肝癌HepG2细胞株胰岛素样生长因子1和表皮生长因子受体基因沉默后放疗增敏及机制

目的：探讨同时沉默胰岛素样生长因子1（IGFl）和表皮生长因子（EGF）二受体基因的抗瘤放疗增敏及机制。方法：分别构建靶向EGFR、IGFlR及两受体的小分子干扰RNA（siRNA-EGFR、siRNA-IGFIR、siRNA-EGFR＆IGFlR），构建与任何基因无同源的阴性对照质粒（siRNA-HK），分别转染48照射肝癌HepG2细胞株。成克隆实验测定细胞存活分数，采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线，求出放射生物学参数D0、Dq、N和cc、口、SFa值。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化，细胞周期及相关蛋白、细胞凋亡及相关蛋白采用蛋白印迹。结果：同时沉默EGFR和IGFlR组与对照组及单基因干扰组相比抑制了细胞增殖、诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期G1／S期的进程，bcl-2和cdk2表达明显下调，而p21和bax表达增加。且同时沉默EGFR和IGFlR组和对照组细胞的D。值分别为0．588、2．0704Gy；Dq值分别为0．5625、2．0307Gy；a值分别为0．515、0．0216Gy^-1。；SF2值分别为0．22、0．619。同时沉默EGFR和IGFIR组Do、Dq和SF2值均减小，a值增大。结论：同时沉默EGFR和IGFlR基因具有更有效地干扰肝癌HepG2细胞株增殖、诱导细胞凋亡，其机制可能与bcl-2和cdk2表达下调和p21与bax表达增加有关，结合干扰多个受体分子可能是一种十分有前途的新的肝癌治疗途经。

阿托伐他汀对人肝癌细胞株HepG2生物钟基因震荡性的影响

目的探讨阿托伐他汀(AT)对人肝癌细胞株HepG2(简称HepG2)生物钟基因与蛋白表达节律的影响。方法基于MOE软件设计AT与生物钟蛋白的分子对接虚拟实验;在HepG2与人骨肉瘤细胞BMAL1::LUC-U2OS(简称U2OS)中分别设置实验组(加入101,102,103,104 nmol/L AT),对照组(加入0 nmol/L AT),空白组(加入0.1%二甲基亚砜),给药24 h后采用CCK-8法检测细胞在不同浓度AT处理后的活力;在不影响正常细胞活力的浓度下,采用免疫印迹(Western blot)法检测脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1)、昼夜节律蛋白2(PER2)、视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγ)、核受体亚家族1组D成员(NR1D1)的蛋白表达水平;采用LumiCycle实验检测细胞生物节律基因BMAL1的震荡情况;通过血清休克实验确定生物钟基因BMAL1,PER2,NR1D1及隐花色素2(CRY2)的节律表达。结果高于100 nmol/L的AT会对HepG2产生细胞毒性。在避免AT对正常细胞活性影响的背景下,选择AT 100 nmol/L浓度进行后续实验。给予AT刺激后,BMAL1和PER2蛋白表达量减少(P<0.05);LumiCycle实验结果显示,实验组(AT 100 nmol/L)的相位较对照组(0 nmol/L)滞后2.696 h(P<0.01)。血清休克实验结果显示,实验组PER2基因的表达较对照组显著下调(P<0.05)。结论AT能调节外周生物钟蛋白与基因的表达,使生物钟核心基因BMAL1表达滞后,PER2基因与蛋白表达均显著下调,具有治疗生物钟紊乱相关疾病、睡眠障碍等的应用前景。

沉默IGF1和EGF二受体基因的肝癌HepG2细胞株的抗瘤放疗增敏及机制

目的探讨同时沉默IGF1与EGF二受体基因的抗瘤放疗增敏以及其病理机制。方法按照特定的方式创造出靶向EGFR、IGF1R以及两受体的小分子干扰RNA,并在一定的条件下设定出同所有基因不产生同源的阴性对照质粒,对其进行转染超过48 h之后选择使用射线对肝癌Hep G2细胞株进行照射。在成克隆的研究过程中对细胞的存活分数进行检测,选择使用单击多靶模型与线性二次函数模型两种方式共同制定出细胞存活曲线,进而获取放射生物学参数DO、Dq、N以及α、β、SF2的数值。结果将两个组之间进行对比我们可了解到,其明显控制了细胞增殖以及起到诱导细胞死亡的作用,减缓G1/S期的发展过程,bcl-2与cdk2两者之间呈现出明显的下降趋势,p21与bax则呈上升趋势。并且同时沉默EGFR与IGF1R组与对照组细胞的D0数值则是0.588与2.070 4 Gy;Dq的数值则是0.562 5与2.030 7 Gy;a值则是0.515与0.021 6 Gy-1;SF2值则是0.22与0.619。这一组的DO、Dq以及SF2值全部呈下降趋势,α值则呈上升趋势。结论同时沉默EGFR与IGF1R基因对于肝癌Hep G2细胞株增殖以及死亡起到干扰的效果,并且病理机制也同bcl-2与cdk2等有着直接的联系,结合多种方法对此疾病进行治疗是目前发展前景比较广阔的方式,可在临床上进行推广及使用。

丹参酮ⅡA对人肝癌细胞Ang-2及其受体Tie-2表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞株Ang-2及其受体Tie-2表达的影响,探讨其抗癌的作用机制。方法体外培养肝癌SMMC-7721细胞株,经不同浓度丹参酮ⅡA作用后,MTT方法测定细胞增殖,免疫细胞化学法测定Ang-2及其受体Tie-2表达,ELISA法检测细胞培养液中Ang-2和VEGF水平。结果丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显抑制作用,并呈剂量依赖性。免疫细胞化学检测显示,随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,Ang-2及其受体Tie-2表达下调,其在1.0μg/mL组作用48h的高表达率分别为33.33%、40.00%,灰度值分别为167.43±12.44和169.05±15.59,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);ELISA法检测显示,丹参酮ⅡA作用组细胞培养上清液中Ang-2和VEGF含量明显下降。结论抑制Ang-2及其受体Tie-2表达可能是丹参酮ⅡA抗肝癌作用的机制之一。

SMMC-7721肝癌细胞膜上β_2糖蛋白I可能的受体

研究β2糖蛋白I(β2GPI)与肝细胞相互作用的过程,以进一步探讨β2GPI在乙型肝炎病毒感染肝细胞过程中所发挥的作用。采用L igand b lot技术,从SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三个细胞株中,筛选出具有与人β2GPI特异结合蛋白成分的细胞。SMMC-7721细胞在40kD处出现一特异染色带,而HL-60及SGC-7901二种细胞则无此反应。在SMMC-7721细胞中存在有与人β2GPI特异结合的蛋白,这种蛋白可能参与了HBV感染肝细胞的过程。

多巴胺受体1在肝细胞癌中的表达与预后的关系及其对肝癌细胞增殖的影响

【目的】通过探讨多巴胺受体1(DRD1)蛋白在肝细胞癌组织的表达,分析其与肝癌患者临床病理因素及预后的关系,初步探讨DRD1的激动剂SKF38393和拮抗剂SCH23390对肝癌细胞株HepG2增殖的影响。【方法】采用免疫组织化学方法检测147例肝细胞癌组织中DRD1蛋白的表达情况,通过统计分析其与临床病理因素和预后的关系,同时使用SKF38393和SCH23390分别作用于肝癌细胞Hep G2,利用细胞增殖实验检测其对细胞增殖率的影响。【结果】在147例肝癌组织中DRD1阳性表达的有89例(60.5%);相关性分析结果显示,DRD1在肝癌中高表达与乙肝表面抗原以及血管侵犯相关(P<0.05)。DRD1蛋白阳性表达的患者无复发生存期(P<0.05)与总生存期(P<0.001)明显较短。Cox多因素分析结果揭示,DRD1表达水平是肝癌患者术后无复发生存期独立危险因素之一(P<0.05),且具有重要的预后预测价值。肝癌细胞Hep G2的细胞增殖实验结果表明SCH23390明显抑制HepG2增殖(P<0.05);SKF38393明显促进HepG2增殖(P<0.05)。【结论】DRD1蛋白在肝细胞癌组织中表达阳性与侵袭转移相关;DRD1可作为预测肝癌患者预后的独立分子标志物;DRD1可能与肝癌细胞的增殖相关。

神经干细胞移植对大鼠慢性脊髓损伤的疗效及对EphA2的影响

目的研究神经干细胞对于慢性脊髓损伤的治疗性作用及其机制。方法用SD大鼠100只分为假手术组(10只),轻度模型组(10只),轻度治疗组(20只),中度模型组(10只),中度治疗组(20只),重度模型组(10只)和重度治疗组(20只),治疗组均进行神经干细胞注射治疗。使用大鼠后肢运动评分进行大鼠运动功能检测,所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓肝癌细胞株受体A2(EphA2)阳性细胞率进行统计分析。结果和假手术组相比,脊髓损伤后,不论模型组还是治疗组,大鼠的后肢运动能力均出现了显著性的下降,治疗组的恢复速度要明显快于模型组。假手术组有几乎无EphA2阳性细胞,模型组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05),中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组EphA2阳性细胞均高于对应模型组。结论神经干细胞移植可升高EphA2水平,尤其对重度压迫患者,有助于行为学上的恢复。

楝酰胺介导IGF1R对HepG2肝癌细胞的抗肿瘤活性

目的研究楝酰胺(Rocaglamide,Roc-A)介导Ras信号通路中IGF1R对人HepG2肝癌细胞的作用机制,并初步探讨其对HepG2肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法将体外培养的人HepG2肝癌细胞经Roc-A处理,通过CCK-8法测定细胞增殖;采用蛋白组学(TMT法)方法进行质谱分析差异蛋白表达;Western blot检测各组细胞中IGF1R蛋白的表达;利用Kaplan Meier数据库分析癌症基因组图谱(TCGA)中IGF1R在肝癌细胞组织中的表达水平与LIHC患者预后的关系。结果 Roc-A可显著抑制人HepG2肝癌细胞增殖;通过蛋白组学质谱分析筛选出显著差异的Ras信号传导通路中IGF1R;Western blot法检测发现Roc-A处理的肝癌细胞中IGF1R蛋白的表达水平与对照组比较明显下降(P<0.05);用GEPIA及Kaplan Meier数据库分析癌症基因组图谱(TCGA)显示IGF1R高表达肝癌患者5年生存率明显低于IGF1R低表达肝癌患者(P<0.05)。结论 Roc-A显著抑制人HepG2肝癌细胞的体外增殖,Rocaglamide通过介导IGF1R可以抑制肝癌细胞的增殖,从而产生抗肿瘤活性,有望成为一种新型的治疗肝癌的药物。

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后EphA2在脊髓前角运动神经元中的表达

目的探讨慢性脊髓损伤后红细胞生成素诱导肝癌细胞株受体A2(EphA2)在脊髓中的变化规律,寻找脊髓损伤后治疗的靶点。方法将40只Wistar大鼠分为假手术组、轻度压迫组(CR 20%)、中度压迫组(CR 40%)、重度压迫组(CR 60%)4组。T_(10)水平脊髓背侧加压,压迫方法采用塑料螺钉渐进性加压,分次完成手术。对大鼠进行后肢运动功能评分及所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓前角EphA2阳性细胞率进行统计分析,比较各组之间的差异。结果EphA2阳性细胞主要存在于压迫远端脊髓灰质中,其中以脊髓前角运动神经元为著。假手术组有很少量EphA2阳性细胞,压迫组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05),中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性压迫性脊髓损伤后脊髓前角运动神经元EphA2表达升高。慢性脊髓压迫可以诱发脊髓EphA2表达升高,对脊髓损伤是一个保护性因素。

CD71抗体靶向转移系统的构建及对细胞的生长抑制作用

目的:构建肝癌靶向性的Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统,并研究其在体外对肝癌细胞的生长抑制作用。方法:体外培养抗转铁蛋白受体(CD71)抗体的杂交瘤细胞株D2C5.6,诱导裸鼠产生腹水并纯化,以水溶性碳二亚胺介导CD71抗体与多聚左旋赖氨酸(PLL)的连接,再与Survivin反义RNA/HSP70双基因载体按比例混匀,得到-PLL-载体系统;转染人肝癌细胞株HepG2后,采用MTT法观察细胞的生长情况。结果:分析型酸性尿素凝胶电泳实验证实抗CD71抗体与PLL成功连接;MTT试验显示,Ab-PLL-Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统处理的HepG2细胞生长明显受到抑制。结论:CD71抗体介导的肝癌靶向转移系统已经成功构建,为肝癌的基因治疗提供了一定的实验基础。

肝、胆

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bei-7404／ADM逆转作用的研究，反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用，表皮生长因子受体信号通路调控人肝细胞癌细胞增殖分子机制的研究，凋亡抑制聋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况，靶向肿瘤血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性抗体的研制，肝癌树突状细胞瘤苗诱导抗肿瘤作用的研究，