后,NPY组向脑室注射10l滴度为5×10^(11)μg·mL^(-1)的r AAV2/1-NPYEGFP进行基因转染,KA组不注射病毒,对照组海马CA3区注射等量的生理盐水。各组动物分别于基因转染后2w、4w,取海马保存于液氮。每组动物选取12只,每个时间点6只大鼠,用免疫组化方法检测各组NR1,NR2A的表达情况。对试验结果采用双盲法进行统计,应用半定量积分的方法,把每个时间点的大鼠CA3区NPY的阳性细胞率和阳性细胞着色强度进行分级记分,最后依据两项之积计算其阳性强度(IHS)。结果 2w及4w时KA组和NPY组NR1、NR2A阳性细胞数量、染色强度和IHS分数均高于对照组,(P<0.05);4w时NPY组阳性细胞比例、染色强度和IHS评分均低于KA组,(P<0.05)。结论 NR1、NR2A受体的低表达可能参与了NPY抑制癫痫发作的发病机制。

紫外线抵抗相关基因UVRAG影响狂犬病病毒感染机制的研究

为研究宿主因子紫外线抵抗相关基因(UVRAG)影响狂犬病病毒(RABV)感染的机制,本研究在HEK293细胞中干扰或过表达UVRAG后感染表达mCherry蛋白的重组RABV(rERA-mCherry),于感染后不同时间(24 h、48 h、72 h、96 h)检测上清中病毒的滴度并绘制病毒的生长曲线。结果显示,与转染对照siControl的细胞相比,干扰UVRAG的表达再感染RABV后不同时间细胞上清中的病毒滴度均显著降低(p<0.01),表明干扰UVRAG的表达后抑制RABV的复制能力;而过表达UVRAG后则不影响RABV的增殖能力。干扰293细胞中UVRAG的表达后分别感染表达RABV G蛋白的重组VSV(rERA-G-VSV)及VSV,6 h后利用q PCR方法检测各细胞中的病毒拷贝数。结果显示,与未干扰的细胞相比,干扰UVRAG表达后细胞中rERA-G-VSV基因拷贝数极显著下降(p<0.001);但干扰或者未干扰细胞中VSV基因拷贝数则无显著差别。表明RABV G蛋白是rERA-G-VSV在干扰UVRAG表达细胞中增殖下降的原因且UVRAG影响RABV感染的早期侵入阶段。干扰293细胞中UVRAG表达后感染rERAmCherry,利用酸绕过试验进一步分析RABV感染的阶段;上述干扰细胞感染rERA-mCherry后不同时间点(0、1.5 h、6 h)利用qPCR方法检测病毒基因拷贝数,分析UVRAG影响RABV侵入的具体阶段。酸绕过试验结果显示,经pH7.5的PBS处理后,干扰组的细胞相对于未干扰组细胞中RABV基因拷贝数极显著下降(p<0.001);但pH5.5的酸性PBS处理后两组转染细胞中的病毒拷贝数无显著差异。进一步证明UVRAG在RABV感染早期的侵入阶段发挥重要作用。不同时间点病毒基因拷贝数的qPCR检测结果显示,病毒感染后0、1.5 h两种转染细胞中的病毒拷贝数均无显著差异,但在感染病毒6 h时干扰组的细胞相比于未干扰组的细胞中病毒的拷贝数显著降低(p<0.01)。表明UVRAG影响病毒的胞内运输阶段。利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测UVRAG及其不同结构域蛋白与RABV受体一代谢型谷氨酸受体2(mGluR2)的相互作用关系,结果显示UVRAG的N端aa1~aa147与mGluR2存在特异性的相互作用。以上结果表明,UVRAG影响RABV的胞内运输可能与其和mGluR2的互作相关。本研究初步揭示了UVRAG在RABV感染中的作用,为RABV侵入机制的揭示奠定了基础。

乙肝肝硬化患者HBV-DNA水平与TLR2表达的相关性

目的:探讨乙肝肝硬化患者乙肝病毒(HBV)-DNA水平与Toll样受体(TLR)2表达的相关性。方法:选择2018年2月至2020年3月于我院就诊的乙肝患者320例作为研究对象,根据肝硬化情况分为观察组(合并肝硬化,n=120)与对照组(未合并肝硬化,n=200),检测两组血液中HBV-DNA含量、TLR2表达水平并进行相关性分析。结果:观察组血清HBV-DNA含量高于对照组,血清TBiL、DBiL、ALP、GGT值也显著高于对照组(P<0.05)。观察组单个核细胞的TLR2表达水平显著高于对照组(P<0.05)。Pearson分析显示HBV-DNA、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALP)、直接胆红素(DBIL)、谷氨酰转肽酶(GGT)水平与TLR2表达呈正相关性(r=0.762,P=0.000)。回归分析显示HBV-DNA、TBiL、DBiL、ALP、GGT水平为影响TLR2表达的主要影响因素(P<0.05)。结论:乙肝肝硬化患者伴随有HBV-DNA的大量复制与TLR2的高表达,两者存在正相关性,检测HBV-DNA、TLR2表达水平对指导乙肝肝硬化患者诊疗有重要临床价值。

广东人群PVRL1的多态性与NSCL/P的相关性分析

目的:探讨脊髓灰质炎病毒受体相关基因(PVRL1)的多态性与广东人群中非综合征型唇腭裂(NSCL/P,MIM119530)的相关性。方法:应用聚合酶链式反应和直接测序的方法对71例广东人群NSCL/P患者和100个健康志愿者的PVRL1exon 2和exon 5的多态性进行检测;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱分析的方法对100例广东人群NSCL/P患者和100个健康志愿者的PVRL1α亚型的334、391、1 183位点和β亚型的1082位点进行突变检测。结果:PVRL1的exon 2和exon 5未发现有突变位点;质谱分析没有发现PVRL1α亚型的334、391、1 183位点和β亚型的1 082位点相关的S112A、T131A、G361V、V395M突变。结论:PVRL1的exon 2、exon 5,α亚型334T>A、391A>T、1 183G>A,及β亚型1 082G>T的突变并不参与所研究的广东人群非综合征型唇腭裂的发生。

人生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白1基因重组慢病毒RNA干扰载体的构建及鉴定

目的 探讨构建人类生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白1（Gab1）基因重组慢病毒RNA干扰载体的方法,研究其对人脐静脉血管内皮细胞株EA.hy926的沉默效率.方法 针对人类Gab1基因设计5个靶点的小干扰RNA （siRNA）序列,并分别合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa I和Xho I限制性内切酶双酶切后的GV118载体连接,产生Gab1-RNA干扰（RNAi）转化子,聚合酶链反应（PCR）筛选阳性克隆并进行测序鉴定.将测序正确的Gab1-RNAi、pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染239T细胞,包装产生LV-Gab1-RNAi慢病毒并测定其滴度.将获得的慢病毒分别转染EA.hy926细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达,测定其转染效率;通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后的EA.hy926细胞中Gab1 mRNA表达水平来验证慢病毒干扰载体的基因沉默效率.结果 经PCR分析和测序证实,成功构建LV-Gab1-RNAi慢病毒载体;病毒滴度为3×10^9 TU/ml;荧光显微镜下转染组细胞GFP荧光表达强烈,转染效率达70％以上;RT-PCR证实干扰组细胞Gab1 mRNA表达水平（0.088 ±0.003）较对照（0.947±0.087）组和空白组（0.999±0.067）显著降低（P＜0.01）.结论 成功构建人Gab1基因RNAi慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够的病毒滴度,能明显抑制Gab1基因在EA.hy926细胞株中的表达.

乙型肝炎病毒相关膜性肾病患者抗血清磷脂酶A2受体-IgG特点及其相关因素的临床研究

目的研究乙型肝炎病毒相关膜性肾病(HBV-MN)患者血清抗磷脂酶A2受体(PLA2R)-Ig G阳性率,分析与PLA2R-IgG滴度相关的因素。方法本研究纳入经肾穿刺活检确诊的HBV-MN患者108例,检测血清PLA2R-Ig G滴度、肌酐、白蛋白和24 h尿蛋白定量等,计算肾小球滤过率,分别统计患者肾活检组织中PLA2R及免疫荧光Ig G、C3、C1q及Ig G亚型阳性率,分析年龄、性别、蛋白尿与血清中和肾活检组织中PLA2R-IgG检测结果的关系。结果 108例HBV-MN患者中,血清PLA2R-IgG阳性率为37%,肾组织PLA2R阳性率54. 6%,血清PLA2R-IgG的阳性率和滴度与年龄、性别无统计学相关性(P> 0. 05),与尿蛋白水平相关(χ^2=9. 159,P=0. 010;χ^2=11. 327,P=0. 004);尿蛋白> 3. 5 g/d组患者PLA2R-IgG阳性率显著高于尿蛋白<1g/d及1~3. 5 g/d组(Z=2. 863,P=0. 012和Z=2. 356,P=0. 049)。结论 HBV-MN患者中PLA2R-IgG阳性率较高,阳性率及滴度均与蛋白尿水平相关,尿蛋白越多,阳性率和滴度也随之升高。