脐带血血清培养体系扩增脐带间充质干细胞及其生物学特征的实验研究

目的:通过观察以人脐带血血清为主体的培养体系对脐带间充质干细胞(Mesnchymal Stem Cells,MSCs)体外培养扩增的影响,探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养临床组织工程用干细胞的可行性。建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术,并对其生物学特性进行研究。方法:采用双酶法分离脐带间充质干细胞,并通过传代进行纯化和扩增培养,绘制生长曲线:用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期。结果:成功建立了以人脐带血血清为主体的培养体系的脐带间充质干细胞培养扩增的方法:流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表达CD44、CD29,低表达CD106,不表达造血细胞表型CD14、CD34、CD45和内皮细胞表型CD31,也不表达HLADR:细胞倍增时间为30h,细胞周期分析表明,G0～G1期和+G2+M期所占比例分别为78.84%和11.16%。结论:应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞,培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性,为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。

脐带血血清体外培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响

目的:观察脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响及不良反应。方法:用10%脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞联合自体外周血干细胞移植治疗3例恶性淋巴瘤患者,计数BM-MSC的数目,观察其造血重建时间、不良反应。结果:采用10%脐带血血清培养体系培养BM-MSC,回输时达到2.82-3.96×106/kg,3例患者中性粒细胞>0.1×109/L的时间为移植后第9-12天,血小板>20×109/L的时间为移植后第9-15天,无明显不良反应。结论:10%脐带血血清培养体系是一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法,此法培养的BM-MSC联合APBSC移植治疗恶性淋巴瘤患者,加速了造血重建,未见明显不良反应,具有临床应用价值。

脐带血血清培养人脐带血间充质干细胞

目的探讨利用脐带血血浆分离的脐带血血清(CBS)培养人脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs)的可行性。方法从脐带血血浆分离制备CBS,检测其质量参数。培养2例UCB-MSCs,设置3种培养体系,分为五组,分别采用同体积CBS(CBS-1组、CBS-2组、CBS-3组)、FBS(FBS组)和Elite血清替代物(Elite血替组)培养UCB-MSCs至P8代,显微镜下观察UCB-MSCs形态,绘制细胞增殖倍数曲线。采用流式细胞术检测UCB-MSCs表面标记物。结果成功建立脐带血血浆分离CBS的方法,并完成CBS质量参数检测及性能测试。在3种培养体系中UCB-MSCs增殖倍数存在差异,在CBS培养体系中表现出良好的一致性。UCB-MSCs在3种培养体系中均高表达CD90、CD73、CD105,而低表达CD34、CD45及HLA-DR。结论CBS稳定性良好,可代替FBS用于UCB-MSCs的扩增培养。扩增后的UCB-MSCs形态良好,一致性高,可稳定表达MSCs表型。

用于造血干细胞移植的人骨髓间充质干细胞体外扩增研究

本研究旨在检查4种不同培养液体外培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)的效果,建立一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法,为BM-MSC联合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Ficoll Paque细胞分离液从16例新鲜成人骨髓穿刺液中分离BM-MSC,分别用含10%脐带血血清、胎牛血清、成人血清的DMEM/F12培养液和MesenCult培养液培养,用流式细胞术检测细胞表面抗原,以成骨诱导体系及脂肪诱导体系分别诱导各组BM-MSC定向分化,通过细胞形态观察、免疫表型及免疫化学染色进行鉴定。结果表明:4种培养液都能从成人骨髓液中分离培养出BM-MSC,脐带血血清组和MesenCult组培养的BM-MSC在增殖数量和速度上相似,但均优于FCS组和AB型血清组。脐带血血清组和MesenCult组培养的BM-MSC表达CD29、CD73、CD105的阳性率比FCS组和AB型血清组高(p(0.05),而CD31阳性率低于FCS组和AB型血清组(p(0.05),脐带血血清组和MesenCult组培养的BM-MSC诱导为成骨细胞和脂肪细胞阳性率高于FCS组和AB型血清组(p(0.05)。结论:4种不同培养液能够从成人骨髓液中分离出BM-MSC,脐带血血清组和Mes-enCult组培养的BM-MSC的纯度和体外诱导分化能力比FCS组和AB型血清组高,含有脐带血血清的培养体系具有临床应用价值。